一种利用L-谷氨酸氧化酶催化生产α-酮戊二酸的方法

摘要

本发明公开一种利用L‑谷氨酸氧化酶催化生产α‑酮戊二酸的方法，包括以下步骤：对L‑谷氨酸氧化酶（L‑GOX）基因的密码子进行优化设计和合成；构建L‑GOX和类弹性蛋白（ELP）的融合表达载体pET‑28a‑LGOX‑ELP并将其转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中，挑取转化子培养并添加诱导剂进行表达，获得重组L‑谷氨酸氧化酶融合蛋白粗酶液；利用ITC方法纯化获得重组L‑谷氨酸氧化酶融合蛋白，利用蛋白酶对重组L‑谷氨酸氧化酶融合蛋白进行酶切，获得成熟的L‑谷氨酸氧化酶；利用成熟的L‑谷氨酸氧化酶催化生产酮戊二酸。本发明方法简单、快速、高效，可用于大规模的分离纯化L‑谷氨酸氧化酶，在酮戊二酸的酶法生产中具有较高的实际应用价值。