多药耐药性

摘要： 目的:探究美洲大蠊多肽PAE;基于腺苷-磷酸活化蛋白激酶(AMPK)调节自噬对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU多药耐药性的影响。方法:以人肝癌细胞株BEL-7402及人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定AICAR的作用时间及浓度;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞中AMPK含量;实时聚合酶链式反应(real-time PCR)检测细胞中AMPK mRNA的表达水平;real-time PCR检测细胞中自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬相关蛋白7(ATG7)、磷酸肌醇-3-激酶3(PIK3C3)、Beclin 1、微管相关蛋白1亲链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、P62、Zeste同源物增强子2(EZH2)等mRNA的表达水平;激光共聚焦显微镜观察细胞中LC3-Ⅱ的表达;免疫细胞化学法(ICC)检测细胞中P62蛋白的表达。结果:美洲大蠊多肽PAE;能够降低AMPK含量(P<0.05),也能降低AMPK mRNA的表达水平,显著降低自噬相关因子ATG5 mRNA、ATG7 mRNA、PIK3C3mRNA、Beclin 1 mRNA、LC3-ⅡmRNA的表达水平(P<0.05),明显提高P62 mRNA及EZH2 mRNA的表达水平(P<0.05),增加P62蛋白的表达(P<0.05)。结论:美洲大蠊多肽PAE;能够通过下调AMPK的表达进而抑制自噬来逆转BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性。

摘要： 目的探究黄花蒿酵解液联合多西他赛对乳腺癌耐药细胞株MCF‐7/DTX的逆转作用。方法采用细胞的活力测定(MTS法)检测黄花蒿酵解液联合多西他赛对乳腺癌耐药细胞株MCF‐7/DTX增值活力的影响,采用Elisa检测法检测黄花蒿酵解液联合多西他赛对乳腺癌耐药细胞株MCF‐7/DTX的人多药耐药蛋白(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP1)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)与肺耐药蛋白(LRP)表达水平的影响。结果以一定浓度黄花蒿酵解液联合多西他赛处理的MCF‐7/DTX细胞增值活力显著低于对照组(P<0.05),MDR1,MRP1,BCRP与LRP表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论黄花蒿酵解液联合多西他赛可以逆转乳腺癌耐药细胞株MCF‐7/DTX对多西他赛的耐药性,增强MCF‐7/DTX对多西他赛的敏感性。

摘要： 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的耐药性在全球范围内呈上升趋势,而多药耐药严重阻碍了这一多发慢性感染的成功根除.本文主要讨论了幽门螺旋杆菌的多药耐药性,概述了目前对抗多药耐药的方法和未来的发展方向.与多药耐药相关的因素包括抗生素滥用、治疗失败、基因突变、外排泵和生物膜等相关因素.解决多药耐药情况不断增加的重要方向主要是,优化现有根除方案及开发新的根除方案,更广泛地使用含铋方案,发现并评估新的抗生素,如较新的喹诺酮类药物等,发挥益生菌的辅助作用,以及疫苗和非侵入性测试的研发.然而,现在还需要更多的努力和研究,菌株药物敏感性检测也变得越来越重要.

摘要： 目的 探讨砷化合物抗肿瘤多药耐药性(MDR)的作用及作用机制.方法 查阅相关文献,分别从细胞、分子、基因水平,以及相关通路阐述砷化合物抗肿瘤MDR的作用及作用机制.结果 三氧化二砷(ATO)联合维生素C、雄黄转化溶液(RST)均可抑制耐药性肿瘤细胞血管再生和转移;ATO、负载紫杉醇的亚砷酸钆纳米颗粒、ATO与阿霉素联用均可抑制耐药性肿瘤细胞侵袭和迁移;ATO、口服纳米硫化砷均可诱导肿瘤MDR细胞发生自噬.ATO,RTS,ATO-As4O6-顺铂的组合,白藜芦醇(RSV)和ATO联用,丁硫氨酸亚砜亚胺与ATO联用,As4S4均可抑制耐药相关蛋白的表达.ATO可抑制耐药酶谷胱甘肽S转移酶和DNA拓扑异构酶Ⅱ的表达;ATO与阿霉素联用可下调Stathmin表达.ATO,ATO联合RSV,As4S4均可抑制凋亡控制基因表达;ATO,ATO联合RSV均可抑制核因子κB;RST可下调MDR1基因;载有砷的双重药物(阿霉素和ATO)纳米药物系统协同DNA损伤和干预DNA修复.ATO、亚砷酸、亚砷酸钠、加马布他汀和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580均可激活膜受体酪氨酸蛋白激酶信号传导途径(RAS/RAF/MAPK);As4S4,As4S4和L-丁硫氨酸-(S,R)-亚磺酰亚胺联用,单用ATO或与磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002均可抑制PI3K-AKT信号通路;ATO可引发内质网应激反应;ATO可抑制Notch信号通路.结论 砷化合物能有效逆转肿瘤细胞的MDR,是极具潜力的抗肿瘤药物.

