滑膜细胞

摘要： 背景:骨关节炎患者关节软骨和关节液中骨桥蛋白mRNA水平及蛋白表达均较正常人明显增高,但是骨桥蛋白在膝骨关节炎发展进程中的作用及其具体机制在既往文献中尚未阐明.目的:探讨膝骨关节炎患者膝关节滑膜细胞中骨桥蛋白水平及其与骨关节炎严重程度的关系,并通过转录组和蛋白质组测序,进一步阐述其影响骨关节炎进展的机制.方法:选取2019年诊治的42例原发性膝骨关节炎患者,根据胫股关节受累情况,分为单间室骨关节炎组和双间室骨关节炎组.获取滑膜标本及关节液标本,PCR法检测滑膜标本中骨桥蛋白基因在细胞中的表达丰度,ELISA法检测关节液标本中骨桥蛋白水平.应用酶消化法获取培养人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞,用骨桥蛋白siRNA干预24 h后,对样品进行转录组和蛋白质组检测.结果 与结论:①与单间室骨关节炎组相比,双间室骨关节炎组关节滑膜及关节液中骨桥蛋白均升高,差异有显著性意义(P<0.05);②体外培养人膝骨关节炎滑膜成纤维样细胞,通过siRNA敲减骨桥蛋白后,转录组与蛋白质组定量研究分别鉴定了14662个转录本和3608个蛋白,其中5种蛋白的转录组与蛋白质组分析结果显示同步下降,2种蛋白的转录组与蛋白质组分析结果显示同步上升;③结果 表明,骨桥蛋白对骨关节炎产生不利影响,其机制可能是通过促炎作用和胰岛素样生长因子结合蛋白3对软骨的负面作用.

摘要： 目的:探讨塞来昔布对类风湿关节炎(RA)大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路及滑膜细胞的影响。方法:将大鼠分为正常对照组,建立RA模型(RA组),建立RA模型后灌胃塞来昔布(实验组),RA组及实验组大鼠建立RA大鼠模型,检测大鼠关节炎症指数后,通过多种方法检测病理、滑膜细胞凋亡、TNF-α蛋白水平及阳性表达。结果:23 d、30 d时与RA组相比,实验组关节炎症指数显著降低,且RA组、实验组关节炎症指数显著高于对照组;对照组滑膜细胞呈单层生长,未出现增生,关节腔内无渗透,未见明显炎症。RA组滑膜组织出现坏死,大量炎症表达,明显滑膜增生,软骨损伤。实验组经塞来昔布灌胃处理后,滑膜增生减少,只见少量炎症浸润;对照组滑膜细胞凋亡率为6.65%,高于RA组1.73%,实验组滑膜细胞凋亡率为14.65%,高于RA组;对照组滑膜组织中TNF-α表达量少于RA组,实验组滑膜组织中TNF-α表达量少于RA组。结论:塞来昔布能改善RA大鼠关节炎症指数,促进滑膜细胞坏死,降低TNF-α表达,改善病情。

摘要： 目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制CC趋化因子受体5(CCR5)的表达,以探讨CCR5 siRNA对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜细胞增殖与细胞周期的影响及其可能机制。方法采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,分离和培养RA大鼠滑膜细胞,通过Lipofectamine 2000将CCR5 siRNA和NC siRNA载体转染入细胞以判断其转染效率。并将体外培养的滑膜细胞分为4组:RA组(RA大鼠滑膜细胞)、RA+NC组(加入脂质体包裹的NC siRNA)、RA+mock组(加入脂质体)、RA+siRNA组(加入脂质体包裹的CCR5 siRNA)。利用RNA干扰技术抑制RA大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,再用qRT-PCR和Western Blot检测各组滑膜细胞CCR5、细胞周期相关基因(Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1)mRNA和蛋白表达情况;MTT检测各组滑膜细胞增殖情况;PI单染检测滑膜细胞细胞周期分布情况。结果与RA组比较,RA+siRNA组CCR5 mRNA表达水平(1.16±0.21)比(1.85±0.61)、CCR5蛋白水平(0.19±0.01)比(0.44±0.05)均明显降低(P0.05)。结论CCR5基因沉默可抑制滑膜细胞的生长,使G0/G1期滑膜细胞比例增加,S期细胞比例减少,还可通过调节细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1的表达来调节细胞周期的分布,进而影响滑膜细胞的增殖。

