一种利用三亲配对接合并以石油烃为唯一碳源筛选携带石油烃降解基因的可自转移广宿主质粒的方法

摘要

本发明涉及生物学技术和污染土壤生物修复技术交叉领域，具体的说一种利用三亲配对接合并以石油烃为唯一碳源筛选携带石油烃降解基因的可自转移广宿主质粒的方法。选用不同的Proteobacteria亚纲的染色体带有选择标记的受体菌与携带不能自我转移(Tra-Mob+)并带选择标记质粒的供体菌，通过与样品三亲配对接合，供体菌的质粒在样品中的可自转(Tra+Mob+)广宿主质粒的协助下进入受体菌，接合子通过受体菌和供体菌质粒带有的选择标记进行筛选。再将筛选的含有可自转广宿主质粒的接合子在以石油烃为唯一碳源的培养基中培养，筛选能够降解石油烃的广宿主质粒。采用本发明提供的三亲配对接合法”能够从石油污染土壤中直接分离降解正辛烷、多环芳烃萘、芴和菲的广宿主代谢质粒，从而为进一步采用该质粒进行污染土壤生物修复提供了遗传材料。