柯里拉京在抗冠状病毒中的应用

摘要

本发明公开了多酚类物质等多种化合物在抗冠状病毒中的应用。多酚类物质、质子泵抑制剂、对苯醌及其衍生物、苏木的活性成分、TDZD‑8、硫柳汞、紫草素、Tideglusib、原黄素、雷贝拉唑钠、PX‑12、Dixanthogen、胆酸甲酯、卡莫氟、柯里拉京、二氢杨梅素、氯胺T、汞溴红、没食子儿茶素、秦皮素、甲异靛、乳酸乙吖啶一水合物以及南索拉唑中的一种或多种在制备治疗和/或预防冠状病毒引发的疾病的药物中的应用。本发明通过体外酶活实验发现1,4‑萘醌等多种化合物可以很好地抑制冠状病毒中的主蛋白酶的活性，填补了现有技术缺乏治疗冠状病毒引发的疾病的不足。

说明书

本专利申请为申请号为：CN202110219570.X，申请日为2021年02月26日，发明名称为《多酚类物质在抗冠状病毒中的应用》的分案申请。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及柯里拉京在抗冠状病毒中的应用，具体涉及柯里拉京在制备治疗和/或预防冠状病毒引发的疾病的药物中的应用。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)，日前SARS-CoV-2冠状病毒基因组序列已经公布，该序列与SARS-Cov的核苷酸相似度约为90％，蛋白质序列与SARS-CoV有约80％的序列相似性。冠状病毒的基因组为单股正链RNA，长度约28kb，主要编码病毒包装所需的结构蛋白以及与复制转录相关的非结构蛋白。开发治疗冠状病毒相关疾病的药物和疫苗主要针对上述两类蛋白。病毒基因组的三分之二的基因主要编码非结构蛋白。病毒编码了两种多聚酶蛋白pp1a和pp1ab，用于参与病毒的复制过程。pp1a和pp1ab通过两种由病毒编码的木瓜蛋白酶和主蛋白酶(main protease)可以将其切割成16个非结构蛋白nsp1-16，只有当这些功能亚基被病毒编码的蛋白酶切割成独立的蛋白单元，病毒才能完成正常的转录、复制功能，进而组装成复制转录复合物，完成病毒的复制和转录。其中，木瓜蛋白酶有3个酶切位点；主蛋白酶在pp1a和pp1ab上存在11个酶切位点。可见主蛋白酶在病毒的转录、复制过程中发挥关键的调节作用，因此成为研究的焦点(Ziebuhr,J.； Snijder,E.J.；Gorbalenya,A.E.Virus-encoded proteinases and proteolytic processing in theNidovirales.J Gen Virol 2000,81,853-79.；Ziebuhr,J.Molecular biology of severeacute respiratory syndrome coronavirus.Curr Opin Microbiol 2004,7,412-9.)。由于主蛋白酶对冠状病毒扩增复制的重要性，因此寻找针对主蛋白酶催化位点专一性强、安全性高的抑制剂对于药物开发显得尤其重要。

1,4-萘醌(1,4-Naphthoquinone；CAS号：130-15-4)现有技术中被用作单胺氧化酶和 DNA拓扑异构酶活性的潜在抑制剂，也被用于抑制乙酰转移酶活性(Coelho-CerqueiraE, Netz P A,Canto V P D,et al.Beyond Topoisomerase Inhibition:Antitumor 1,4-Naphthoquinones as Potential Inhibitors of Human Monoamine Oxidase[J].Chemical Biology &Drug Design,2014,83(4):401-410.；Naphthoquinone-mediatedInhibition of Lysine Acetyltransferase KAT3B/p300,Basis for Non-toxicInhibitor Synthesis*[J].Journal of Biological Chemistry,2014,289.)，也可作为某些化合物合成的前体，主要是作为亲二烯体通过Diels-Alder环加成反应用于制备各种芳香环化合物(Dodge,Jeffrey A,Bain,J.D, Chamberlin,A.Richard.Regioselectivesynthesis of substituted rubrenes[J].Journal of Organic Chemistry,55(13):4190-4198.；Manfred,Haber,and,et al.N-benzoylindole-2,3-quinodimethane: Diels-Alder reactivity and synthetic applications for[b]annellated indoles[J].)，也可用于蒽醌、非线形苯并多环抗生素等化合物的生产。