摘要： 离子的跨膜运输受多种离子通道的调节,氯离子作为最主要的细胞外阴离子,与肿瘤发生、发展密切相关[1-3].容积敏感外向整流性(volume-sensi-tive outwardly rectifying,VSOR)氯离子通道是一种广泛表达于脊椎动物细胞和多种肿瘤细胞胞膜上的氯离子通道,其包含8A富含亮氨酸的重复序列(leucine-rich repeat containing 8A,LRRC8A)及其4个同源家族成员(LRRC8B-E),组装成约800 kDa的VSOR通道复合物.此外,VSOR氯离子通道的组成蛋白LRRC8 A和LRRC8 D可通过各种信号途径参与癌细胞的增殖、迁移、死亡和多药耐药性.现就VSOR氯离子通道与癌症发生和发展相关的发现作一综述,以期为VSOR氯离子通道作为癌症治疗新靶标提供依据.

摘要： 目的 检测核因子-κB(NF-κB)在肝癌亲本株细胞及其耐药株细胞中的表达,探讨NF-κB对肝癌细胞多药耐药性的影响及其作用机制.方法 取对数生长期人肝癌亲本株细胞(Bel-7402和SMMC-7721),使用5 mg·L-1阿霉素(ADM)反复间歇冲击诱导,建立人肝癌细胞耐药株细胞(Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM).将对数生长期Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞分别随机分为阴性对照组和ADM、紫杉醇(PTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)加药组,每组设15个复孔.加药组分别加入30μL各浓度梯度的化学治疗药物ADM(0.004、0.040、0.400、4.000、40.000 mg·L-1)、PTX(0.045、0.450、4.500、45.000、450.000 mg·L-1)、5-Fu(0.500、5.000、50.000、500.000、5000.000 mg·L-1)、VCR(0.005、0.050、0.500、5.000、50.000 mg·L-1)、CDDP(0.025、0.250、2.500、25.000、250.000 mg·L-1)处理,各浓度设3个复孔.阴性对照组加入等体积的磷酸盐缓冲溶液.同时设无细胞的空白组,只加入细胞培养基.另将对数生长期的耐药株细胞Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM分别随机分为ADM组、VCR组、CDDP组、ADM+吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组、VCR+PDTC组、CDDP+PDTC组.ADM组、VCR组、CDDP组细胞分别加入30μL各浓度梯度的ADM、VCR、CDDP.ADM+PDTC组、VCR+PDTC组、CDDP+PDTC组细胞先加50μL PDTC(10μmol·L-1)预处理1 h,再加入30μL各浓度梯度的ADM、VCR、CDDP.药物处理48 h后,采用腺苷三磷酸生物发光法检测各组细胞对化学治疗药物的半数抑制浓度.采用链霉菌亲和素-过氧化物酶连结免疫细胞化学染色法检测NF-κB在肿瘤细胞Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM的表达位置及表达量.提取Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞蛋白,采用酶联免疫吸附试验检测NF-κB p65蛋白表达量.结果 Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞对ADM的耐药指数分别为21.2±1.4、16.2±1.0,符合中度耐药.Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞对PTX、5-Fu、VCR、CDDP均产生不同程度的耐药.ADM、PTX、5-Fu、VCR、CDDP加药组Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞的耐药指数均明显高于其亲本株细胞(P<0.05).ADM+PDTC组、VCR+PDTC组、CDDP+PDTC组Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞半数抑制浓度均显著低于相应ADM组、VCR组、CDDP组(P<0.05).NF-κB在Bel-7402、SMMC-7721、Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞的细胞质和细胞核中均有表达,其中亲本株细胞以细胞质表达为主,而耐药株细胞以细胞核表达为主,且Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞中NF-κB表达量均显著高于其亲本株细胞(P<0.05).Bel-7402/ADM和SMMC-7721/ADM细胞中NF-κB p65蛋白表达量显著高于亲本株细胞(P<0.05).结论 NF-κB对肝癌细胞多药耐药起促进作用,PDTC可在一定程度减少肝癌细胞的多药耐药性,NF-κB是调控肝癌细胞多药耐药的重要靶点.

