三种亚群PCV-2感染性克隆的构建及体内外感染性试验

摘要

本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)三个亚群(1A、1B和1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8、P0、P4-1,将重组质粒大量提取后,用Sac Ⅱ切出1767bp的PCV-2全基因组,在体外用T4 DNA连接酶使其自身连接环化。用脂质体将连接产物转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法传代,第5代细胞培养物用间接免疫荧光试验(IFA)及PCR方法检测,并同时腹腔接种小鼠。rn 结果：IFA和PCR实验均证实已经获得子代PCV-2病毒,并可在接种小鼠的血液中检测到PCV-2的基因组DNA。表明本试验构建的自身环化的PCV-2全基因组DNA在体内、外均具有感染性,为研究PCV-2的不同基因群毒株与毒力之间的关系打下了基础。