TDZD-8(CAS号：327036-89-5)是一种非ATP竞争性的糖原合成酶激酶GSK-3β的抑制剂，IC

巴西木素(Brazilin；CAS号：474-07-7)存在于豆科植物苏木中，是苏木的主要活性成分，也可由合成法得到外消体，再经拆分制得。其应用非常广泛，最早被用作天然的红色生物染色剂(H Puchtler,F Sweat.On the mechanism of sequence iron-hemateinstains[J]. Histochemie.histochemistry.histochimie,1964,4(3):197-208.)，后续研究进一步发现其具有抗肿瘤、降血糖(Gwi-Seo Hwang,Ji-Young Kim,Tong-Shin Chang,Sun-Duck Jeon,Dhong- Su So,&Chang-Kiu Moon.Effects of brazilin on thephospholipase a2activity and changes of intracellular free calciumconcentration in rat platelets.Archives of Pharmacal Research,21(6), 774-778.)、抗炎(Hikino H,Tagushi T,Fujimura H,et al.Antiinflammatory principles ofCaesalpinia sappan wood and of Haematoxylon campechianum wood[J].1977,31(03):214- 220.)、抗菌(Hong-Xi Xu,Song F Lee.The antibacterial principle ofCaesalpina sappan[J]. Phytotherapy Research Ptr,2004,18(8):647-651.)、抗血小板(H Puchtler,F Sweat.On the mechanism of sequence iron-hematein stains[J].Histochemie.histochemistry.histochimie,1964, 4(3):197-208.)、保肝(Chang-Kiu Moon,Kwang-Sik Park,Seong-Gon Kim,Hyeon-Soon Won, &Jin-Ho Chung.(2008).Brazilinprotects cultured rat hepatocytes from brcci3-induced toxicity. Drug&ChemicalToxicology.)等多种生物活性。

硫柳汞(Thimerosal；CAS号：54-64-8)是一种由50％汞构成的有机化合物。具有防腐和杀菌作用，已被认定为是一种完善的防腐剂和抗真菌剂。它已被用作疫苗、免疫球蛋白制剂、皮肤测试抗原、抗蛇毒蛋白、眼科和鼻科产品以及纹身墨水中的防腐剂 (DrugBank3.0:a comprehensive resource for'omics'research on drugs.[J].Nucleic acidsresearch,2011.)。

紫草素(Shikonin；CAS号：517-89-5)是中草药紫草的主要成分，是一种天然染料，被用作食用色素和化妆品。紫草素还被发现具有伤口愈合，抗肿瘤和抗血栓形成的特性。紫草素是一种有效的TMEM16A氯化物通道的抑制剂，IC50为6.5μM(Jiang,Yu,Yu,Bo, Yang,Hong,et al.Shikonin Inhibits Intestinal Calcium-Activated Chloride Channelsand Prevents Rotaviral Diarrhea.Front Pharmacol.2016Aug 23；7:270.)。紫草素还是是一种特异的丙酮酸激酶M2(PKM2)的抑制剂，还可以抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)并阻止核因子-κB(NF-κB)通路的激活(Li Wenjuan,Zhang Chunjing,Ren Amy,et al.ShikoninSuppresses Skin Carcinogenesis via Inhibiting Cell Proliferation.PLoSOne.2015May 11；10(5):e0126459.)。相关专利申请为JP2837715B2。

