一种用于检测重组人表皮生长因子生物学活性的高反应性细胞株

摘要

一种用于检测重组人表皮生长因子生物学活性的高反应性细胞株，利用原有的rhEGF测活细胞NIH3T3，在随机敲除细胞内的某些基因后，挑取单克隆，得到对rhEGF反应性更好的细胞株NIH3T3‑CRSPRV2(6),NIH3T3‑CRISPRV2(6)细胞株经二代测序和转录组热图实验鉴定，敲除的某些基因为Pcdhgb4和H1fx，gRNA分别为ATAGTCTGTGTTTCACTACC、GCGCCCTCGCTAGGGCCCGA。具体检测步骤为：NIH3T3‑CRSPRV2(6)以6,000个/孔铺96孔板，用PBS饥饿30min，加入含系列浓度rhEGF的分析培养基，作用48h，MTT法检测细胞活性。该发明检测方法操作时间缩短，反应灵敏，信噪比较高，降低血清干扰，对于rhEGF的质量控制和临床应用具有重要意义。