一种基于石蜡切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法

摘要

本发明公开一种基于石蜡切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法主要包括：获取杨树幼嫩根尖，用卡诺固定液固定；正丁醇梯度溶液脱水、浸蜡、包埋；切片、展片、烤片及脱蜡；制片用果胶酶、纤维素酶、胃蛋白酶及RNA酶处理；制片及探针变性、杂交过夜；二抗孵育后检测杂交信号。本发明所提供的方法可以获得杨树根尖石蜡切片清晰的FISH信号，使用激光共聚焦显微镜捕获的3D图像可以准确反映靶序列在细胞中三维水平的空间分布。本发明的方法可用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi‑C测序结果的分析等研究领域，具有广阔的应用前景。