斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法

摘要

本发明公开了斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法，包括以下步骤：选择斑马鱼gys1基因序列的第四个外显子序列设计gys1基因敲除的靶点，gys2基因序列的第三个外显子序列设计gys2基因敲除的靶点，根据上述靶点序列设计扩增引物，以pUC19‑scaffold plasmid为模板进行PCR扩增，经纯化和体外转录获得gys1和gys2基因敲除靶点gRNA，再将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼受精卵中，获得稳定遗传的斑马鱼gys1和gys2基因纯合突变体。斑马鱼产卵量大，繁殖周期短，胚体透明，有助于进一步研究人类糖原贮积症的发病进程及详细机制。