DsRNA介导的大豆疫霉瞬时基因沉默体系的建立

摘要

本文选用了大豆疫霉的一个无毒基因Avr3a和细胞周期调控子CDC14作为研究对象，将外源合成的特定dsRNA转化到PEG/CaC12介导的原生质体中来诱导特定基因的沉默并建立了大豆疫霉的瞬时转化体系。dsRNA介导的瞬时转化所得到的转化子在第8d开始诱导特异基因的沉默，12d左右沉默效率最高，第17天开始恢复，沉默效率在50%以上的转化子约占75%以上，基因沉默效率最高可以达到95%以上。表型分析证明Avr3a沉默的转化子接种含有对应助s3a的植株，其致病力明显强于受体菌株;CDC14的沉化子不能形成游动孢子囊。分析证明Avr3a沉默的转化子中CDC 14表达没有显著变化，表明dsltrrA介导的基因沉默具有序列特异性。本研究表明dsRNA介导的大豆疫霉瞬时基因沉默系统可以用来分析基因的功能，为大豆疫霉功能基因组研究提供了重要工具。