一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法

摘要

本发明公开一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法，包括：称取样品并在干燥预处理后制粉、通过关黄柏粉末制得关黄柏渗滤液，通过关黄柏渗滤液制得关黄柏检测样品液、将样品液加于氧化铝柱并洗脱、采用紫外分光光度计测定吸收度以及根据吸收度计算小檗碱含量；本发明通过对称取的关黄柏树皮样品在相对密闭的恒温环境下进行干燥预处理，并采用超细磨粉机磨制成粉，接着将粉末样品制成关黄柏检测样品液并采用紫外分光光度计测定其紫外线吸收度，以此计算出其中的小檗碱含量，整个检测过程操作简单，耗费的时间相对较少，相比现有的检测方法在一定程度上提高了检测效率，且检测过程中能有效避免样品中小檗碱的流失，从而保证小檗碱的检测精准度。

说明书

技术领域

本发明涉及小檗碱含量检测技术领域，尤其涉及一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法。

背景技术

关黄柏为芸香科黄檗属乔木，树高10-20米，大树高达30米，胸径1米，枝扩展，成年树的树皮有厚木栓层，浅灰或灰褐色，深沟状或不规则网状开裂，果圆球形，径约1厘米，蓝黑色，种子通常5粒，花期5-6月，果期9-10月，树皮内层经炮制后入药，称为黄檗，味苦，性寒，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效，主治急性细菌性痢疾、急性肠炎、急性黄疸型肝炎、泌尿系统感染等炎症，外用治火烫伤、中耳炎、急性结膜炎等。

关黄柏的干燥树皮中含有小檗碱、药根碱、木兰花碱、巴马丁、黄柏碱、甾醇及黏液质等多种成分，其中小檗碱是最具代表性的药效成分之一，小檗碱亦称黄连素，是从中药黄连中分离的一种季铵生物碱，是黄连抗菌的主要有效成分，所以检测关黄柏树皮中小檗碱的含量可以为其药用质量提供重要依据。

目前检测关黄柏中小檗碱含量的方法有很多，但检测过程大都较为繁琐，需要较长的测定时间，导致小檗碱含量的检测效率较低，且对检测样品进行处理时不能有效避免小檗碱的流失，导致小檗碱的检测精准度也受到一定影响，不利于快速准确的分析关黄柏的药用质量，因此，本发明提出一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法以解决现有技术中存在的问题。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提出一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法，解决现有的关黄柏中小檗碱含量检测方法存在检测过程较为繁琐，需要较长的测定时间，导致小檗碱含量的检测效率较低，以及对检测样品进行处理时不能有效避免小檗碱的流失，导致小檗碱的检测精准度也受到一定影响的问题。

为了实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案实现：一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法，包括以下步骤：

步骤一：先根据实际检测需要称取定量的关黄柏树皮样品，再在相对密闭的恒温环境下对称取的关黄柏树皮样品进行干燥预处理，接着采用超细磨粉机将干燥预处理后的关黄柏树皮样品磨制成粉，制得关黄柏粉末备用；

步骤二：先将步骤一中制得的关黄柏粉末与石灰乳进行均匀搅拌，搅拌完成后以水浸泡并进行渗滤，获得关黄柏渗滤液，接着在关黄柏渗滤液中加入氯化钠，并在静置后过滤出其中的沉淀，随后将沉淀溶于热水并过滤，得到滤液，之后对滤液进行水浴蒸干并加入甲醇，制得关黄柏检测样品液；

步骤三：先将步骤二中制得的关黄柏检测样品液加于氧化铝柱并采用乙醇进行分次洗脱，再取产生的洗脱液置于量瓶中，接着在量瓶中先后加入乙醇和硫酸液并混合均匀，制得混合液，再采用紫外分光光度计测定混合液的紫外线吸收度，最后基于朗伯比尔定律并根据测定的紫外线吸收度计算小檗碱含量。