摘要： P-糖蛋白(P-gp)是细胞产生多药耐药的主要原因之一,寻找有效的P-gp抑制剂是逆转P-gp介导的细胞多药耐药性的重要方法之一.以具有微弱P-gp抑制活性的天然槲皮苷为配体,合成了槲皮苷铜(Cu-Quercitrin)和槲皮苷锌(Zn-Quercitrin)配合物.结果表明,Cu-Quercitrin能提高P-gp的底物罗丹明123(Rh123)和抗癌药物阿霉素(DOX)在耐药细胞中的累积,同时增强了DOX的细胞毒性,表明Cu-Quercitrin可以抑制P-gp的活性,且优于常见的抑制剂维拉帕米;Cu-Quercitrin对P-gp蛋白水平表达并没有影响,只是减少了细胞中腺苷三磷酸(ATP)的含量.这一研究结果表明结构多样、配体丰富的金属配合物有望成为有效的P-gp抑制剂.

摘要： 高水平的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)基因在肿瘤细胞中过量表达是肿瘤细胞耐药的内在原因,是导致肿瘤化疗失败的主要原素.寻求一种抑制MDR活性的抑制剂是提升抗肿瘤药物药效的重要途径.本研究采用低浓度持续诱导方法建立人乳腺癌细胞(MCF-7)耐药细胞系,结果显示,阿霉素(ADM)、紫杉醇和顺铂对MCF-7耐药细胞系有交叉耐药性,耐药指数(resistance index,TI)分别为5.11、3.55和1.79.菌株对肿瘤细胞的逆转活性筛选表明,红棕毛筒腔菌Tubeufia rubra PF02-2和河池毛筒腔菌T.hechiensis XSL05具有逆转肿瘤细胞多药耐药性为敏感性的活性,逆转倍数(reversion fold,RF)分别为3.79和1.07.结果 表明,T.rubra和T.hechiensis具有开发为MDR逆转剂的潜能.

摘要： 肿瘤在化疗过程中往往存在多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的问题,MDR是导致治疗失败的重要因素.目前,西药逆转剂在治疗肿瘤MDR时常常存在毒副作用强、靶点单一、成本高、技术难度高、效果不佳等问题而影响治疗效果;而中药逆转剂具有低毒、高效、多靶点的特性,但是其存在治疗效果弱、作用机制不明确等弊端.近年的研究发现,中西药合用可以很好地逆转肿瘤MDR,增强肿瘤的化疗效果.通过深入挖掘和分析中西药合用在肿瘤MDR中的研究,能更好的把握病情、及时干预,为肿瘤的临床治疗提供指导性的依据.

摘要： 目的：研究三氧化二砷游离药、以PLA或mPEG-PLA为载体制备的纳米粒在体外对MCF-7/ADR乳腺癌耐药细胞多药耐药性的逆转效应.方法：应用CCK8法检测三氧化二砷游离药及纳米粒对体外培养的MCF-7/ADR细胞增殖的影响,评价其逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药的作用.结果：以PLA或mPEG-PLA为载体制备的纳米粒均能增加三氧化二砷对MCF-7/ADR细胞的毒性作用,且呈剂量依赖性.结论：两种纳米粒均具有在体外逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药的效应,具有临床应用前景.

摘要： 化疗是临床上治疗肿瘤的主要手段,但是由于化疗药物毒性大而且缺乏选择性导致其存在严重的毒副作用.对此,研究者开发了多种肿瘤微环境响应的药物输送系统如pH、谷胱甘肽、活性氧等响应的药物输送系统,以提高化疗药物的选择性,但是由于肿瘤的异质性以及肿瘤和正常组织差异过小,导致它们对肿瘤和正常组织的选择性仍然有限.肿瘤耐药往往导致化疗失败和癌症病人的死亡。对此构建了一种级联放大药物释放系统(CARN)，能够放大肿瘤与正常组织间活性氧的信号差异，大幅提高药物的肿瘤选择性，同时，利用两种化疗药物之间的协同作用克服肿瘤的多药耐药性。

摘要： 目的：探究上调microRNA-494表达对几种不同的淋巴瘤细胞增殖及耐药性的影响. 方法：选择Jurkat细胞、Burkitt细胞和Raji细胞作为淋巴瘤细胞实验组.细胞分别被过表达miR-494并给予不同的药物刺激.Real-time PCR法进行检测不同种类的淋巴瘤细胞内miR-494的表达量,及过表达miR-494后P-gP和MRP的表达量;MTT比色法检测过表达miR-494后淋巴瘤细胞对药物的敏感性;细胞计数CCK-8法检测过表达miR-494后的细胞存活率;流式细胞仪检测过表达miR-494后的细胞凋亡率. 结果：与对照组相比,过表达miR-494后淋巴瘤细胞的细胞存活率显著降低,细胞凋亡率明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);过表达miR-494后淋巴瘤细胞对阿霉素、吉西他滨和顺铂的耐药性明显降低,且P-gP和MRP mRNA表达量显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：过表达microRNA-494能够显著降低Jurkat细胞、Burkitt细胞和Raji细胞的细胞存活率,加速其凋亡发生;影响多药耐药基因P-gP和MRP的表达量,并降低淋巴瘤细胞的多药耐药性.

