一种血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物的制备方法

摘要

本发明涉及医学检验质量控制领域，特别是指一种血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物的制备方法，收集志愿者捐献血液，分离血清，分析血清中同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸含量，调整各分析成分，加入复合保护剂、防腐剂制备成质控物。根据本申请的质控物质具有优异均匀性，同时保持了良好的稳定性。

说明书

技术领域

本发明涉及一种以人血清为基质的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，具体说是涉及一种血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物的制备方法。

技术背景

同型半胱氨酸是多种疾病的风险因素指标，高水平的同型半胱氨酸不仅是心脑血管疾病的独立危险因素，同时也和多种疾病如：慢性肾病，癌症，呼吸系统疾病，精神障碍，糖尿病并发症等疾病的发生发展密切相关，是临床常规检测项目。随着商品试剂盒的开发和自动化仪器的应用，同型半胱氨酸检测在实验室普遍开展，由于检测工作具有一定的复杂性，实际工作中仍然存在检测准确性的问题，加强检测过程的质量控制显得尤为重要。

质控物质可用于确保检测结果的有效性和可比性。随着临床实验室标本量的增加，质控物质的需求量也相应增多。质量控制物质，最好选用与待测样本具有相同的性质，否则不具备充分的代表性。因此研制用于临床检测的血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物有充分的必要性。制备的质控物质还可用于能力验证、实验室内质量控制等。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术中的不足，而提供一种有良好的均匀性，可稳定保存的液体质控物质。

本发明的另一目的在于提供一种以人血清为基质的质控物的制备方法。

本发明采用如下的制备方法：

(1)血清的制备：原料为收集志愿者捐献血液，分离血清，混合均匀后依次用滤纸、0.45μm、0.22μm硝基纤维素滤膜进行过滤除菌；

(2)除菌后的血清加入同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸的标准溶液制成特定浓度要求的血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物；

(3)加入复合保护剂制备成质控物，混合均匀，分装于无菌冻存管，每瓶0.75mL，-18℃±2℃冷冻保存，得到均一稳定的，血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物。

血清混合后测定同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸初浓度，添加标准溶液至目标浓度，磁力搅拌器以800rpm～1200rpm搅拌1～4小时，目测血清状态为为澄清、淡黄色液体。

作为优选：所述的测定同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸初浓度，采用的方法为液相色谱串联质谱检测方法。

作为优选：混合均匀的原料血清，在生物安全柜中进行抽滤，依次通过滤纸、0.45μm、0.22μm硝基纤维素滤膜进行过滤除菌。

本发明相对于现有技术存在如下技术效果：该质控物质具有良好的均匀性和稳定性，制备简单，使用方便，在-18℃±2℃可长期储存，对于确保检测结果的有效性和可比性以及实验室内质量控制等都可以发挥作用，具有极强的应用前景。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步描述，但并不局限于以下几种实例。

收集志愿者捐献血液，分离血清，要求健康人群，无传染性疾病，无高血压高血脂等基础疾病，混匀，分别用滤纸、0.45μm、0.22μm硝基纤维素滤膜过滤后备用。

实例1

步骤一，取少量血清进行血清同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸检测，得到同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸初浓度，为了制备150mL血清量的同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸质量控制物质(同型半胱氨酸目标值为10～35μmol/L，半胱氨酸目标值为200～400μmol/L，甲硫氨酸目标值为20～60μmol/L)，经计算，按照质控物的要求，加入相应标准储备液，使之达到要求浓度；

步骤二，用移液器先移取同型半胱氨酸标准储备液，再移取半胱氨酸标准储备液，再移取甲硫氨酸标准储备液置于烧杯中，氮气吹干后，加入磁力搅拌器转子，添加150mL血清，搅拌均匀；

步骤三，向步骤二的血清中加入乙二醇15g，叠氮钠0.15g，搅拌至完全溶解，0.75mL/瓶，用无菌冻存管进行分装，贴标签做好标记；

步骤四，同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质均匀性考察。取血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物，随机抽取10瓶，每瓶制备2份平行样本，将所有样本,在重复性条件下进行检测，并用液相色谱串联质谱法进行检测，进行方差分析，同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸的平均值、F值、P值等，结果如表1所示。

表1均匀性测试数据及评价结果

按照下列公式计算F值:

每个样品测试的平均值如下式

全部样品测试的平均值如下式

测试总次数如下式

样品间平方和如下式

样品内平方和如下式

自由度如下式

f

f

统计量如下

F＝MS

经考察，本方法制备的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，F实验值均小于F临界值，无显著性差异，均匀性良好。

