METHOD FOR DETERMINATION OF FUNCTIONAL STATE OF INDUCIBLE NO-SYNTHASE SYSTEM IN PATIENTS WITH CARDIOVASCULAR PATHOLOGY

摘要

Спосіб визначення характеристики стану індуцебельної NO-синтазної системи у хворих з серцево-судинною патологією включає взяття 5 мл крові, що вміщує гепарин. Кров залишають стояти при 20 °С протягом двох годин, плазму крові розчиняють живильним середовищем 199 у співвідношенні 1:1 і повільно нашаровують на розчин фікол-верографіну та центрифугують при 1500 об./хв. протягом 30 хвилин, знімають кільце клітин та промивають від залишків фікол-верографіну шляхом центрифугування розчином повного живильного середовища, в який додають 80 мг/мл гентаміцину та 10 % розчин телячої ембріональної сироватки, рахують кількість клітин у розчині в камері Горяєва на об'єктиві № 10 або 20. Для отримання супернатанту в стерильні пеніцилінові флакони вносять 1 мл клітинної суміші, інкубують 24 години при температурі 37 °С, вміст флаконів центрифугують при 1000 об./хв., відбирають надосадкову рідину, до 0,1 мл надосадкової рідини додають 0,4 мл фізіологічного розчину, проводять депротеїнізацію додаванням 0,2 мл 2N НСlО. Суміш центрифугують при протягом 10 хв., до 0,4 мл супернатанту додають 2 мл реагенту (1 мл diacetyl-monoxim + 1 мл 32 мM antipyrine + ferric sulfate в HSO), кип'ятять протягом 15 хв. на водяній бані і після охолодження визначають величину екстинції на спектрофотометрі при довжині хвилі 465 нм. В стандартну пробу додають 0,1 мл розчину цитруліну.[Способ определения характеристики состояния индуцебельной NO-синтазной системы у больных с сердечно-сосудистой патологией включает забор 5 мл крови, с содержанием гепарина. Кровь оставляют стоять при 20 °С на протяжении двух часов, плазму крови растворяют питательной средой 199 в соотношении 1:1 и медленно наслаивают на раствор фи