摘要： 目的：观察升血颗粒(PG)含药血清对人白血病细胞K562/ADR多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.rn 方法：采用MTT法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞仪检测非细胞毒性的含药血清处理后K562/ADR细胞细胞内阿霉素(ADM)的浓度.rn 结果：低、中、高剂量含药血清对K562/ADR细胞无明显细胞毒性.低、中、高剂量含药血清作用后,ADM对K562/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)显著下降,逆转倍数分别为1.34、1.71、1.82倍;ADM外渗试验显示,低、中、高剂量含药血清处理后K562/ADR细胞内ADM浓度显著增加,增加倍数分别为1.41、1.67、2.04倍.rn 结论：升血颗粒含药血清对人白血病细胞K562/ADR细胞耐药性有一定的逆转作用.

摘要： 背景与目的:肿瘤的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是目前化疗失败的主要原因,磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinases,PI3K)信号通路参与肿瘤多药耐药的发生,但PI3K信号通路与多药耐药的机制尚不明确.本研究旨在探讨PI3K/Akt信号通路及其下游靶点对ABCB1 (ATP-bindingcassette sub-family B member 1)基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的人结肠癌HCT-116/L-OHP细胞多药耐药性的调控作用.rn 方法:将PI3K特异性抑制剂LY294002(20 μmol/L)处理人结肠癌HCT-116/L-OHP细胞2h 后,用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞对奥沙利铂的敏感性;Western blot 检测相关耐药蛋白P-gp、肺耐药蛋白(lung resistance-relatedprotein,LRP)、多药耐药相关蛋白-2(multidrug resistance-related-2,MRP-2)以及PI3K/Akt 信号通路下游蛋白Akt、p-Akt、IκB、p-IκB 的表达变化;CHIP—PCR 法检测核转录因子κB(NF-κB)对ABCB1 基因启动子的影响.rn 结果:阻断PI3K/Akt 信号通路激活后,HCT-116/L-OHP 细胞对奥沙利铂(L-OHP)的半数抑制浓度(IC50)由(157.48±16.73)μg/mL 降低到(53.68±3.18)μg/mL,逆转指数为2.93(P＜0.01).HCT-116/L-OHP 细胞的p-Akt、p-IκB 和P-gp 的表达水平明显下降(P＜0.01),Akt、IκB、LRP 和MRP-2 变化不明显.NF-κB 能够与ABCB1 基因启动子区域结合.rn 结论:阻断PI3K/AKT 信号通路可增强人结肠癌HCT-116/L-OHP 耐药细胞的药物敏感性,抑制p-Akt 和p-IκB 的磷酸化表达水平,逆转P-gp 介导的肠癌多药耐药.