摘要： 目的:研究类风湿性关节炎状态下大鼠滑膜细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达及功能的变化,并探讨其与炎症的关系。方法:(1)在体实验采用雌性Wistar大鼠,随机分为对照组和造模组(n=12),造模组建立II型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,Western blot检测大鼠滑膜细胞P-gp的表达。(2)动物细胞体外培养实验采用II型胶原酶法分离培养正常大鼠原代滑膜细胞,分为正常培养液(DMEM)组和巨噬细胞条件培养液(macrophage-conditioned medium,MCM)组,源于RAW 264.7细胞的MCM模拟体内炎症状态,Western blot法检测大鼠滑膜细胞P-gp蛋白表达水平,RT-qPCR法检测大鼠滑膜细胞多药耐药基因1a(multidrug re⁃sistance gene 1a,Mdr1a)和Mdr1b的mRNA表达水平,以罗丹明123(rhodamine 123,Rho123)及氨甲蝶呤(metho⁃trexate,MTX)为探针评价细胞中P-gp的功能。结果:与对照组大鼠相比,CIA造模组大鼠滑膜细胞P-gp表达显著降低(P<0.01);II型胶原酶消化法可以成功获得大鼠原代滑膜细胞,免疫荧光显示第3代滑膜细胞98%以上表达vimentin蛋白;维拉帕米(50和100μmol/L)能显著增加大鼠滑膜细胞中Rho123的浓度(P<0.01);与DMEM组相比,MCM组滑膜细胞Rho123摄取量显著升高(P<0.01),MTX摄取量亦显著升高(P<0.05),分别增加了40%和37%,P-gp蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Mdr1a的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Mdr1b的mRNA表达水平无显著差异。结论:类风湿性关节炎状态下大鼠滑膜细胞P-gp表达及功能显著降低,可能与局部炎症微环境有关。

摘要： 滑膜细胞是类风湿关节炎(RA)发病过程中主要作用细胞,其增殖与凋亡的变化与RA炎性反应、骨侵蚀密切相关。RA属中医学痹证范畴,中药在治疗RA的过程中发挥了重要作用。近年来有关中药治疗RA作用机制的研究日益深入,从血清药理学角度出发,归纳总结有关中药含药血清对RA滑膜细胞的作用机制研究,为促进中医药现代化,拓展临床应用提供参考。

摘要： 目的:观察青藤碱对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖及炎症因子的影响。方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,进行如下分组,青藤碱不同浓度组(浓度梯度为0、80、160、240、320 mg/L)、IL-1β(10 ng/mL)+青藤碱不同浓度组(浓度梯度为0、80、160、240、320 mg/L)。通过CCK-8方法检测不同浓度青藤碱对大鼠滑膜细胞株RSC-364在IL-1β诱导下增殖率的影响,并通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测IL-6、MMP3的含量。结果:青藤碱浓度与大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖率呈负相关,浓度增加,增殖率降低,其增殖明显呈剂量依赖性(P<0.05);在10 ng/mL IL-1β诱导下,加入不同浓度青藤碱处理,RSC-364细胞增殖减少(P<0.05),RSC-364细胞炎性因子IL-6、MMP-3的表达下调(P<0.05)。结论:不同浓度青藤碱抑制IL-1β诱导的RSC-364增殖,抑制炎性因子IL-6、MMP-3的分泌,这可能与其在临床中治疗强直性脊柱炎和类风湿关节炎的作用机制有关。