进一步改进在于：所述步骤一中，对关黄柏树皮样品进行干燥预处理的具体步骤为：先对称取的关黄柏树皮样品进行筛分除杂，以去除其中杂质，再将除杂后的关黄柏树皮样品进行切片并干燥至含水量低于预设值。

进一步改进在于：所述关黄柏树皮样品在切片后置于烘干机中进行烘干，烘干温度设为80～90℃，烘干时间为2～3小时，烘干后对关黄柏树皮样品切片的含水量进行测定，并保证关黄柏树皮样品切片的含水量低于8％。

进一步改进在于：所述步骤二中，关黄柏渗滤液与氯化钠的质量比为5:1，关黄柏渗滤液中加入氯化钠后静置20～30分钟，沉淀溶于70～80℃的热水并在保持恒温状态下过滤，水浴蒸干产物与甲醇的质量比为2:1。

进一步改进在于：所述步骤二中，水浴蒸干的具体步骤为：先将滤液倒入玻璃容器中，再在水浴池内加水并加热，加热至95～100℃时将装有滤液的玻璃容器放入水浴池内进行水浴蒸干，并保证水浴池内的水浸没玻璃容器三分之二的高度。

进一步改进在于：所述步骤三中，所述氧化铝柱为玻璃柱并采用中性氧化铝进行湿法装柱制成，装柱前采用乙醇预先对玻璃柱进行清洗。

进一步改进在于：所述步骤三中，测定小檗碱吸收度时采用展开剂将混合液展开，所述展开剂由苯、醋酸乙酯、甲醇、异丙醇和浓氨试液按质量比6:3:1.5:1.5:0.75混合制备而成。

进一步改进在于：所述步骤三中，所述硫酸液的摩尔浓度为0.05mol·L

本发明的有益效果为：本发明先对称取的关黄柏树皮样品在相对密闭的恒温环境下进行干燥预处理，并采用超细磨粉机磨制成粉，接着将粉末样品制成关黄柏检测样品液并采用紫外分光光度计测定其紫外线吸收度，以此计算出其中的小檗碱含量，整个检测过程操作简单，耗费的时间相对较少，相比现有的一些检测方法在一定程度上提高了检测效率，且检测过程中能有效避免样品中小檗碱的流失，从而保证了小檗碱的检测精准度，有利于快速准确的分析关黄柏的药用质量，值得广泛推广应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明的关黄柏中小檗碱含量检测方法的流程示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

参见图1，本实施例提供了一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法，包括以下步骤：

步骤一：先根据实际检测需要并采用精密称量仪器称取定量的关黄柏树皮样品，再在相对密闭的恒温环境下对称取的关黄柏树皮样品进行干燥预处理，具体步骤为：先对称取的关黄柏树皮样品进行筛分除杂，以去除其中杂质，再将除杂后的关黄柏树皮样品进行切片，然后将关黄柏树皮切片置于烘干机中进行烘干，烘干温度设为80℃，烘干时间为2小时，烘干后对关黄柏树皮样品切片的含水量进行测定，并保证关黄柏树皮样品切片的含水量低于8％，通过烘干机以恒温烘干的方式对关黄柏树皮样品切片进行干燥，相比传统的晾晒干燥方式，可以最大程度上保留关黄柏树皮样品切片中的各药用成分的流失，一定程度上保证了检测结果的精确度，接着采用超细磨粉机将干燥预处理后的关黄柏树皮样品磨制成粉，制得关黄柏粉末备用，通过将样品磨制成粉，便于后续分析处理；

步骤二：先将步骤一中制得的关黄柏粉末与石灰乳进行均匀搅拌，搅拌完成后以水浸泡并进行渗滤，目的是使关黄柏粉末中的黏液质与石灰乳生成钙盐而沉淀除去，获得关黄柏渗滤液，接着在关黄柏渗滤液中加入氯化钠，其中关黄柏渗滤液与氯化钠的质量比为5:1，黄柏渗滤液中加入氯化钠后静置20分钟，再过滤出静置液中的沉淀，随后将滤出的沉淀溶于70℃的热水并在保持恒温状态下过滤，得到滤液，之后将滤液倒入玻璃容器中，再在水浴池内加水并加热，加热至95℃时将装有滤液的玻璃容器放入水浴池内进行水浴蒸干，并保证水浴池内的水浸没玻璃容器三分之二的高度，水浴蒸干后在玻璃容器中加入甲醇，制得关黄柏检测样品液，其中水浴蒸干产物与甲醇的质量比为2:1；

