食物中毒性弧菌三联融合毒素基因克隆与表达

摘要

本研究采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因，即副溶血弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联，得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为F7)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6％.FT的开放阅读框架全长3225 bp，编码1074个氨基酸残基，预测分子量为120.4kDa。将，7亚克隆至表达载体pET-22b(+)中，转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达，经SDS-PAEG分析，融合蛋白分子量与预测的相符.终浓度为1mmol/L的IPTG，37℃诱导4 h，融合毒素蛋白表达量最高，经薄层扫描分析，此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49％.三联融合毒素基因的成功克隆与表达，为进一步建立多种食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法奠定基础.