狂犬病病毒核蛋白的体外表达及其免疫原性研究

摘要

目的：研究狂犬病病毒核蛋白在保护性免疫应答中的作用。方法：RT-PCR获得狂犬病病毒CVS-11株的核蛋白全长基因，并克隆至原核表达载体pET30a(+)，获得重组表达质粒pET30a-N，转染BL21（DE3）菌株，在体外进行核蛋白的表达，Ni2+柱纯化。纯化后核蛋白以氢氧化铝为佐剂免疫Balb/c小鼠，ELISA检测小鼠特异性抗核蛋白抗体，同时进行病毒攻击法以评价核蛋白所诱导的保护性免疫应答情况。结果本研究成功构建狂犬病病毒核蛋白重组表达质粒pET30a-N，并在体外获得高效表达和纯化核蛋白，目标蛋白主要以包涵体形式存在，占菌体总蛋白的35%左右。ELISA检测小鼠血清中抗核蛋白特异性抗体滴度对数的GMT值为 3.81± 0.22。加氢氧化铝佐剂的重组核蛋白免疫小鼠后进行狂犬病病毒CVS株攻击保护率可达41.7%。结论：狂犬病病毒核蛋白获得成功表达和纯化，数据显示具有良好的免疫原性，并可对狂犬病病毒攻击产生一定的保护效果。