曲格列酮对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞合成纤维连接蛋白和I型胶原纤维的影响

摘要

目的：通过观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activated receptor γ，PPARγ)激动剂干预对转化生长因子(transforming growthfactor-β1，TCF-β1)诱导的肾小管上皮细胞细胞外基质合成的影响，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法：将不同浓度曲格列酮预处理肾小管上皮细胞(HK-2细胞)，随后予以5 mg·L-1TGF·B1刺激24 h，利用LDH释放试剂盒检测曲格列酮对细胞的毒性作用，同时通过定量荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)方法，观察PPARγ激动剂曲格列酮干预下TGF-β1诱导的HK-2细胞外基质(extracellular matrix，ECM)主要成分I型胶原(collagentype I，Col I)和纤维连接蛋白(fibronectin，FN)mRNA合成的量效关系。结果：在曲格列酮浓度10μM以下时，曲格列酮对HK-2细胞无显著的毒性作用。进一步分别以曲格列酮1μmol·L-1、2.5μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1预处理2 h，再加入5 mg·L-1TGF—β1作用24h后收获HK-2细胞，提取细胞总RNA，Real-time PCR检测细胞I型胶原(Col I)和纤维连接蛋白(FN)mRNA表达量。单独曲格列酮作用下并没有增加HK-2细胞ECM的表达，而单纯TGF-β1刺激下Col I和FN表达明显上调，曲格列酮提前干预下FN及Col I表达下降，曲格列酮在2.5μmol·L-1浓度起可显著下调FN mRNA表达(P<0.05);而仅在5μM以上浓度组可显著下调I型胶原mRNA表达(P<0.05)。结论：在mRNA水平PPARγ激动剂干预能抑制对TGF-β1诱导的HK-2细胞ECM的增加，具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用。