调控BAG-1的新基因的克隆、鉴定及其功能研究

摘要

目的：介绍了发现的一个新基因FLJ20420,可调控BAG-1表达,在进化中具有一定的的保守性.FLJ20420可能是一个能上调BAG-1并参与肿瘤形成和控制肿瘤细胞凋亡的基因.目的研究细胞凋亡在肿瘤发生、发展和耐药方面的作用.rn 方法：应用Southwestern杂交技术,以BAG-1的启动子为探针筛选人类Hela eDNA基因文库.应用PCR技术构建表达载体,并转染入Hela、NIH3T3、293等细胞中.转染后细胞总RNA的提取和Northern杂交.rn 结果：以BAG-1的启动子为探针筛选人类Hela cDNA基因文库后发现一个调控BAG-1表达的新基因FLJ20420.这个基因的编码区与小鼠和大鼠的有着大约87％的同源性,提示其在进化中的保守性.应用NORTHERN杂交技术,发现FLJ20420在除心肌和骨骼肌外的大多数正常组织中低表达,而在大多数肿瘤组织和细胞株中高表达.用纯化的FLJ20420蛋白作胶移动试验,证实FLJ20420能与BAG-1启动子区特异性结合.通过免疫荧光技术,证实FLJ20420能定位于细胞浆和细胞核,进一步证实它可能是BAG-1的转录调控蛋白.rn 结论：BAG-1基因是一个多功能的抗凋亡基因,也和许多肿瘤的发生、发展有关.为了探讨其在肿瘤发生中的确切的机制,将其启动子区筛选Hela细胞cDNA文库发现了这个cDNA,而这个cDNA编码一个新的蛋白,因此,FLJ20420可能是一个新型的调控BAG-1的基因.