5/6肾切除大鼠血清对肾小管上皮细胞特性的影响

摘要

目的：本研究观察5/6肾切除大鼠12周血清对体外培养肾小管上皮细胞特性的影响及可能的分子机制，探讨来自血液循环的刺激在慢性肾脏病进展中的作用。方法：选用SD雄性大鼠，随机分为2组:1)、第一组为正常对照组，第二组为5/6肾切除大鼠模型组。2组大鼠第12周腹主动脉取血留取血清及肾组织标本，行血肌酐、尿素氮及病理鉴定造模是否成功。2)、体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2)同步后，分为3组:① 10%胎牛血清组、②10%正常大鼠血清组、③10%5/6肾切除大鼠血清组;各组培养48h后，TRIzol法提取细胞总RNA， RT-PCR法检测各刺激组细胞黏附连接重要分子E-cadherin mRNA;细胞消化离心提取细胞总蛋白，western-blotting检测各刺激组E-cadherin、 wnt3、β-catenin、ZEB-1蛋白表达水平。结果：5/6肾切除大鼠肾组织病理切片见:局灶肾小球硬化、间质炎细胞浸润、小管萎缩、间质纤维化。提示造模成功，5/6肾切除大鼠12周的血清为肾功能不全血清。RT-PCR结果提示:与胎牛血清组及正常大鼠血清组相比，5/6肾切除大鼠血清刺激48h后HK-2细胞E-cadherin mRNA表达下调;western-blotting结果提示:与胎牛血清组及正常大鼠血清组相比，5/6肾切除大鼠血清刺激HK-2细胞48h后E-cadherin表达下调;wnt3、β-catenin及ZEB-1表达上调。结论：5/6肾切除大鼠12周血清刺激体外培养肾小管上皮细胞可引起E-cadherin表达下调。