摘要： 目的：多药耐药现象(multidrug resistance,MDR)是导致肝癌等原发性恶性肿瘤化疗失败的重要因素.其中,药物外排转运体P-gp(P-glycoprotein,由ABCB1(ATP-binding cassette,sub-family B(MDR/TAP),member1B)基因编码)的异常表达是造成MDR的主要原因之一,严重影响肝癌的化疗疗效.目前针对P-gp开发的小分子抑制剂,绝大部分在临床应用上因毒性等问题均以失败告终.因此如何安全有效的抑制P-gp并成功攻克MDR成为目前亟需解决的问题.MicroRNAs(miRNAs)作为一类内源性的具有调节作用的小RNA分子,它对基因的表达除了经典的调控模式,即通过与靶基因mRNA的3'-非编码区(3'-UTR)配对来诱导蛋白编码基因的翻译抑制;还可以同时以直接或间接的方式对基因的转录水平发挥激活或抑制作用.这种miRNA的双重调控机制将进一步加强其自身对基因的调节作用.鉴于此,本研究主要是围绕miRNAs在P-gp介导的肝癌MDR中的重要作用所展开,并着重探讨了miRNAs对基因的双重调控作用在此领域的应用. 方法：首先结合生物信息学、Western Blot、RT-PCR、luciferase报告基因检测和CRISPR-CAS9介导的基因编辑技术等方法发现并验证了具有调节P-gp蛋白水平活性的miR-491-3p;接下来,基于同样的技术方法,发现了该miRNA的另一个直接作用靶点,即ABCB1上游转录因子Sp3.最后,采用流式细胞术和CCK8检测等方法,研究了miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结果：在miR-491-3p的机制研究中发现：1)miR-491-3p可直接靶向Hep3B细胞中ABCB13'UTR,在转录后水平抑制ABCB1表达;2)miR-491-3p同时直接靶向ABCB1上游转录因子Sp33'UTR,进而在转录水平抑制ABCB1的表达.3)肝细胞系和肝癌临床样本分析均显示ABCB1,Sp3和miR-491-3p的表达水平呈现负相关.在miR-491-3p的功能研究中发现：1)流式检测发现miR-491-3p能增加细胞内药物蓄积,从而增强Hep3B细胞对化疗药物盐酸阿霉素(DOX)和硫酸长春花碱(VBL)的敏感性;2)无论是外源转入miR-491-3p抑制剂还是采用CRISPR/Cas9技术敲除内源miR-491-3p,均导致SMCC-7721,Bel-7402,Hep3B细胞内药物蓄积减少.3)过表达ABCB1或Sp3均能逆转Hep3B细胞中miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结论：miR-491-3p可直接靶向ABCB1及其上游转录因子Sp3,同时在转录和转录后水平调节ABCB1表达,进而增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性.本研究不仅首次发现了miR-491-3p/Sp3/ABCB1调节轴在肝癌多药耐药中的双重调控作用,也为miR-491-3p的可能的临床应用奠定了理论基础.

摘要： 目的：多药耐药现象(multidrug resistance,MDR)是导致肝癌等原发性恶性肿瘤化疗失败的重要因素.其中,药物外排转运体P-gp(P-glycoprotein,由ABCB1(ATP-binding cassette,sub-family B(MDR/TAP),member1B)基因编码)的异常表达是造成MDR的主要原因之一,严重影响肝癌的化疗疗效.目前针对P-gp开发的小分子抑制剂,绝大部分在临床应用上因毒性等问题均以失败告终.因此如何安全有效的抑制P-gp并成功攻克MDR成为目前亟需解决的问题.MicroRNAs(miRNAs)作为一类内源性的具有调节作用的小RNA分子,它对基因的表达除了经典的调控模式,即通过与靶基因mRNA的3'-非编码区(3'-UTR)配对来诱导蛋白编码基因的翻译抑制;还可以同时以直接或间接的方式对基因的转录水平发挥激活或抑制作用.这种miRNA的双重调控机制将进一步加强其自身对基因的调节作用.鉴于此,本研究主要是围绕miRNAs在P-gp介导的肝癌MDR中的重要作用所展开,并着重探讨了miRNAs对基因的双重调控作用在此领域的应用. 方法：首先结合生物信息学、Western Blot、RT-PCR、luciferase报告基因检测和CRISPR-CAS9介导的基因编辑技术等方法发现并验证了具有调节P-gp蛋白水平活性的miR-491-3p;接下来,基于同样的技术方法,发现了该miRNA的另一个直接作用靶点,即ABCB1上游转录因子Sp3.最后,采用流式细胞术和CCK8检测等方法,研究了miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结果：在miR-491-3p的机制研究中发现：1)miR-491-3p可直接靶向Hep3B细胞中ABCB13'UTR,在转录后水平抑制ABCB1表达;2)miR-491-3p同时直接靶向ABCB1上游转录因子Sp33'UTR,进而在转录水平抑制ABCB1的表达.3)肝细胞系和肝癌临床样本分析均显示ABCB1,Sp3和miR-491-3p的表达水平呈现负相关.在miR-491-3p的功能研究中发现：1)流式检测发现miR-491-3p能增加细胞内药物蓄积,从而增强Hep3B细胞对化疗药物盐酸阿霉素(DOX)和硫酸长春花碱(VBL)的敏感性;2)无论是外源转入miR-491-3p抑制剂还是采用CRISPR/Cas9技术敲除内源miR-491-3p,均导致SMCC-7721,Bel-7402,Hep3B细胞内药物蓄积减少.3)过表达ABCB1或Sp3均能逆转Hep3B细胞中miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结论：miR-491-3p可直接靶向ABCB1及其上游转录因子Sp3,同时在转录和转录后水平调节ABCB1表达,进而增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性.本研究不仅首次发现了miR-491-3p/Sp3/ABCB1调节轴在肝癌多药耐药中的双重调控作用,也为miR-491-3p的可能的临床应用奠定了理论基础.

