猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Poreine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus，PRRSV)核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein，N蛋白)的表达是通过非连续性转录合成的亚基因组(subgenomic，sg)mRNA翻译而来。rn 但位于亚基因组前导序列中的2个AUG均不能作为N蛋白翻译的起始位点，其翻译使用的是N开放阅读框(ORF)中的首个AUG，因此，本研究旨在感染性克隆的基础上研究N蛋白的翻译起始位点。我们实验室已有在ORF6和ORF7之间插入酶切位点的感染性克隆pORF673，该突变克隆中含有3个潜在的AUG，分别构建了pORF673中N蛋白的其中2个潜在的起始密码子AUG突变的全长克隆，转染MARC-145细胞。这些突变体都能够拯救出子代病毒，其中2个突变病毒的N蛋白的前11个氨基酸完全改变，这些突变病毒都能够在MARC-145细胞上稳定传代。rn 经RT-PCR分析子代病毒的N基因序列及其亚基因组序列，结果表明N蛋白的翻译偏向于使用其前导序列后的第1个潜在的AUG。如果后者移码，则病毒可以自身修复，这是首次发现病毒有矫正ORF的功能。本研究为N蛋白N端插入标签作为标记疫苗以及进一步研究N蛋白结构与功能奠定了基础。