步骤五，同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质稳定性考察。均匀性检验作为第1次稳定性测试。取血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物，分别在2～8℃(72h)、室温(20～22℃)4h、-18℃±2℃(12个月)条件下进行稳定性测试，进行t检验，结果如表2所示。

表2稳定性测试数据及评价结果

按照下列公式计算t值:

式中

μ--标准值/参考值；

n--测量次数；

S--n次测试结果的标准偏差。

从表中数据可以看出，本方法制备的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，在2～8℃(72h)、室温(20～22℃)4h、-18℃±2℃(12个月)条件下t值均小于t临界值，无显著性差异，质量稳定，并可存放较长时间(-18℃±2℃可存放12个月)。

实例2

步骤一，取少量血清进行血清同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸检测，得到同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸初浓度，为了制备150mL血清量的同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸质量控制物质(同型半胱氨酸目标值为10～35μmol/L，半胱氨酸目标值为200～400μmol/L，甲硫氨酸目标值为20～60μmol/L)，经计算，按照质控物的要求，加入相应标准储备液，使之达到要求浓度；

步骤二，用移液器先移取同型半胱氨酸标准储备液，再移取半胱氨酸标准储备液，再移取甲硫氨酸标准储备液置于烧杯中，氮气吹干后，加入磁力搅拌器转子，添加150mL血清，搅拌均匀；

步骤三，向步骤二的血清中加入丙三醇15g，青霉素钠0.3g，搅拌至完全溶解，0.75mL/瓶，用无菌冻存管进行分装，贴标签做好标记；

步骤四，同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质均匀性考察。取血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物，随机抽取10瓶，每瓶制备2份平行样本，将所有样本,在重复性条件下进行检测，并用液相色谱串联质谱法进行检测，进行方差分析，同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸的平均值、F值、P值等，结果如表3所示。

表3均匀性测试数据及评价结果

经考察，本方法制备的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，F实验值均小于F临界值，无显著性差异，均匀性良好。

步骤五，同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质稳定性考察。均匀性检验作为第1次稳定性测试。取血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物，分别在2～8℃(72h)、室温(20～22℃)4h、-18℃±2℃(12个月)条件下进行稳定性测试，进行t检验，结果如表4所示。

表4稳定性测试数据及评价结果

可以看出，本方法制备的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，在2～8℃(72h)、室温(20～22℃)4h、-18℃±2℃(12个月)条件下t值均小于t临界值，无显著性差异，质量稳定，并可存放较长时间(-18℃±2℃可存放12个月)。

实例3

步骤一，取少量血清进行血清同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸检测，得到同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸初浓度，为了制备150mL血清量的同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸质量控制物质(同型半胱氨酸目标值为10～35μmol/L，半胱氨酸目标值为200～400μmol/L，甲硫氨酸目标值为20～60μmol/L)，经计算，按照质控物的要求，加入相应标准储备液，使之达到要求浓度；

步骤二，用移液器先移取同型半胱氨酸标准储备液，再移取半胱氨酸标准储备液，再移取甲硫氨酸标准储备液置于烧杯中，氮气吹干后，加入磁力搅拌器转子，添加150mL血清，搅拌均匀；

步骤三，向步骤二的血清中加入乙二醇：丙三醇(1:1)15g，叠氮钠0.2g，搅拌至完全溶解，0.75mL/瓶，用无菌冻存管进行分装，贴标签做好标记；

步骤四，同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质均匀性考察。取血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物，随机抽取10瓶，每瓶制备2份平行样本，将所有样本,在重复性条件下进行检测，并用液相色谱串联质谱法进行检测，进行方差分析，同型半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸的平均值、F值、P值等，结果如表5所示。

表5均匀性测试数据及评价结果

经考察，本方法制备的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，F实验值均小于F临界值，无显著性差异，均匀性良好。

步骤五，同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质稳定性考察。均匀性检验作为第1次稳定性测试。取血清同型半胱氨酸及其代谢途径质控物，分别在2～8℃(72h)条件储存稳定性、室温(20～22℃)4h、-18℃±2℃(12个月)条件下进行稳定性测试，进行t检验，结果如表6所示。

表6稳定性测试数据及评价结果

可以看出，本方法制备的同型半胱氨酸及其代谢途径质控物质，在2～8℃(72h)、室温(20～22℃)4h、-18℃±2℃(12个月)条件下t值均小于t临界值，无显著性差异，质量稳定。本发明不仅局限于以上实施例，其具体实施方式允许有变化，凡在本发明独立要求的保护范围内所做的各种变化均在本发明的保护范围内。