摘要： 目的：多药耐药现象(multidrug resistance,MDR)是导致肝癌等原发性恶性肿瘤化疗失败的重要因素.其中,药物外排转运体P-gp(P-glycoprotein,由ABCB1(ATP-binding cassette,sub-family B(MDR/TAP),member1B)基因编码)的异常表达是造成MDR的主要原因之一,严重影响肝癌的化疗疗效.目前针对P-gp开发的小分子抑制剂,绝大部分在临床应用上因毒性等问题均以失败告终.因此如何安全有效的抑制P-gp并成功攻克MDR成为目前亟需解决的问题.MicroRNAs(miRNAs)作为一类内源性的具有调节作用的小RNA分子,它对基因的表达除了经典的调控模式,即通过与靶基因mRNA的3'-非编码区(3'-UTR)配对来诱导蛋白编码基因的翻译抑制;还可以同时以直接或间接的方式对基因的转录水平发挥激活或抑制作用.这种miRNA的双重调控机制将进一步加强其自身对基因的调节作用.鉴于此,本研究主要是围绕miRNAs在P-gp介导的肝癌MDR中的重要作用所展开,并着重探讨了miRNAs对基因的双重调控作用在此领域的应用. 方法：首先结合生物信息学、Western Blot、RT-PCR、luciferase报告基因检测和CRISPR-CAS9介导的基因编辑技术等方法发现并验证了具有调节P-gp蛋白水平活性的miR-491-3p;接下来,基于同样的技术方法,发现了该miRNA的另一个直接作用靶点,即ABCB1上游转录因子Sp3.最后,采用流式细胞术和CCK8检测等方法,研究了miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结果：在miR-491-3p的机制研究中发现：1)miR-491-3p可直接靶向Hep3B细胞中ABCB13'UTR,在转录后水平抑制ABCB1表达;2)miR-491-3p同时直接靶向ABCB1上游转录因子Sp33'UTR,进而在转录水平抑制ABCB1的表达.3)肝细胞系和肝癌临床样本分析均显示ABCB1,Sp3和miR-491-3p的表达水平呈现负相关.在miR-491-3p的功能研究中发现：1)流式检测发现miR-491-3p能增加细胞内药物蓄积,从而增强Hep3B细胞对化疗药物盐酸阿霉素(DOX)和硫酸长春花碱(VBL)的敏感性;2)无论是外源转入miR-491-3p抑制剂还是采用CRISPR/Cas9技术敲除内源miR-491-3p,均导致SMCC-7721,Bel-7402,Hep3B细胞内药物蓄积减少.3)过表达ABCB1或Sp3均能逆转Hep3B细胞中miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结论：miR-491-3p可直接靶向ABCB1及其上游转录因子Sp3,同时在转录和转录后水平调节ABCB1表达,进而增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性.本研究不仅首次发现了miR-491-3p/Sp3/ABCB1调节轴在肝癌多药耐药中的双重调控作用,也为miR-491-3p的可能的临床应用奠定了理论基础.

摘要： 目的：多药耐药现象(multidrug resistance,MDR)是导致肝癌等原发性恶性肿瘤化疗失败的重要因素.其中,药物外排转运体P-gp(P-glycoprotein,由ABCB1(ATP-binding cassette,sub-family B(MDR/TAP),member1B)基因编码)的异常表达是造成MDR的主要原因之一,严重影响肝癌的化疗疗效.目前针对P-gp开发的小分子抑制剂,绝大部分在临床应用上因毒性等问题均以失败告终.因此如何安全有效的抑制P-gp并成功攻克MDR成为目前亟需解决的问题.MicroRNAs(miRNAs)作为一类内源性的具有调节作用的小RNA分子,它对基因的表达除了经典的调控模式,即通过与靶基因mRNA的3'-非编码区(3'-UTR)配对来诱导蛋白编码基因的翻译抑制;还可以同时以直接或间接的方式对基因的转录水平发挥激活或抑制作用.这种miRNA的双重调控机制将进一步加强其自身对基因的调节作用.鉴于此,本研究主要是围绕miRNAs在P-gp介导的肝癌MDR中的重要作用所展开,并着重探讨了miRNAs对基因的双重调控作用在此领域的应用. 方法：首先结合生物信息学、Western Blot、RT-PCR、luciferase报告基因检测和CRISPR-CAS9介导的基因编辑技术等方法发现并验证了具有调节P-gp蛋白水平活性的miR-491-3p;接下来,基于同样的技术方法,发现了该miRNA的另一个直接作用靶点,即ABCB1上游转录因子Sp3.最后,采用流式细胞术和CCK8检测等方法,研究了miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结果：在miR-491-3p的机制研究中发现：1)miR-491-3p可直接靶向Hep3B细胞中ABCB13'UTR,在转录后水平抑制ABCB1表达;2)miR-491-3p同时直接靶向ABCB1上游转录因子Sp33'UTR,进而在转录水平抑制ABCB1的表达.3)肝细胞系和肝癌临床样本分析均显示ABCB1,Sp3和miR-491-3p的表达水平呈现负相关.在miR-491-3p的功能研究中发现：1)流式检测发现miR-491-3p能增加细胞内药物蓄积,从而增强Hep3B细胞对化疗药物盐酸阿霉素(DOX)和硫酸长春花碱(VBL)的敏感性;2)无论是外源转入miR-491-3p抑制剂还是采用CRISPR/Cas9技术敲除内源miR-491-3p,均导致SMCC-7721,Bel-7402,Hep3B细胞内药物蓄积减少.3)过表达ABCB1或Sp3均能逆转Hep3B细胞中miR-491-3p介导的药物增敏作用. 结论：miR-491-3p可直接靶向ABCB1及其上游转录因子Sp3,同时在转录和转录后水平调节ABCB1表达,进而增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性.本研究不仅首次发现了miR-491-3p/Sp3/ABCB1调节轴在肝癌多药耐药中的双重调控作用,也为miR-491-3p的可能的临床应用奠定了理论基础.