摘要： 目的·构建低毒性的关节滑膜高效率siRNA转染载体OPEI,抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6),观察其对骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨能力的影响。方法·通过内侧半月板切除术建立SD大鼠OA模型(OA组,n=20);另设假手术组(n=10),半月板保持完好。造模后3个月后采集手术部位软骨和滑膜,免疫组织化学法检测TRAF6的表达,Western blotting方法检测白介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠原代滑膜细胞中MMP13、TRAF6、p-p65的表达。在无水厌氧环境中合成小分子聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)衍生物OPEI,琼脂糖凝胶电泳检测OPEI包裹siRNA的能力,动态光散射测量形成的OPEI/siRNA复合物的粒径和Zeta电位,MTT法检测形成的复合物对大鼠原代滑膜细胞的细胞毒性,流式细胞术分析复合物对滑膜细胞凋亡的影响,并利用激光共聚焦技术及荧光显微镜观测体内外OPEI在滑膜细胞中转染siRNA的效率,阿尔新蓝染色检测软骨细胞基质蛋白聚糖含量。结果·与假手术组相比,TRAF6在大鼠OA模型的滑膜及软骨中的表达显著升高;抑制TRAF6表达可显著降低IL-1β刺激的原代滑膜细胞中MMP13和p-p65的表达。构建的OPEI载体在大鼠原代滑膜细胞中的siRNA转染效率高达99.33%,在大鼠膝关节腔内注射OPEI/Cy3-siRNA后第3日、第7日均显示大量滑膜细胞摄取siRNA。OPEI/siTRAF6复合物转染大鼠原代滑膜细胞2 d,Western blotting结果显示OPEI/siTRAF6组在质量比值为3∶1、4∶1和5∶1时,TRAF6基因敲除效率分别为49.05%、74.61%和83.18%。OPEI/siTRAF6沉默TRAF6基因后,与对照组(OPEI/siNC)相比,IL-1β刺激条件下软骨细胞阿尔新蓝染色显著增强。结论·OPEI是低毒性高效率siRNA转染载体,在滑膜细胞中沉默TRAF6可促进骨关节炎软骨再生。

摘要： 目的:探讨温针疗法联合豨莶草对风湿性关节炎大鼠滑膜细胞活性及SphK1/S1P/S1PR1信号的影响。方法:将50只大鼠按照随机数字法分为正常组、RA组、温针组、药物组及联合组,各10只。除正常组外其余大鼠均建立RA大鼠模型,建模成功后,温针组进行温针治疗,药物组大鼠灌胃豨莶草提取物,联合组温针治疗后灌胃豨莶草提取物,其余组灌胃同体积的生理盐水。采用排水法检测各组大鼠足部体积;HE染色观察踝关节病理;提取各组滑膜细胞,MTT法检测存活,Hoechst检测凋亡率;免疫印迹检测SPHK1、S1PR1及ERK1/2蛋白水平。结果:与正常组相比,RA大鼠治疗14 d、18 d及21 d的足部体积均升高(P0.05)。结论:风湿性关节炎大鼠采用温针疗法联合豨莶草干预可抑制滑膜细胞活性,改善大鼠足部体积,这可能与抑制SphK1/S1P/S1PR1信号转导相关。

摘要： 背景:炎症因子被证明在软骨细胞和双指关节细胞中表达异常,靶向炎症途径可能是治疗骨关节炎的有效策略,但目前鲜有关于滑膜细胞炎症反应的研究报道。目的:探讨~(99)Tc-MDP通过miR-145/MKK4分子轴对滑膜细胞产生炎性因子的影响。方法:①骨关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA细胞)经过不同质量浓度~(99)Tc-MDP药物处理48 h,qRT-PCR实验检测HFLS-RA细胞中miR-145以及炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α的表达水平,CCK-8实验检测HFLS-RA细胞存活率;②确定~(99)Tc-MDP干预最佳质量浓度后,将HFLS-RA细胞分为4组:NC组(空白对照组,不经任何处理)、~(99)Tc-MDP组(13μg/L~(99)Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h)、~(99)TcMDP+miR-145 inhibitor组(13μg/L~(99)Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h同时在细胞中转染miR-145 inhibitor)、~(99)Tc-MDP+miR-145 inhibitor+sh-MKK4组(13μg/L~(99)Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h同时在细胞中转染miR-145 inhibitor+sh-MKK4),qRT-PCR实验检测HFLS-RA细胞中miR-145以及炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α的表达水平,CCK-8实验检测HFLS-RA细胞存活率。结果与结论:①~(99)Tc-MDP可显著抑制HFLS-RA细胞炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α表达和细胞存活率,且半抑制浓度IC_(50)=13μg/L;②~(99)Tc-MDP可显著上调HFLS-RA细胞中miR-145的表达,下调MKK4表达(P<0.01);③miR-145靶向MKK4,且过表达miR-145可显著抑制MKK4的表达;④与~(99)Tc-MDP组相比,~(99)Tc-MDP+miR-145 inhibitor组可显著抑制HFLS-RA细胞中miR-145的表达(P <0.05),促进细胞中炎性因子的表达(P<0.05)和细胞增殖(P<0.05),相比较于~(99)Tc-MDP+miR-145 inhibitor+sh-MKK4组,~(99)Tc-MDP+miR-145 inhibitor组可明显促进HFLS-RA细胞增殖(P<0.05)和炎性因子的表达(P<0.05);⑤结果表明,~(99)Tc-MDP通过miR-145靶向下调MKK4抑制HFLS-RA细胞产生炎性因子,缓解骨关节炎发生。

