摘要:
本文采用越高效液相-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ MS),Zorbax SB-C18 (2.1×50mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸(10∶90)为流动相,流速0.3mL/min,柱温30°C的色谱条件;采用负离子裂解模式,在碰撞能量35V时,以二级碎片离子383[M-H-2× 90](图2-C&D)作为检测离子;采用在大鼠血浆200μ,中精密加入甲醇800μL,旋涡混匀、离心10min (15000r/min)后,精密取850μL上清液氮吹,以200μL流动相复溶的血浆处理方法,建立了大鼠血浆中夏佛托苷和异夏佛托苷的UPLC-MS/MS测定法.夏佛托苷和异夏佛托苷可完全分离,蜂形对称,内源性物质不干扰(图2-A&B).夏佛托苷和异夏佛托苷浓度分别在0.5~200ng/mL范围内,线性关系良好(r>0.9995),检测限分别为0.1ng/mL;高(100ng/mL)、中(20ng/mL)、低(5ng/mL)浓度方法回收率在96.2~101.1%和96.8~ 101.8%,相应RSD分别在3.8~5.4%(n=5)和3.6~6.0%(n=5),提取回收率在78,9~81.1%和78.1~80.5%,相应RSD分别在3.8~5.5%(n=5)和3.6~6.0%(n=5);日内精密度试验RSD<5.7%,日间精密度试验RSD<5.3%;分别以常温放置、4°C下冷藏、-18°C下冷冻24h进行稳定性试验,RSD<5.1%.方法学考察结果显示符合生物样本的含量测定要求,可用于药动学研究.东北天南星(Arisaema amurense Maxim.)为天南星(Rhizoma Arisaematis)的基源之一.天南星为天南星科天南星属植物天南星Arisaema erubescens (Wall.)Schott.、异叶天南星Arisaema heterophyllum Bl.东北天南星Arisaema amurense Maxim.的干燥块茎,其味苦、气微辛,性温,有毒,归肺、肝、脾经,有燥湿化痰、祛风止痉、散结消肿之功能.主治顽痰咳嗽、风痰眩晕、口眼歪斜等,外用治疗痈肿及蛇虫咬伤,为常用有毒中药,有两千多年的药用历史,收载、历版《中国药典》.但迄今尚来见有有关药动学或体内过程的研究报道.本小组前期研究显示,天南星含有多个黄酮类碳苷,夏佛托苷和异夏佛托苷是其众多黄酮减分中含量相对较高的两个化含物.本试验以东北天南星干燥块茎70%乙醇热提、提取液减压浓缩除乙醇后过AB8柱,收集30%醇洗部位浓缩,作为灌胃药物(经UPLC-MS/MS分析,主要含黄酮碳苷类成分.)以相当、夏佛托苷4.0mg/k-g、异夏佛托苷3.0mg/kg剂量一次性大鬣灌霉绘药(n=6),于给药后0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、9、12h眼眶取血,用建立的测定法测定血浆中夏佛托苷和异夏佛托苷的含量,血药浓度-时间曲线见图3,采用DAS(2.0版)药动学程序的统计矩方法计算,夏佛托苷和异夏佛托苷的药动学参数Lmax、Cmax、AUC(0→t)、AUC(0→∞)、t1/2分别依次为1.00h、37.62ng/mL、129.26ng/mL、140.71ng/mL、3.35h和1.00h、30.12ng/mL、94.29ng/mL、103.28ng/mL、 3.69h.