Tideglusib(替徳格塞；CAS号：865854-05-3)是一种不可逆的非ATP竞争性的GSK3小分子抑制剂，已在二期临床试验中被研究为治疗阿尔茨海默症和瘫痪性核上性麻痹的潜在药物。Tideglusib是由噻二唑烷二酮衍生的GSK-3抑制剂，IC50值为105nM(通过人重组GSK-3的方法测定)(Domínguez JM,Fuertes A,et al.Evidence for irreversibleinhibition of glycogen synthase kinase-3βby tideglusib.J Biol Chem.2012Jan 6；287(2):893- 904.)。

2017年自然科学杂志(Skrott,Zdenek,et al."Alcohol-abuse drug disulfiramtargets cancer via p97 segregase adaptor NPL4."Nature 552.7684(2017):194-199.]),发表了其抗肿瘤活性，研究发现Disulfiram在体内能被代谢成为一种小分子，从而促进天然蛋白NPL4 凝结并与其配偶体p97酶类结合，这个过程就会抑制促进肿瘤生长的NPL4-p97复合体发挥作用，进而诱发癌细胞死亡。此外，Disulfiram还被发现对锌指和环指泛素E3连接酶具有特异性活性，这些连接酶在癌症的发展中起着重要的作用(R Kona,F.,D.A.M.B. Buac,and A.M Burger."Disulfiram,and disulfiram derivatives as novelpotential anticancer drugs targeting the ubiquitin proteasome system in bothpreclinical and clinical studies."Current cancer drug targets 11.3(2011):338-346.)。相关专利申请为WO2017077336A1。

苏木精(Hematoxylin；CAS号：517-28-2)：主要用途是诊断癌症恶化，检测嗅癌症进展，宫颈疾病，中枢神经系统故障，以及检测基因，乳腺癌，组织样本中的胶原蛋白，和细胞凋亡，脱髓鞘疾病，抗原。也能够在老年性黄斑变性的治疗，烧伤，前列腺癌，肥胖、病毒性疾病、肿瘤、周围神经和血管疾病、皮肤疾病中应用，生物技术应用，和细胞学、组织学和免疫组织化学的标准对照材料(Fischer,Andrew H.,et al."Hematoxylin and eosinstaining of tissue and cell sections."Cold spring harbor protocols 2008.5(2008):pdb- prot4986)。

对苯醌(p-Benzoquinone；CAS号：106-51-4)用作毒芹碱、吡啶、氮杂茂、酪氨酸和对苯二酚的定性检定，氨基酸测定，脱氢剂，氧化剂和制造染料。对苯醌是一种常用的氧化试剂或脱氢试剂(Natori,Itaru,and Hisaya Sato."Reactivity of quinones for thedehydrogenation of poly(1,3-cyclohexadiene)."Polymer international 56.6(2007):810-815.)，因为它很容易被其它化合物还原为对苯二酚，从而能表现出氧化活性，并且其自身的氧化电位决定了1,4-苯醌能够在多种醇化合物共存的情况下选择性地氧化共轭的一级烯丙醇，如在二级醇和苄醇共存情况下选择性地将肉桂醇氧化为肉桂醛(Natori,Itaru,and Hisaya Sato."Reactivity of quinones for the dehydrogenationof poly(1,3-cyclohexadiene)." Polymer international 56.6(2007):810-815.)。此外，采用1,4-苯醌作为脱氢试剂和水合氧化锆作为催化剂还能实现一级醇的氧化反应。相关专利申请GB875948A。

原黄素(Proflavine；CAS号：92-62-6)为外用防腐剂，主要用于伤口敷料。原黄素是一种吖黄素衍生物(Sabolova,Danica,Pavol Kristian,and Mária Kozurkova. "Proflavine/acriflavine derivatives with versatile biological activities."Journal of Applied Toxicology 40.1(2020):64-71.)，是对多种革兰氏阳性菌的抑菌消毒剂。原黄素在哺乳动物中是有毒和致癌的，所以它只被用作表面消毒剂或治疗表面伤口。原黄素通过插入 DNA起作用，从而破坏DNA合成并导致复制DNA链的高水平突变，这可以防止细菌繁殖(Davies,D.S.,C.N.Hinshelwood,and J.M.Pryce."The adaptation ofBact.lactis aerogenes to varying concentrations of an antibacterial drug(proflavine)."Transactions of the Faraday Society 41(1945):163-169.)。