摘要： 背景:炎症因子被证明在软骨细胞和双指关节细胞中表达异常,靶向炎症途径可能是治疗骨关节炎的有效策略,但目前鲜有关于滑膜细胞炎症反应的研究报道.目的:探讨99Tc-M DP通过miR-145/MKK4分子轴对滑膜细胞产生炎性因子的影响.方法:①骨关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA细胞)经过不同质量浓度99Tc-MDP药物处理48 h,qRT-PCR实验检测HFLS-RA细胞中miR-145以及炎性因子caspase 1、臼细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α的表达水平,CCK-8实验检测HFLS-RA细胞存活率;②确定99Tc-MDP干预最佳质量浓度后,将HFLS-RA细胞分为4组:NC组(空白对照组,不经任何处理)、99Tc-MDP组(13 Jg/L99Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h)、99Tc-MDP+miR-145 inhibitor组(13μg/L 99Tc-M DP处理HFLS-RA细胞48 h同时在细胞中转染miR-145 inhibitor)、99Tc-MDP+miR-145 inhibitor+sh-MKK4组(13 μg/L 99Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h同时在细胞中转染miR-145 inhibitor+sh-MKK4),qRT-PCR实验检测HFLS-RA细胞中miR-145以及炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α的表达水平,CCK-8实验检测HFLS-RA细胞存活率.结果 与结论:①99Tc-MDP可显著抑制HFLS-RA细胞炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α表达和细胞存活率,且半抑制浓度ICs0=13 μg/L;②99Tc-MDP可显著上调HFLS-RA细胞中miR-145的表达,下调MKK4表达(P＜0.01);③miR-145靶向MKK4,且过表达miR-145可显著抑制MKK4的表达;④与99Tc-MDP组相比,99Tc-M DP+miR-145 inhibitor组可显著抑制HFLS-RA细胞中miR-145的表达(P＜0.05),促进细胞中炎性因子的表达(P＜0.05)和细胞增殖(P＜0.05),相比较于99T-MDP+miR-145 inhibitor+sh-MKK4组,99Tc-MDP+miR-145 inhibitor组可明显促进HFLS-RA细胞增殖(P＜0.05)和炎性因子的表达(P＜0.05);⑤结果表明,99Tc-MDP通过miR-145靶向下调MKK4抑制HFLS-RA细胞产生炎性因子,缓解骨关节炎发生.

摘要： 类风湿关节炎(RA)是临床常见的慢性自身免疫性疾病.其主要病理特点为关节滑膜细胞增生,伴随着滑膜细胞的增殖、血管翳的形成,滑膜增厚而引起突向关节腔以及侵袭软骨骨质造成关节畸形.在血液系统、肿瘤研究治疗取得不少成就的三氧化二砷(As2O3),因其能诱导细胞死亡,逐渐走进风湿免疫科医生视野.本文对As2O3诱导滑膜细胞常见的死亡机制进行了综述,期待为未来As2O3抑制类风湿关节炎滑膜增生研究、治疗提供一条思路.

摘要： 本论文对近年来中医药通过诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡、抑制其增殖的相关文献进行了综述,认为中医药可通过多靶点影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡,但具体作用机制和临床转化仍有待进一步研究.