摘要： 本发明涉及一种耐药性检测组合物、耐药性检测试剂盒及耐药性检测方法，耐药性检测组合物包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第一探针、第二探针和第三探针。本发明提供了一种经过筛选优化的耐药性检测组合物，可利用多重实时荧光PCR技术快速同时进行三种细菌耐药基因的联合检测，即碳青霉烯类耐药基因KPC、C类头孢菌素耐药基因CMY‑2以及甲氧西林耐药基因mecA，极大地简化了检测流程，缩短了检测时间，且具有较高的灵敏度和精密度，为量少珍贵的核酸样品提供更多的靶点检测信息，为科研及临床的细菌耐药性检测提供了简单高效的检测方法，对临床治疗成败和抗生素的合理应用具有重要意义。

摘要： 本发明涉及癌细胞耐药性的标志物、逆转癌细胞耐药性的制剂组合及其应用。该标志物包括癌相关成纤维细胞的CCL5趋化因子及其编码的基因，所述CCL5趋化因子的表达水平与癌细胞耐药性成正相关。该制剂组合包括抑制癌细胞复制的PARP抑制剂和用于调节所述PARP引起的癌细胞耐药性的逆转剂。该逆转剂包括下调癌相关成纤维细胞CCL5表达的调节剂、CCL5的中和抗体和NF‑κB信号抑制剂中的至少一种。采用下调CCL5表达相关调节剂、CCL5中和抗体和/或靶向NF‑κB抑制剂可逆转PARP抑制剂诱导的CAFs活化作用，抑制PARP抑制剂引起的癌细胞耐药性，提升PARP抑制剂杀伤癌细胞的效果。

摘要： 本发明涉及一种耐药性检测组合物、耐药性检测试剂盒及耐药性检测方法，耐药性检测组合物包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第一探针、第二探针和第三探针。本发明提供了一种经过筛选优化的耐药性检测组合物，可利用多重实时荧光PCR技术快速同时进行三种细菌耐药基因的联合检测，即碳青霉烯类耐药基因KPC、C类头孢菌素耐药基因CMY‑2以及甲氧西林耐药基因mecA，极大地简化了检测流程，缩短了检测时间，且具有较高的灵敏度和精密度，为量少珍贵的核酸样品提供更多的靶点检测信息，为科研及临床的细菌耐药性检测提供了简单高效的检测方法，对临床治疗成败和抗生素的合理应用具有重要意义。

摘要： 本发明属于医药生物技术领域，公开了一种可用于检测前列腺癌对多西他赛耐药性的分子标志物，所述分子标志物为CRIP2基因或CRIP2蛋白；CRIP2基因或CRIP2蛋白在DTX耐药前列腺癌细胞中的表达量明显高于正常前列腺癌细胞，差异具有统计学意义，因此，通过测定CRIP2基因或CRIP2蛋白的表达量可以作为判断用药者对DTX药物耐药性/敏感性的依据之一。而且，通过敲低DTX耐药前列腺癌细胞中CRIP2基因的表达水平，能提高DTX耐药前列腺癌细胞对DTX的敏感性，同时，干扰CRIP2基因后能够明显抑制DTX耐药前列腺癌细胞的增殖，因此，CRIP2基因可作为逆转前列腺癌DTX耐药的作用靶点，通过抑制CRIP2基因的表达和/或功能能够逆转肿瘤细胞对多西他赛耐药性，对前列腺癌治疗具有重要的意义。

