锌指介导细胞基因组的特异性靶向修饰

摘要

目的:西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指的合成与鉴定。rn 方法:采用overlarp PCR法拼接合成西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指两对tyrZ131-DD／RR及tyrZ131-KK／EL，将锌指转染GFP突变的转基因293T细胞，进行锌指有效性验证。转染后细胞在荧光显微镜下观察是否出现绿色荧光，同时应用流式分析修复效率。rn 结果:合成两对锌指，测序证实锌指序列正确。将两对锌指转染293T细胞模型72h后，可见细胞开始表达绿色荧光蛋白。流式细胞分析发现锌指tyrZ131-KK／EL的修复率高达0.29％，tyrz131—DD／RR的修复效率为0.23％。但镜下观察，前者细胞的死亡率更高。rn 结论:锌指tyrZ131-DD／RR及tyrZ131-KK/EL均能特异性识别酪氨酸酶基因特异序列，并发生切割并在修复质粒的作用下进行修复，证实为有效锌指对。