Kigamicin生物合成基因簇中ORF60的功能研究

摘要

Kigamicins是从防线菌中分离到的具有抗细菌和抗肿瘤活性的天然产物.其独特的生物学活性表现为能够抑制营养饥饿状态的肿瘤细胞,而对正常营养生长状态的细胞没有影响.因此,Kigamicins可以做为开发特异性抗癌药物的重要来源.本论文通过对Kigamicins的生物合成途径的研究,而研究过程中着重阐明kigamicin合成过程中新物质的化学结构.从而为进一步了解Kigamicins这类聚酮化合物的结构与功能关系提供依据.本论文采用PCR-Targeting技术在构建好的含有kigamicin生物合成基因簇完整骨架的整合型质粒的pLL59上敲除基因orf60并命名为pLL200，然后通过结合转移将质粒pLL200以及质粒pLL68(含有激活因子)转入天蓝色链霉菌ML154，得到突变菌株ML20068。用HPLC-MS对ML20068发酵产物进行检测，发现了荷质比为538的次级代谢产物。随后50L液体发酵、大孔树脂的吸附与解吸、反相硅胶柱分离、HPLC制备纯化出538新组分12.6mg。然后把纯化得到的新组分做核磁共振对其结构进行解析用来试阐述orf60的基因功能。