摘要： 本发明公开了一种耐药性癫痫生物标记物、耐药性癫痫诊断试剂或试剂盒，涉及癫痫诊断技术领域。本发明使用血清外泌体蛋白组学技术来拟定耐药性癫痫潜在的生物学标志物，并根据生物标志物筛选结果力争开发快速检测试剂盒。本发明将耐药性癫痫组分别与正常对照组及临床治疗效果良好的癫痫组进行比较，所得到的差异性结果更能代表癫痫病人的耐药性；耐药性癫痫生物学标志物的开发有利于耐药性癫痫的临床早期诊断、早期治疗，也方便了及时调整治疗方案，及时术前评估。

摘要： 公开了针对广泛的细菌和铜绿假单胞菌生物膜的抗微生物组合物和调配物。在一方面，所述组合物和所述调配物不会产生耐药性。在一方面，所述组合物和所述调配物与抗生素组合减缓了抗生素耐药性的发展并且极大地提高了细菌对多类抗生素的易感性。

摘要： 本发明涉及癌细胞耐药性的标志物、逆转癌细胞耐药性的制剂组合及其应用。该标志物包括癌相关成纤维细胞的CCL5趋化因子及其编码的基因，所述CCL5趋化因子的表达水平与癌细胞耐药性成正相关。该制剂组合包括抑制癌细胞复制的PARP抑制剂和用于调节所述PARP引起的癌细胞耐药性的逆转剂。该逆转剂包括下调癌相关成纤维细胞CCL5表达的调节剂、CCL5的中和抗体和NF‑κB信号抑制剂中的至少一种。采用下调CCL5表达相关调节剂、CCL5中和抗体和/或靶向NF‑κB抑制剂可逆转PARP抑制剂诱导的CAFs活化作用，抑制PARP抑制剂引起的癌细胞耐药性，提升PARP抑制剂杀伤癌细胞的效果。

摘要： 本发明公开了一种用于逆转肿瘤对铂类抗癌药多药耐药性的两亲性药‑药纳米颗粒药物，为包括由组蛋白去乙酰化酶抑制剂与铂类抗肿瘤药物配位，且在水中自组装形成的纳米颗粒；进入肿瘤细胞后水解释放出上述两种药物。本发明的两亲性配合物在水中可自组装形成纳米颗粒，无需任何药物输送载体，该配合物自身就能实现药物输送，可有效地进入肿瘤细胞，降低血液中含硫配体对顺铂的阻滞作用，并减少对正常细胞的毒副作用；并可水解释放出组蛋白去乙酰化酶抑制剂和铂类抗肿瘤活性药物，达到两种药物协同逆转肿瘤对铂类药物多药耐药性和治疗癌症的目的。

摘要： 本发明公开了一种用于逆转肿瘤对铂类抗癌药多药耐药性的两亲性药‑药纳米颗粒药物，为包括由组蛋白去乙酰化酶抑制剂与铂类抗肿瘤药物配位，且在水中自组装形成的纳米颗粒；进入肿瘤细胞后水解释放出上述两种药物。本发明的两亲性配合物在水中可自组装形成纳米颗粒，无需任何药物输送载体，该配合物自身就能实现药物输送，可有效地进入肿瘤细胞，降低血液中含硫配体对顺铂的阻滞作用，并减少对正常细胞的毒副作用；并可水解释放出组蛋白去乙酰化酶抑制剂和铂类抗肿瘤活性药物，达到两种药物协同逆转肿瘤对铂类药物多药耐药性和治疗癌症的目的。

摘要： 本发明公开了一种苗药103鹿血素抗多药耐药性肺结核药，它是鲜鹿血或干鹿血加入少棘巨蜈蚣103蛋白酶，或其它动物、植物、细菌、真菌的103蛋白酶生化降解的粉状103鹿血素，再与白及、水三七及辅料组成。本发明还公开了上述103鹿血素的制备方法。本发明能快速提高人体免疫功能和身体素质，达到自体抗菌、杀菌的功能，从而快速治愈肺结核和多药耐药性肺结核，服药量少，疗程短，复发率极低。本产品配合少数抗结核西药联合治疗，可显著减少西药的毒副作用，抗多药耐药性肺结核效果更好。对提高中医在抗肺结核病的地位，将起大巨大的社会效应和经济效益。