Rebeprazole sodium(雷贝拉唑钠；CAS号：117976-90-6)是一种抗溃疡药物(Carswell, Christopher I.,and Karen L.Goa."Rabeprazole."Drugs 61.15(2001):2327-2356.)，属于质子泵抑制剂，是雷贝拉唑的钠盐形式。日本卫材(Eisai)公司首次成功开发了这款产品，其商标为博利特(Bolite)。质子泵抑制剂的作用是减少胃酸的分泌，使病变部位得以稳定，从而达到治疗胃溃疡、十二指肠溃疡和胃食管反流病的效果。临床上主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡、消化性溃疡、胃食管反流病、佐林-埃里森综合征等酸性相关疾病的治疗。雷贝拉唑是一种苯并咪唑类取代化合物，它通过与胃壁的细胞质质子泵结合而抑制胃酸的分泌(Kawakami,Yoshiyuki,et al."In Vitro Activities of Rabeprazole,aNovel Proton Pump Inhibitor,and Its Thioether Derivative Alone and inCombination with Other Antimicrobials against Recent Clinical IsolatesofHelicobacter pylori."Antimicrobial agents and chemotherapy 44.2(2000):458-461)，能特异性抑制胃酸生产过程中的关键酶腺苷三磷酸酶的作用，对基础胃酸及刺激引起的胃酸分泌均有抑制作用。

Myricetin(杨梅黄酮、别名杨梅素；CAS号：529-44-2)是一种黄酮类化合物，能够清除自由基，抗氧化，抗肿瘤，降低神经毒性，影响淋巴细胞的激活和增殖(Ong,Kian C.,and Hoon-Eng Khoo."Biological effects of myricetin."General Pharmacology:TheVascular System 29.2(1997):121-126.)。

杨梅素的主要功能:1)抗氧化剂的作用：杨梅素是一种很强的抗氧化剂(Yao,Yashu,et al."Preformulation studies of myricetin:a natural antioxidantflavonoid."Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences69.1(2014):19-26.)，氧化应激在缺血、老年痴呆等多种神经系统疾病中起关键作用。Myricetin通过构象变化效应来减少-淀粉酶的产生和毒性。2)抗肿瘤作用(ZHANG,Li-jing,et al."Antitumor activities of the extracts from the bark of Myricarubra Sieb.et Zucc.and myricetin[J]."Journal of Shenyang PharmaceuticalUniversity 4(2009))：杨梅素是一种有效的致癌化学控制剂。3)降低神经毒性(Chang,Yi,et al."Myricetin inhibits the release of glutamate in rat cerebrocorticalnerve terminals."Journal of medicinal food 18.5(2015):516-523.)：杨梅素可通过不同途径抑制谷氨酸神经毒性诱导的神经元保护，从而有效预防神经损伤。4)对淋巴细胞活化和增殖的影响：杨梅素可抑制早期T细胞CD69活化指数表达(Han,Rong,et al."Effectof total flavonoids from the seeds of Astragali complanati on natural killercell function."Journal of ethnopharmacology 173 (2015):157-165)，抑制淋巴细胞增殖反应。5)血小板活化因子(PAF)拮抗：myricetin在体外对PAF诱导的WRP聚集的浓度依赖性和52HT的释放(Zang,B.X.,et al."Antagonistic effect of myricetin onplatelet activing factor."Yao xue xue bao＝Acta pharmaceutica Sinica 38.11(2003):831-833)。同时能明显抑制血小板Ca

