华支睾吸虫富甘氨酸2a类抗原Cs4重组蛋白的免疫学特性与定位

摘要

目的:对华支睾吸虫富甘氨酸2a(GRA2a)类抗原Cs4重组蛋白(rCs4)进行免疫学特性分析,并对GRA2a类抗原进行组织定位.方法:使用蛋白质印迹法分析rCs4与华支睾吸虫病患者混合血清的免疫反应性,并分析GRA2a类抗原的分泌性.应用ELISA法检测rCs4免疫小鼠血清中抗rCs4的抗体水平,并观察0-44周的华支睾吸虫感染兔血清中抗rCs4特异性抗体的消长.通过免疫荧光实验(IFA)对华支睾吸虫GRA2a类抗原进行组织定位.结果:纯化的rCs4可被华支睾吸虫病患者混合血清识别.rCs4单抗(mAb Cs4-31)与华支睾吸虫排泄分泌抗原(ESA)和可溶性抗原(AWA)在Mr 26 000与55 000之间分别有13、15个反应条带,均呈阶梯状分布.经ELISA检测,rCs4免疫小鼠抗rCs4的吸光度(A450值)平均值为0.438,健康对照小鼠抗rCs4的A450值分别为0.071；rCs4免疫小鼠血清抗rCs4的IgG效价达1∶64 000;感染兔的抗rCs4特异性抗体平均水平自感染第4周开始上升,于第6周达到高峰,此后逐步递减,至第20周已呈较低水平.IFA检测发现,GRA2a类抗原定位于华支睾吸虫成虫的表皮.结论:Cs4蛋白是华支睾吸虫在感染早期的分泌型蛋白,具较好的抗原性.GRA2a类抗原定位于华支睾吸虫成虫表皮.