离体情况下雌激素对表皮干细胞增殖与迁移的影响

摘要

目的：探讨雌激素对离体培养表皮干细胞的生物学作用。rn 方法：密度梯度离心法培养正常人的表皮干细胞(hESCs)，流式细胞仪检测培养的第二代细胞整合素β1，CK10，CK14，CK19抗原表达以鉴定ESCs。实验分3组：(1)：雌激素组(n=9)为表皮干细胞专用培养基(即Epilif培养基)中加入乙烯雌酚(Diethylstilbestrol)配成浓度为0.1 nmol/l(A组);(2)：雌激素受体阻断剂组(n=8)为表皮干细胞专用培养基中加入雌激素受体拮抗剂雷洛西芬(Raloxifenehydrochloride)配成浓度为10 nmol/l(B组);(3)：单纯ESCs培养组即空白组(n=8)单纯培养ESCs(C组)。流式细胞仪检测雌激素组、雌激素受体阻断剂组及空白组的ER-B的抗原表达情况。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的ESCs以制备宽度为100 μm的“离体的单层表皮细胞损伤”模型。模型制备后24、48、72h，倒置显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的ESCs细胞数，并用sigmaScan pro 5软件计算创面愈合率，用MTT法检测表皮干细胞的增殖分化活性，判断雌激素对ESCs分裂增殖活性的影响。rn 结果：流式细胞仪检测第二代ESCs整合素B1，ck19，ck14和以ck10抗原阳性率(分别是96.63%，95.47%，94.27%，1.32%)。雌激素组、雌激素受体阻断剂组和空白组的ER—B抗原阳性表达率(66.43%，43.47%，54.27%)。雌激素组、雌激素受体阻断剂组和空白组越过创缘进入创面的细胞在伤后24小时分别(33.6±0.34)，(8.5±0.75)和(11.4±0.45)个/高倍视野;48h分别有(67.5±0.24)，(27.5±0.35)和(38.5±0.45)个/高倍视野;72h分别有(117.5±0.35)，(63.5±0.35)和(78.5±0.45)个/高倍视野。3组伤后72小时创面愈合率分别为(69.00±rn0.05)%，(35.00±0.05)%，(48.00±0.06)%。上述指标雌激素组与空白组和雌激素受体阻断剂组具有显著差异(P<0.01)，空白组与雌激素受体阻断剂组比较，差异性显著(P<0.01)。rn结论：雌激素具有促进表皮干细胞分裂增殖和迁移的能力，并藉此可能参与皮肤损伤的修复活动。