PX-12(丙基-2-咪唑二硫醚；CAS号：141400-58-0)是氧化还原蛋白硫氧还蛋白的小分子不可逆抑制剂(Baker,Amanda F.,et al."The antitumor thioredoxin-1inhibitor PX-12 (1-methylpropyl 2-imidazolyl disulfide)decreasesthioredoxin-1and VEGF levels in cancer patient plasma."Journal of Laboratoryand Clinical Medicine 147.2(2006):83-90)，刺激细胞凋亡，在动物模型中下调HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)和抑制肿瘤的生长 (Jordan,Bénédicte F.,et al."Thethioredoxin-1inhibitor 1-methylpropyl 2-imidazolyl disulfide (PX-12)decreasesvascular permeability in tumor xenografts monitored by dynamic contrastenhanced magnetic resonance imaging."Clinical cancer research 11.2(2005):529-536)。由于高水平的Trx-1与结直肠癌、胃癌和肺癌相关，因此，对于晚期转移癌患者，PX-12被认为是一种与化疗联合使用的潜在癌症治疗手段(Jordan,Bénédicte F.,et al."Thethioredoxin- 1inhibitor 1-methylpropyl 2-imidazolyl disulfide(PX-12)decreasesvascular permeability in tumor xenografts monitored by dynamic contrastenhanced magnetic resonance imaging." Clinical cancer research 11.2(2005):529-536.)。

Dixanthogen(分子式为C

卡莫氟(Carmofur，分子式为C

胆酸甲酯(Methyl Cholate；分子式C

二氢杨梅素(Dihydromyricetin；分子式：C

柯里拉京(Corilagin分子式：C

氯胺T(Chloramine-T分子式：C

汞溴红(Merbromin分子式：C

艾普拉唑钠(Ilaprazole sodium；分子式为C

蟛蜞菊内酯(Wedelolactone；分子式为C

表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Epigallocatechin Gallate；分子式为C

茶多酚(Tea polyphenol；CAS号：84650-60-2)是从茶树的干叶中提取，有抗氧化和抗癌活性，还可以抑制衣原体细菌的增殖活性(现有专利申请：EP1005862A1和EP0417385A2)。

百里香醌(Thymoquinone；分子式为C

甲基儿茶酚(4-Methylcatechol；分子式为C

没食子儿茶素((+)-Gallocatechin；分子式为C

原苏木素B(Protosappanin B；分子式为C

秦皮素(Fraxetin；分子式为C

乳酸乙吖啶一水合物(Ethacridine lactate monohydrate；分子式为C

甲异靛(Meisoindigo；分子式为C

迷迭香酸(Rosmarinic acid；分子式为C

南索拉唑(Lansoprazole；分子式为C

埃索美拉唑镁(Esomeprazole Magnesium；分子式为C

现有技术中尚无以上药物可用于治疗冠状病毒引发的相关疾病。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中尚无有效治疗和/或预防冠状病毒所引发的疾病的药物的缺陷，提供多酚类物质在抗冠状病毒中的应用，具体涉及多酚类物质等化合物在制备治疗和/或预防冠状病毒引发的疾病的药物中的应用。

本发明主要通过以下技术方案解决上述技术问题。

本发明提供多酚类物质、质子泵抑制剂、对苯醌(CAS号：106-51-4)及其衍生物、苏木的活性成分、TDZD-8(CAS号：327036-89-5)、硫柳汞(CAS号：54-64-8)、紫草素(CAS号：517-89-5)、Tideglusib(CAS号：865854-05-3)、原黄素(CAS号：92-62- 6)、杨梅黄酮(CAS号：529-44-2)、PX-12(CAS号：141400-58-0)、Dixanthogen(CAS 号：502-55-6)、胆酸甲酯(CAS号：1448-36-8)、卡莫氟(CAS号：61422-45-5)、柯里拉京(CAS号：23094-69-1)、二氢杨梅素(CAS号：27200-12-0)、氯胺T(CAS号： 127-65-1)、汞溴红(CAS号：129-16-8)、没食子儿茶素(CAS号：970-73-0)、秦皮素 (CAS号：574-84-5)、甲异靛(CAS号：97207-47-1)、乳酸乙吖啶一水合物(CAS号： 6402-23-9)以及南索拉唑(CAS号：103577-45-3)中的一种或多种在制备治疗和/或预防冠状病毒引发的疾病的药物中的应用。