步骤三：先将步骤二中制得的关黄柏检测样品液加于氧化铝柱并采用乙醇进行分次洗脱，其中氧化铝柱为玻璃柱并采用中性氧化铝进行湿法装柱制成，装柱前采用乙醇预先对玻璃柱进行清洗，以保证氧化铝柱的洁净度，再取产生的洗脱液置于量瓶中，接着在量瓶中先后加入乙醇和摩尔浓度为0.05mol·L

实施例二

参见图1，本实施例提供了一种快速检测关黄柏中小檗碱含量的方法，包括以下步骤：

步骤一：先根据实际检测需要并采用精密称量仪器称取定量的关黄柏树皮样品，再在相对密闭的恒温环境下对称取的关黄柏树皮样品进行干燥预处理，具体步骤为：先对称取的关黄柏树皮样品进行筛分除杂，以去除其中杂质，再将除杂后的关黄柏树皮样品进行切片，然后将关黄柏树皮切片置于烘干机中进行烘干，烘干温度设为90℃，烘干时间为3小时，烘干后对关黄柏树皮样品切片的含水量进行测定，并保证关黄柏树皮样品切片的含水量低于8％，通过烘干机以恒温烘干的方式对关黄柏树皮样品切片进行干燥，相比传统的晾晒干燥方式，可以最大程度上保留关黄柏树皮样品切片中的各药用成分的流失，一定程度上保证了检测结果的精确度，接着采用超细磨粉机将干燥预处理后的关黄柏树皮样品磨制成粉，制得关黄柏粉末备用，通过将样品磨制成粉，便于后续分析处理；

步骤二：先将步骤一中制得的关黄柏粉末与石灰乳进行均匀搅拌，搅拌完成后以水浸泡并进行渗滤，目的是使关黄柏粉末中的黏液质与石灰乳生成钙盐而沉淀除去，获得关黄柏渗滤液，接着在关黄柏渗滤液中加入氯化钠，其中关黄柏渗滤液与氯化钠的质量比为5:1，黄柏渗滤液中加入氯化钠后静置30分钟，再过滤出静置液中的沉淀，随后将滤出的沉淀溶于80℃的热水并在保持恒温状态下过滤，得到滤液，之后将滤液倒入玻璃容器中，再在水浴池内加水并加热，加热至100℃时将装有滤液的玻璃容器放入水浴池内进行水浴蒸干，并保证水浴池内的水浸没玻璃容器三分之二的高度，水浴蒸干后在玻璃容器中加入甲醇，制得关黄柏检测样品液，其中水浴蒸干产物与甲醇的质量比为2:1；

步骤三：先将步骤二中制得的关黄柏检测样品液加于氧化铝柱并采用乙醇进行分次洗脱，其中氧化铝柱为玻璃柱并采用中性氧化铝进行湿法装柱制成，装柱前采用乙醇预先对玻璃柱进行清洗，以保证氧化铝柱的洁净度，再取产生的洗脱液置于量瓶中，接着在量瓶中先后加入乙醇和摩尔浓度为0.05mol·L

由朗伯比尔定律可以得到：当一束平行单色光通过一定液层厚度的有色溶液时，由于溶质吸收了光能，光的强度就会减弱。溶液浓度越大，液层越厚，入射光越强，则光被吸收的就越多，用公式表示为：A＝E*C*L(A为吸光度，C为溶液浓度，L为液层厚度)，E是物质在一定波长下的特征常数，与对光吸收的灵敏度呈正相关。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。