一种贝类精巢生精细胞解离和分离的方法

摘要

本发明提供了及一种贝类精巢生精细胞解离和分离的方法，属于海洋贝类细胞的分离技术领域。将增殖期贝类精巢破碎，依次用质量浓度0.1％胶原酶Ⅳ溶液消化和质量百分浓度0.25％胰蛋白酶溶液消化，解离精巢获得单细胞悬液；配制体积浓度10％、22％和35％的Percoll溶液，按浓度由大到小的顺序装入同一离心管中，向离心管的顶层加入贝类生精细胞单细胞悬液，离心，分别收集3层细胞。采用两步酶解法可将精巢组织中的生精细胞成功解离为单细胞悬液，细胞存活率可高到96.62％，并可在体外进行正常培养。同时分离出较高纯度的精原细胞和精母细胞，为研究贝类配子发生和繁育机制提供重要的材料，具有较高的指导意义和应用价值。