非诊断性禽流感病毒间接原位RT-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种特异性好、敏感性高的非诊断性禽流感病毒间接原位RT-PCR检测方法，从GeneBank下载禽流感病毒NP基因序列，通过比对选取NP基因中较为保守的片段，设计一对引物，运用RT-PCR法合成检测所用的标记探针，然后在经前处理后的细胞涂片和石蜡切片上用上述引物进行原位RT-PCR，再与地高辛标记的探针进行原位杂交，对细胞和组织中的禽流感病毒进行检测和定位。研究结果表明，本方法能检测出约1pg/uL质粒的DNA，并能特异性地在细胞涂片和石蜡组织切片中检测和定位禽流感病毒，且成纤维细胞感染病毒8h后即可检测到阳性信号，具有良好的特异性和较高的敏感性，为动物组织中禽流感病毒的检测定位和致病机理研究提供了敏感、特异和更为直观的方法。