摘要： 目的:观察佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜中微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(mTor)的表达及血清细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)与血清中B淋巴细胞活化因子(BAFF)、IgG1、IgG2a的表达的水平及新风胶囊对其的影响.rn 方法:将48只雄性SD大鼠随机分为对照组(NC)、模型组(MC)、来氟米特组(LEF)和XFC组(XFC),除正常组,其余三组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎,致炎后第13天开始给药,给药30天后,检测各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E％)、关节炎指数(AI)及踝关节HE染色光镜变化;电镜观察大鼠滑膜中自噬小体的表达;荧光定量PCR法检测大鼠滑膜中Atg5、7、12 mRNA的表达;蛋白印记法(wB)检测滑膜中自噬标志物LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、mTor的表达;ELISA法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、BAFF、IgG1、IgG2a的表达.rn 结果:(1)与NC组比较,MC组大鼠体质量明显降低,E％、AI明显升高,外周血IL-1β、TNF-α、BAFF、IgG2a明显升高,IL-4、IL-10、IgG1明显降低(P＜0.05或0.01);LC3-Ⅱ、Beclin1明显下降(P＜0.01);而PI3K、AKT、mTor明显上升(P＜0.01);(2)与MC组比较,LEF组与XFC组IL-1β、TNF-α、BAFF、IgG2a明显降低;IL-4、IL-10、IgG1明显升高(P＜0.05或0.01);LC3-Ⅱ、Beclin1明显升高,PI3K、AKT、mTor明显降低(P＜0.05或0.01);(3)与LEF组比较,XFC组的IL-4明显升高,IgG1明显降低(P＜0.01);PI3K、mTor明显升高,LC3-Ⅱ、Beclin1、AKT无明显差异(P＜0.01或0.05).rn 结论:新风胶囊能明显降低AA大鼠关节炎指数及足趾肿胀度,并能上调LC3-Ⅱ、Beclin1,下调PI3K/AKT/mTor及体内体液免疫BAFF、IgG1、IgG2a的过度表达,从而调节体液免疫及滑膜细胞自噬的表达,进一步抑制AA大鼠关节炎症及全身症状.

摘要： 目的:观察益气补肾活血方对佐剂关节炎(AA)模型大鼠关节滑膜细胞MMPs表达水平的影响,探讨该中药复方对类风湿关节炎的治疗机制.方法:以雷公藤多苷作为对照,采用AA大鼠模型,用益气补肾活血方对AA大鼠进行灌胃治疗.采用反转录聚合酶链反应检测AA模型大鼠关节滑膜细胞MMPs的m-RNA表达.结果:益气补肾活血方治疗后,AA模型大鼠MMPs的表达水平明显下降.结论:MMPs在类风湿关节炎(RA)的发病机制中具有重要作用,而益气补肾活血方能显著降低MMPs的表达水平,可能是该方治疗类风湿关节炎的作用机制之一.

摘要： 目的：观察佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜中微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(mTor)的表达及血清细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)与血清中B淋巴细胞活化因子(BAFF)、IgG1、IgG2a的表达的水平及新风胶囊对其的影响.rn 方法：将48只雄性SD大鼠随机分为对照组(NC)、模型组(MC)、来氟米特组(LEF)和XFC组(XFC),除正常组,其余三组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎,致炎后第13天开始给药,给药30天后,检测各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E％)、关节炎指数(AI)及踝关节HE染色光镜变化;电镜观察大鼠滑膜中自噬小体的表达;荧光定量PCR法检测大鼠滑膜中Atg5、7、12mRNA的表达;蛋白印记法(wB)检测滑膜中自噬标志物LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、mTor的表达;ELISA法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、BAFF、IgG1、IgG2a的表达.rn 结果：(1)与NC组比较,MC组大鼠体质量明显降低,E％、AI明显升高,外周血IL-1β、TNF-α、BAFF、IgG2a明显升高,IL-4、IL-10、IgG1明显降低(P＜0.05或0.01);LC3-Ⅱ、Beclin1明显下降(P＜0.01);而PI3K、AKT、mTor明显上升(P＜0.01);(2)与MC组比较,LEF组与XFC组IL-1β、TNF-α、BAFF、IgG2a明显降低;IL-4、IL-10、IgG1明显升高(P＜0.05或0.01);LC3-Ⅱ、Beclin1明显升高,PI3K、AKT、mTor明显降低(P＜0.05或0.01);(3)与LEF组比较,XFC组的IL-4明显升高,IgG1明显降低(P＜0.01);PI3K、mTor明显升高,LC3-Ⅱ、Beclin1、AKT无明显差异(P＜0.01或0.05).rn 结论：新风胶囊能明显降低AA大鼠关节炎指数及足趾肿胀度,并能上调LC3-Ⅱ、Beclin1,下调PI3K/AKT/mTor及体内体液免疫BAFF、IgG1、IgG2a的过度表达,从而调节体液免疫及滑膜细胞自噬的表达,进一步抑制AA大鼠关节炎症及全身症状.

摘要： 目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制.rn 方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Wester-bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响.rn 结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P＜0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P＜0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达(P＜0.01).rn 结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-caenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复.

