猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因分析

摘要

本文以RT-PCR检测猪病料中的乙型脑炎病毒，并对阳性病料作病毒分离与纯化。通过空斑减数试验，测定分离株和P3株的中和指数。克隆并分析了分离株的prM-E基因序列，将推导的E蛋白序列与GENBank中乙型脑炎病毒的E蛋白序列作比较分析。以E基因序列为基础，确定分离株的基因型。结果显示，检测的9份病料中有3份呈乙型脑炎病毒阳性，并从其中一份中分离出1株病毒.中和指数测定中，P3株中和指数为12，而分离株为2.prM与E基因序列比较中，分离株与P3和Beijing-1的同源性低，最高仅为87.7％;而与JEV/sw/Mie/40/2004、KV1899、SH17M-07和YN79-Ba083的同源性高，最低为96.6％.进化分析表明，分离株属基因I型.E蛋白分析显示，分离株与基因I型乙型脑炎病毒E蛋白高度同源，且与SH-53，JEV/sw/Mie/40/2004和N22/Viet Nam/2002/swine blood的E蛋白序列完全相同，而与基因Ⅲ型E蛋白存在5个共同的氨基酸变异位点.结果表明，从猪病料中分离出的病毒株属乙型脑炎病毒基因I型，并与基因Ⅲ型不同分离株在E蛋白上存在共同的氨基酸变易位点.