海南番木瓜环斑病毒全长cDNA克隆及其侵染性克隆构建

摘要

为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus, PRSV)的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,本研究利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术(RACE)对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物(PRSV-HN2)的基因组cDNA进行了全序列测定.PRSV-HN2全长cDNA包含10326nt(不包括3'端的polyA,GenBank登录号为KF791028),能编码3346个氨基酸.对PRSV-HN2基因组核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了结构和功能分析,结果表明,其与其它23个PRSV分离物的核酸序列相似度达81％-91％,氨基酸相似度为88％-94％.利用酵母同源重组系统成功构建其侵染性克隆载体并通过农杆菌转化与侵染,最终获得其侵染性克隆.这为在分子水平上研究PRSV遗传变异、侵染及致病机理奠定理论基础.