摘要： 本文总结了中药活性成份对类风湿关节炎滑膜细胞作用机制的现代进展,归纳了研究中存在的问题和难点,并提出了研究思路.类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一种以慢性滑膜炎和关节结构破坏为特征的自身免疫性疾病，其发病率和致残率高，中国成年人RA发病率约为0.32-0.36%，起病1年内致残率高达20%, 10年内可达到60%，是导致残疾的主要疾病之一。RA的病因和发病机制尚不完全清楚，目前研究认为关节滑膜是RA发病的靶器官，滑膜成纤维细胞(FLS)是滑膜组织的重要组成部分，其分泌高水平促炎细胞因子、化学趋化因子、基质蛋白降解酶等，持续刺激关节滑膜细胞，作用于细胞信号传导途径的不同部位，引起胞内蛋白激酶持续激活，导致滑膜细胞的增殖与凋亡失衡，是RA骨质破坏、关节变形和致残的重要因素。RA属于中医“痹症”范畴，随着现代分子生物学技术和药理学研究进展，从中医药中探寻有效成份治疗RA的研究越来越多，并取得了可喜成绩。本文对近年来中药活性成份治疗RA的研究情况作一分析总结。

摘要： 目的:肾上腺素受体(AR)属于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)家族,分为α1-AR、α2-AR、β-AR.β-AR分为3个亚型,即β1-AR、β2-AR、β3-AR,激活通过Gs蛋白刺激AC,导致细胞内cAMP水平增加,进一步激活PKA,PKA催化底物蛋白磷酸化发挥效应.其中β2-AR在炎症反应细胞因子网络中发挥抗炎作用.RA患者外周血单核细胞(PBMCs),特别是B细胞和CD8+T细胞上β2-AR表达明显下降.类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA),是一种慢性进行性的自身免疫性疾病.其主要以关节的炎症损害为主.RA病人滑膜组织分泌促血管生成物质,促进血管新生.新血管生成被认为是形成和维持RA血管翳的一个重要因素.β2-AR是否在类风湿关节炎血管形成中发挥作用以及其调节的可能机制.rn 方法:异丙肾上腺素作用于正常和TNF处理的内皮细胞和滑膜细胞，观察药物对内皮细胞增殖、划痕、体外成管实验以及滑膜细胞增殖和趋化实验的影响。通过流式，western，免疫共沉淀等方法探讨β2-AR参与调节内皮细胞的可能机制。rn 结果:异丙肾上腺素明显抑制TNF刺激的滑膜细胞的增殖作用，并且异丙肾上腺素10-6剂量组明显使滑膜细胞表面β2-AR表达增加。rn 结论:异丙肾上腺素可以通过β2-AR抑制滑膜细胞增殖。

摘要： 目的:组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)作为一种重要的蛋白酶,在多种恶性肿瘤中异常表达,调控肿瘤细胞的迁移和侵袭行为.类风湿关节炎(RA)状态下,滑膜细胞的迁移和侵袭是导致关节软骨和骨破坏的重要原因.CB在RA异常增殖的滑膜细胞中呈现高表达,它是否参与滑膜细胞的肿瘤细胞样迁移和侵袭行为值得探究.rn 方法:采用q-PCR法比较RA和骨关节炎(OA)病人滑膜组织中CB的表达水平;PDGF作为刺激剂诱导滑膜细胞活化,使用CB特异性抑制剂CA074Me和siRNA来抑制CB的活力和表达,比较各组滑膜细胞的增殖、迁移、侵袭、MMP-2/-9的表达、FAK的活化、F-actin的表达和MAPK信号通路的活化等.rn 结果:RA滑膜组织中CB的表达明显高于OA滑膜组织;半体内试验中,CA074Me可显著抑制RA滑膜组织块中滑膜细胞的侵袭;CA074Me和siRNA能够抑制PDGF诱导的滑膜细胞迁移(抑制率分别为50.9％和32.5％)和侵袭(抑制率分别为40.1％和40.8％);CA074Me和siRNA能够降低PDGF诱导的MMP-2的活力及表达,但对MMP-9的活力和表达都没有明显的影响;CA074Me和siRNA能够抑制PDGF诱导的FAK活化,降低骨架蛋白F-actin的表达;此外,CA074Me和siRNA能够抑制P38/MAPK的磷酸化,CA074Me尚抑制JNK的磷酸化.rn 结论:CB在RA滑膜组织中异常高表达,并通过调控MMP-2的活力和表达,促进迁移相关酶FAK和骨架蛋白的表达及相应MAPK信号通路的磷酸化,参与滑膜成纤维细胞的迁移和侵袭,促进RA的发生和发展.作为一种重要的内源性蛋白酶,CB有希望成为RA治疗的靶标.

