一种腈水解酶基因及其原核表达和固定化技术

摘要

本发明涉及一种腈水解酶基因及其原核表达和固定化技术，属于化工酶的原核表达及固定化技术领域。本发明利用PCR技术，以热纤梭菌的基因组为模板克隆到腈水解酶基因，通过大肠杆菌表达系统对该酶进行原核表达，得到含有该腈水解酶基因的重组质粒pET‑28a‑nit，转化到大肠杆菌BL21获得重组菌BL21(pET‑28a‑nit)，诱导重组菌表达获得重组腈水解酶；该腈水解酶基因与连接有孢子外衣壳蛋白基因cotG的高拷贝穿梭质粒连接，构建成用于表面展示的重组质粒pHS‑cotG‑nit，该质粒转入枯草芽孢杆菌菌株DB403获得重组菌DB403(pHS‑cotG‑nit)，诱导重组菌产生的重组芽孢表面展示有该腈水解酶。本发明首次通过孢子表面展示技术对腈水解酶进行固定化，该方法不仅可以使酶的结构更稳定，而且利于酶在催化后的回收再利用，只需要离心就可以把展示有腈水解酶的孢子回收再利用。