离体情况下雌激素对表皮干细胞增殖与迁移的影响

摘要

目的：探讨雌激素对离体培养表皮干细胞增殖与迁移的作用。rn 方法：密度梯度离心法培养正常人的表皮干细胞（hESCs），流式细胞仪检测培养的第二代细胞整合素?1，CK10、CK14、CK19抗原表达以鉴定ESCs。实验分3组：（1）单纯ESCs培养组即空白对照组（n=8），即单纯培养ESCs（A组）。（2）雌激素组（n=9）为表皮干细胞专用培养基（即Epilif培养基）中加入乙烯雌酚（Diethylstilbestrol）配成浓度为0.1nmol/l（B 组）；（3）雌激素受体阻断剂组（n=8）为表皮干细胞专用培养基中加入雌激素受体拮抗剂雷洛西芬（Raloxifene hydrochloride）配成浓度为10nmol/l（C 组）；（3）：在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的ESCs以制备宽度为100um的"离体单层表皮干细胞损伤"模型。模型制备后24、48和72h，倒置显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的ESCs细胞数，并用SigmaScan Pro5.0软件计算创面愈合率，用MTT法检测表皮干细胞的增殖分化活性，判断雌激素对ESCs分裂增殖活性的影响。rn 结果：流式细胞仪检测第二代ESCs整合素β1，CK 19，CK 14和CK 10抗原阳性率（分别是96.63%，95.47%，94.27%和1.32%）。在伤后24h，空白对照组、雌激素组和雌激素受体阻断剂组越过创缘进入创面的细胞分别为（11.4±0.45），（33.6±0.34）和（8.5±0.75）个/高倍视野；48h分别有（38.5±0.45），（67.5±0.24）和（27.5±0.35）个/高倍视野；72h分别有（78.5±0.45），（117.5±0.35）和（63.5±0.35）个/高倍视野。3组伤后72h创面愈合率分别为（48.00±0.06）%，（69.00±0.05）%和（35.00±0.05）%。上述指标雌激素组与空白组和雌激素受体阻断剂组之间具有显著差异（P＜0.01)，空白组与雌激素受体阻断剂组比较，差异性显著（P＜0.01）。rn 结论：雌激素具有促进表皮干细胞分裂增殖和迁移的能力，并藉此可能参与皮肤诸多生物学作用。