摘要： 目的:研究青藤碱(sinomenine,SIN)对动物免疫功能和细胞凋亡的影响及对人滑膜细胞增殖影响.rn 方法:MTT法测定脾淋巴细胞增殖反应及滑膜细胞增殖反应.采用流式细胞术测定脾T淋巴细胞亚型.流式细胞仪和DNA Ladder测定脾淋巴细胞凋亡.rn 结果:SIN在体给药抑制LPS及PMA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖.SIN离体给药可抑制ConA,LPS和anti-CD3 mAb诱导小鼠脾淋巴细胞增殖;SIN可使AA大鼠升高的CD4+/CD8+比值降低.SIN体外使小鼠脾淋巴细胞早期凋亡百分比显著增加.SIN对人类风湿关节炎滑膜细胞增殖也有抑制作用.rn 结论:SIN对小鼠和类风湿关节炎大鼠脾淋巴细胞免疫功能具有抑制作用,诱导细胞凋亡可能是SIN免疫抑制作用的机理之一.

摘要： 本发明提供一种滑膜肉瘤细胞系hSS‑005R，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201911。本发明还提供一种如上所述滑膜肉瘤细胞系hSS‑005R的子代细胞系。本发明建立了一种新的人滑膜肉瘤细胞系，其性状稳定，可稳定多次传代。本发明建立的人滑膜肉瘤细胞系在保留主要临床生物学特征的前提下，具有成瘤率高，潜伏期短，均一性好等特点，丰富了滑膜肉瘤细胞库，可以成功制备滑膜肉瘤动物模型，所制得的动物模型可以用于基础研究及药物筛选，为基于中国人群遗传背景开展的研究提供了有力的科研资料，也为新药临床前研究体内实验针对临床抗癌药物敏感性及耐药性的测试提供新的试验材料。

摘要： 本发明提供一种滑膜肉瘤细胞系hSS‑005R，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201911。本发明还提供一种如上所述滑膜肉瘤细胞系hSS‑005R的子代细胞系。本发明建立了一种新的人滑膜肉瘤细胞系，其性状稳定，可稳定多次传代。本发明建立的人滑膜肉瘤细胞系在保留主要临床生物学特征的前提下，具有成瘤率高，潜伏期短，均一性好等特点，丰富了滑膜肉瘤细胞库，可以成功制备滑膜肉瘤动物模型，所制得的动物模型可以用于基础研究及药物筛选，为基于中国人群遗传背景开展的研究提供了有力的科研资料，也为新药临床前研究体内实验针对临床抗癌药物敏感性及耐药性的测试提供新的试验材料。

摘要： 本发明一种体外慢病毒介导BMP-2基因诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法，包括一个将滑膜间充质干细胞分离和培养的步骤，一个构建重组质粒pFUGW-oBMP-2的步骤，一个制备转染慢病毒病毒液的步骤，一个利用转染慢病毒病毒液转染滑膜间充质干细胞的步骤，在制备转染慢病毒病毒液的步骤中，利用重组质粒pFUGW-oBMP-2和包装质粒共同构成转染慢病毒，在利用转染慢病毒病毒液转染滑膜间充质干细胞的步骤中，取第三代以上的滑膜间充质干细胞，和转染慢病毒的病毒液混合，然后加入不完全成软骨细胞诱导培养液中诱导后得到软骨细胞。本发明证明经转染慢病毒转染的SMSCs足够安全，在体外可自发向软骨分化。

摘要： 本发明一种体外腺病毒介导BMP-2/7基因共表达诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的方法，包括一个将滑膜间充质干细胞分离和培养的步骤；一个构建pAdTrack-CMV-BMP2-IRES-BMP7双基因重组载体的步骤，一个利用pAdTrack-CMV-BMP2-IRES-BMP7双基因重组载体转染第五代滑膜间充质干细胞的步骤，一个将转染后获得的重组病毒扩增的步骤；一个将上述的重组病毒加入成软骨细胞诱导培养液中诱导的步骤，培养10天以上即可获得纤维软骨样细胞。本发明采用腺病毒介导BMP-2/7共表达载体转染SMSCs，转基因效率高，瞬间表达，安全性高，在体外诱导SMSCs向纤维软骨细胞分化。