具体地为：多酚类物质、质子泵抑制剂、对苯醌及其衍生物、苏木的活性成分、TDZD- 8(CAS号：327036-89-5)、硫柳汞(CAS号：54-64-8)、紫草素(CAS号：517-89-5)、Tideglusib(CAS号：865854-05-3)、原黄素(CAS号：92-62-6)、杨梅黄酮(CAS号： 529-44-2)、PX-12(CAS号：141400-58-0)、Dixanthogen(CAS号：502-55-6)、胆酸甲酯(CAS号：1448-36-8)、卡莫氟(CAS号：61422-45-5)、柯里拉京(CAS号：23094- 69-1)、二氢杨梅素(CAS号：27200-12-0)、氯胺T(CAS号：127-65-1)、汞溴红(CAS 号：129-16-8)、没食子儿茶素(CAS号：970-73-0)、秦皮素(CAS号：574-84-5)、甲异靛(CAS号：97207-47-1)、乳酸乙吖啶一水合物(CAS号：6402-23-9)或者南索拉唑 (CAS号：103577-45-3)在制备治疗和/或预防冠状病毒引发的疾病的药物中的应用。

较佳地，所述的苏木的活性成分选自苏木精(CAS号：517-28-2)、原苏木素B(CAS号：102036-29-3)或者巴西木素(CAS号：474-07-7)。

较佳地，所述的对苯醌衍生物选自百里香醌(CAS号：490-91-5)或者1,4-萘醌(CAS号：130-15-4)。

较佳地，所述的质子泵抑制剂选自雷贝拉唑钠(CAS号：117976-90-6)、艾普拉唑钠(CAS号：172152-50-0)或者埃索美拉唑镁(CAS号：161973-10-0)。

较佳地，所述的多酚类物质选自蟛蜞菊内酯(CAS号：524-12-9)、表没食子儿茶素没食子酸酯(CAS号：989-51-5)、甲基儿茶酚(CAS号：452-86-8)、茶多酚(CAS号： 84650-60-2)或者迷迭香酸(CAS号：20283-92-5)。

较佳地，所述的疾病为哺乳动物或者禽类疾病。

较佳地，所述的哺乳动物包括人、猪和猫。

本发明所述的冠状病毒，其定义为本领域熟知，在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)。冠状病毒是具有囊膜(envelope)、基因组为单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。

本发明的目的是提供冠状病毒感染引起的疾病的潜在治疗方案。本发明所述的冠状病毒较佳地属于正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)，更佳地属于Alpha冠状病毒属、Beta冠状病毒属、Gamma冠状病毒属或者Delta冠状病毒属。

在本发明一较佳实施例中，所述的化合物除可用于治疗SARS-CoV-2(Beta冠状病毒属)引发的疾病以外，还应可治疗其他冠状病毒SARS-CoV(Beta冠状病毒属)和MERS- CoV等引起的重大传染病，亦可作为普通感冒药，治疗HCoV-HKU1(Human coronavirus HKU1；Beta冠状病毒属)、HCoV-NL63(Human coronavirus NL63；Alpha冠状病毒属)、 HCoV-OC43(Human coronavirus OC43)以及HCoV-229E(Human coronavirus 22E；Alpha 冠状病毒属)等冠状病毒引起的疾病；还可作为兽药，治疗猪传染性胃肠炎病毒 (Transmissiblegastroenteritis virus,TGEV；Alpha冠状病毒属)、猪流行性腹泻病毒 (Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV；Alpha冠状病毒属)、猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV；Delta冠状病毒属)、猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectiousperitonitis virus,FIPV；Alpha冠状病毒属)、禽传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitis virus,IBV；Gamma冠状病毒属)等动物疾病。

