鹅β-防御素3基因的分离、鉴定及其表达产物的生物学特性

摘要

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高，为100％。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEx-6p-1的BamH Ⅰ和Sa l Ⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD3。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，于37℃用IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳表明，重组鹅AvBD3蛋白在原核高效表达(分子量约31 kDa)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性，结果显示，重组鹅AvBD3蛋白具有广谱的抗菌活性，对12种细菌，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD3蛋白的抗菌活性。此外，该重组蛋白的溶血活性极低，并对酸碱度具有较高的稳定性。