摘要： 润滑膜用组合物包含分散的二硫化钼颗粒和粘合树脂，且为用于将由金属制成的基础材料的表面用润滑膜涂覆的组合物，其中二硫化钼颗粒通过粘合树脂粘合在一起。润滑膜用组合物包含相对于二硫化钼颗粒和粘合树脂的总量为50质量％至70质量％的二硫化钼颗粒。二硫化钼颗粒的平均粒度为0.1μm至3.0μm。

摘要： 本发明提供了一种靶向结合半月板细胞和滑膜细胞的适配体，所述适配体为单链DNA分子，具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明的双特异性适配体还保留了骨性关节炎滑膜细胞适配体和半月板细胞适配体的二级结构，因此，所述双特异性适配体能够特异性结合骨性关节炎滑膜细胞适配体和半月板细胞，可特异性的识别这两种细胞。

摘要： 本发明提供了一种特异性靶向骨性关节炎滑膜细胞的修饰碱基适配体，所述适配子具有如SEQ ID NO.1或2所示的核苷酸序列。本发明通过修饰适配体文库与骨性关节炎滑膜细胞阳性筛选，多种骨骼肌来源细胞阴性反筛，最终获得特异性靶向骨性关节炎滑膜细胞的修饰碱基适配体。本发明的滑膜细胞适配体序列从修饰适配体文库中筛选，筛选过程简便，大大缩减了传统方法繁琐的步骤，由于其修饰的结构，所以与靶细胞结合力更强，特异性大大增强滑膜细胞适配体特异性，解决了目前骨关节炎疾病来源的滑膜细胞靶向结合适配体的缺陷，后续可直接通过目标适配体中修饰基团Amine‑dU，搭载纳米颗粒，传送药物、干扰RNA、miRNA及外泌体等不同靶点作用对滑膜炎进行特异性治疗。

摘要： 本发明属于生物技术及细胞培养技术领域，具体涉及一种基于牵张力作用高效促进滑膜原代细胞增殖的方法。本发明所述高效促进滑膜细胞增殖的方法，通过在滑膜细胞培养过程中，以周期性机械应力对滑膜细胞进行加力培养的方式，可以在保持滑膜原代细胞原有特性的基础上，能够促进滑膜细胞增殖，显著提高组织工程滑膜细胞的活性和生长状态，有效提高了滑膜细胞的增殖性能，只需少量的滑膜组织即可高效培养滑膜细胞；且培养的滑膜细胞活性强，形态完整，更接近体内滑膜细胞的生物学特性，为最终提升组织工程骨关节的研究及样本的高效利用提供了一条很好的途径。

摘要： 本发明提供了一种靶向结合半月板细胞和滑膜细胞的适配体，所述适配体为单链DNA分子，具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明的双特异性适配体还保留了骨性关节炎滑膜细胞适配体和半月板细胞适配体的二级结构，因此，所述双特异性适配体能够特异性结合骨性关节炎滑膜细胞适配体和半月板细胞，可特异性的识别这两种细胞。

摘要： 本发明公开了骨关节滑膜成纤维细胞靶向适配体纳米粒构建方法及应用，包括以下步骤：S1、分别构建小鼠滑膜成纤维细胞和软骨细胞的培养体系，备用；S2、合成随机核酸适配体文库，其序列如SEQ ID NO.1所示；S3、筛选：以步骤S1构建的滑膜成纤维细胞为正筛细胞，软骨细胞为负筛细胞，采用CELL‑SELEX技术，对步骤S2合成的随机核酸适配体文库经过重复筛选，富集能够特异性结合滑膜成纤维细胞，不结合软骨细胞的核酸适配体CX3，其序列如SEQ ID CX3所示；S4、构建步骤S3筛选出的核酸适配体CX3修饰的脂质体纳米粒。本发明适配体与靶细胞结合力更强，能够实现靶向清除骨性关节炎滑膜中衰老的纤维状滑膜细胞，进而抑制骨性关节炎的发生发展。