一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法及其应用

摘要

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种AEP环化酶在毕赤酵母中的表达方法及其应用。本发明通过在在毕赤酵母中进行表达，通过基因串联的方法使AEP环化酶基因串联拷贝数最高达到了5拷贝，当基因拷贝数达到3时AEP环化酶表达量最高，达到0.89±0.03mg/mL。本发明采用一种新的方式验证AEP环化酶的环化能力，通过构建一种串联底物，选取能够较好的在SDS‑PAGE中观察到并且具备环化的可能性的蛋白为底物，并构建包含TEV蛋白酶的底物序列的串联底物，根据蛋白酶切割后底物大小的变化或者条带数量来鉴定是否环化，操作简单、方便，实用性强。