因此，本发明所述冠状病毒的较佳地选自SARS-CoV-2、SARS-CoV、MERS-CoV、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E、TGEV、PEDV、PDCoV、FIPV 或者IBV。

在某一方案中，本发明的以上化合物或其药学上可接受的盐以包含其的药物组合物的形式存在；较佳地，所述药物组合物以本发明所述化合物和/或其药学上可接受的盐作为所述药物组合物的唯一活性成份；和/或，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体，例如药学上可接受的药用辅料。

在某一方案中，本发明的以上多种化合物或其药学上可接受的盐以包含其的套装药盒的形式存在，所述套装药盒还包括治疗与冠状病毒相关的疾病的药物和/或治疗其他病毒引起的疾病的药物。

本发明提供了柯里拉京在制备抑制冠状病毒的药物中的应用。

在某一方案中，所述冠状病毒为SARS-CoV-2。

本发明中涉及的以本发明多种化合物作为活性成份的药物组合物，均可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的重量含量通常为0.1-99.0％。

所述的药学可接受的载体可为本领域常规的载体，所述的载体可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更佳地，所述的药物组合物包括0.01～99.99％的上述蛋白质和/或上述的抗体药物偶联物，和0.01～99.99％的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。

本发明化合物或含其的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也可以制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

术语“药学上可接受的”是指盐、溶剂、辅料等一般无毒、安全，并且适合于患者使用。所述的“患者”优选哺乳动物，更优选为人类。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与相对无毒的、药学上可接受的酸或碱制备得到的盐。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的药学上可接受的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括但不限于：锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、镁盐、锌盐、铋盐、铵盐、二乙醇胺盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的药学上可接受的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。所述的药学上可接受的酸包括无机酸，所述无机酸包括但不限于：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、磷酸、亚磷酸、硫酸等。所述的药学上可接受的酸包括有机酸，所述有机酸包括但不限于：乙酸、丙酸、草酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、甲磺酸、异烟酸、酸式柠檬酸、油酸、单宁酸、泛酸、酒石酸氢、抗坏血酸、龙胆酸、富马酸、葡糖酸、糖酸、甲酸、乙磺酸、双羟萘酸(即4,4’-亚甲基-双(3-羟基-2-萘甲酸))、氨基酸(例如谷氨酸、精氨酸)等。当本发明的化合物中含有相对酸性和相对碱性的官能团时，可以被转换成碱加成盐或酸加成盐。具体可参见Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19(1977)、或、Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(P.Heinrich Stahl andCamille G.Wermuth,ed.,Wiley-VCH,2002)。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

本发明通过体外酶活实验发现1,4-萘醌等33个化合物可以很好地抑制冠状病毒中的主蛋白酶的活性，填补了现有技术缺乏治疗冠状病毒引发的疾病的不足。可对该化合物进行进一步研究、改造以进行应用。

附图说明

图1：1,4-萘醌对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图2：TDZD-8对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图3：苏枋精对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图4：硫柳汞对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图5：紫草素对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图6：Tideglusib对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图7：埃索美拉唑镁对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图8：苏木精对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图9：对苯醌对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图10：原黄素对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图11：雷贝拉唑钠对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图12：杨梅黄酮对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图13：PX-12对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图14：Dixanthogen对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图15：卡莫氟对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图16：胆酸甲酯对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图17：二氢杨梅素对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图18：柯里拉京对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图19：氯胺T对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图20：红汞对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图21：艾普拉唑钠对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图22：蟛蜞菊内酯对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图23：(-)-Epigallocatechin Gallate对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图24：茶多酚对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图25：百里香醌对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图26：甲基儿茶酚对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图27：没食子儿茶素对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图28：原苏木素B对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图29：秦皮素对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图30：乳酸乙吖啶一水合物对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照), 2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图31：甲异靛对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图32：迷迭香酸对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图33：南索拉唑对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性；1：DMSO(阴性对照),2:化合物分子；3：阳性对照(N3抑制剂)。

