猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法的建立和应用

摘要

为了研究检测猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法，本试验采用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)，分别设计了六条针对CSFV 5’端保守基因特异引物，经条件优化后，建立猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法。结果表明，在63℃恒温条件下45分钟，就能很好的扩增出CSFV目的片段：RT-LAMP产物经XHhoI酶酶切确定产物即为目的片段：将CSFV和其它六株与CSFV同属的病毒进行RT-LAMP扩增，结果只有CSFV得到阳性结果，其它均为阴性，验证了该方法的特异性;敏感性试验表明，RT-LAMP对CSFV的最低检测量为1×101个基因拷贝，是常规RT-PCR敏感度的100倍;用CSFV RT-LAMP法和RT-PCR检测方法分别对27份临床样本进行检测，结果证明CSFV RT-LAMP与RT-PCR方法检测结果的符合率为92.6%.