图1～图33中纵坐标单位为RFU(Relative Fluorescence Units；相对荧光的单位)。

图34：卡莫氟对新冠病毒主蛋白酶的酶活抑制曲线。

图35：卡莫氟在细胞水平上的抗病毒效果，数据通过qRT-PCR方法测得。

图36：卡莫氟在细胞水平上的抗病毒效果，数据通过免疫荧光法测得，以氯喹作为阳性对照。

图37：体外细胞毒性实验，测定细胞存活率。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

以下所用Vero E6细胞购自ATCC。

实施例1

从不同的化合物库中进行高通量筛选，成功筛选的33种化合物对新型冠状病毒主蛋白酶均有较好的抑制效果。酶活实验条件具体为：

酶活实验荧光底物：MCA-AVLQSGFR-Lys(Dnp)-Lys-NH2，此荧光底物的激发波长和发射波长分别为320nm和405nm。

酶活反应buffer为50mM Tris–HCl(pH 7.3)，1mM EDTA；酶活反应温度：30℃。反应起始通过添加蛋白酶，蛋白酶反应终浓度为0.2μM，底物浓度为20μM，抑制剂(33 种小分子化合物)浓度1.5μM。(Xue X,Yang H,Shen W,et al.Production of authentic SARS-CoVMpro with enhanced activity:application as a novel tag-cleavage endopeptidasefor protein overproduction[J].Journal of molecular biology,2007,366(3):965-975.)。

所用阳性对照为N3抑制剂，已知其能够有效灭活冠状病毒主蛋白酶(杨海涛,谢卫青,Xiaoyu X,et al.Design of wide-spectrum inhibitors targeting coronavirusmain proteases[J]. 生命有机化学,2005,3(10):1742-1752.)，结构式如下所示：

根据图1～图33可知：33个化合物的酶活实验曲线，明显区别于阴性对照，对冠状病毒主蛋白酶有明显抑制活性。

实施例2

酶活抑制曲线测定使用的荧光底物：MCA-AVLQSGFR-Lys(Dnp)-Lys-NH2，此荧光底物的激发波长和发射波长分别为320nm和405nm。

酶活抑制曲线测定buffer为50mM Tris–HCl(pH 7.3)，1mM EDTA；反应温度： 30℃。反应起始通过添加蛋白酶，蛋白酶反应终浓度为0.2μM，底物浓度为20μM，使用11个不同浓度的卡莫氟进行测量，测试结果显示IC

体外细胞抗病毒实验使用6个不同浓度的卡莫氟处理感染SARS-CoV-2的Vero E6细胞1小时，病毒MOI(multiplicity of infection)为0.05。然后去除病毒和药物和混合物，清洗后继续使用含不同浓度卡莫氟的培养基培养。经过24小时培养后取上清进行qRT-PCR分析，同时将细胞固定通过免疫荧光法检测细胞内N蛋白水平进一步确定实验结果。实验发现卡莫氟可防止新型冠状病毒感染引起的细胞病变，EC

体外的细胞毒性实验使用8个不同浓度的卡莫氟处理Vero E6细胞。Vero E6细胞在 96孔板中悬浮培养。第二天，在培养基中加入不同浓度的卡莫氟。24小时后，使用细胞计数试剂盒-8(CCK8,Beyotime)测定存活细胞的相对数量。如图37所示，卡莫氟的CC50 值为133.37μM(Jin,Z.,Zhao,Y.,Sun,Y.et al.Structural basis for the inhibition ofSARS- CoV-2main protease by antineoplastic drug carmofur.Nat Struct Mol Biol27,529–532 (2020).)。