评价仿制药和原研药生物利用度的方法及其应用

摘要

本发明提供了一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法及其应用，涉及制药技术领域。该方法，包括：a.获得与原研药生物利用度等效的对照仿制药；b.将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，然后添加模拟胃液，使得模拟胃液沿黏附材料以相同流速流过对照仿制药和待测仿制药，测量对照仿制药和待测仿制药在相同时间内的移动距离或者测量对照仿制药和待测仿制药移动相同距离所用的时间，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度；其中仿制药为胃黏附型药物，原研药为胃漂浮型药物，黏附材料倾斜或者竖直放置，仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50。该方法能够准确实现对仿制药和原研药生物利用度的评价。

说明书

技术领域

本发明涉及制药技术领域，尤其是涉及一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法及其应用。

背景技术

现有技术中，使用溶出曲线对比的方式，在人体试验之前，评价仿制药与原研药的生物利用度，以期在正式人体试验时，仿制药表现出同原研药相似的PK特征（包括吸收、分布、代谢和排泄四个过程）。

然而上述技术存在缺陷：仅凭溶出曲线无法评价胃滞留制剂体内的持续释放时间及生物利用度。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法，已解决上述问题中的至少一种。

本发明的第一目的在于提供上述方法在仿制药研制中的应用。

第一方面，本发明提供了一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法，包括生物黏附力测试；

所述生物黏附力测试包括：a. 获得与原研药生物利用度等效的对照仿制药；

b. 将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，然后添加模拟胃液，使得模拟胃液沿黏附材料以相同流速流过对照仿制药和待测仿制药，测量对照仿制药和待测仿制药在相同时间内的移动距离或者测量对照仿制药和待测仿制药移动相同距离所用的时间，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度；

所述对照仿制药和待测仿制药为胃黏附型药物；所述原研药为胃漂浮型药物。

所述黏附材料倾斜或者竖直放置；

所述对照仿制药和待测仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50。

作为进一步技术方案，还包括去黏附力测试，所述去黏附力测试包括：将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，分别测量将对照仿制药和待测仿制药从黏附材料上分离的力，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度。

作为进一步技术方案，采用生物等效性试验判断原研药和对照仿制药是否生物利用度等效。

作为进一步技术方案，所述黏附材料包括琼脂板或者哺乳动物胃粘膜。

作为进一步技术方案，所述原研药、对照仿制药和待测仿制药包括普瑞巴林缓释片。

作为进一步技术方案，所述模拟胃液包括FeSSGF。

作为进一步技术方案，所述哺乳动物胃粘膜包括猪胃粘膜。

作为进一步技术方案，所述方法还包括骨架磨损测试，所述骨架磨损测试包括：将所述对照仿制药和待测仿制药置于往复筒溶出仪中，于模拟胃液中进行往复运动，测量对照仿制药和待测仿制药经过相同时间后的骨架尺寸，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度；

所述往复筒溶出仪中含有塑料珠，用于模拟食物磨损。

作为进一步技术方案，所述塑料珠的粒径为7-9mm，密度为1-1.2g/cm

第二方面，本发明提供了上述方法在仿制药研制中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

经发明人研究发现，当原研药为胃漂浮型药物，仿制药为胃黏附型药物，且仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50时，二者的生物利用度等效与否主要受仿制药在胃粘膜上的黏附性影响，本发明提供的评价仿制药和原研药生物利用度的方法，简单方便，能够有效测量仿制药的生物黏附性，准确实现对仿制药和原研药生物利用度的评价，对于仿制药的研制具有指导意义。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为餐前受试者单次口服普瑞巴林缓释片受试制剂和参比制剂后的线型均数浓度-时间曲线；

图2为餐后受试者单次口服普瑞巴林缓释片受试制剂和参比制剂后的线型均数浓度-时间曲线；

图3为空腹体内吸收曲线；

图4为空腹体内吸收量-时间曲线；

图5为餐后体内吸收曲线；

图6为餐后体内吸收量-时间曲线；

图7为生物黏附力测试结果。

具体实施方式

下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

术语“生物利用度”是指制剂中药物被吸收进入人体循环的速度与程度。生物利用度是反映所给药物进入人体循环的药量比例，它描述口服药物由胃肠道吸收，及经过肝脏而到达体循环血液中的药量占口服剂量的百分比。包括生物利用程度与生物利用速度。

术语“等效性试验”，即BE试验，是指用生物利用度研究的方法，以药代动力学参数为指标，比较同一种药物的相同或者不同剂型的制剂，在相同的试验条件下，其活性成分吸收程度和速度有无统计学差异的人体试验。

第一方面，本发明提供了一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法，包括生物黏附力测试；

所述生物黏附力测试包括：a. 获得与原研药生物利用度等效的对照仿制药；

b. 将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，然后添加模拟胃液，使得模拟胃液沿黏附材料以相同流速流过对照仿制药和待测仿制药，测量对照仿制药和待测仿制药在相同时间内的移动距离或者测量对照仿制药和待测仿制药移动相同距离所用的时间，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度；

所述对照仿制药和待测仿制药为胃黏附型药物，将其置于黏附材料上后会与黏附材料黏附；所述原研药为胃滞漂浮型药物；

所述黏附材料倾斜或者竖直放置，以使得仿制药在重力作用下在黏附材料上发生滑动。本发明对于黏附材料倾斜的角度不作具体限制，能够使得仿制药在上述试验过程中相对黏附材料发生滑动即可；

所述对照仿制药和待测仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50。

仿制药同原研药，虽同为胃滞留类型的制剂，但原研药为胃漂浮型，仿制药为胃黏附型，如何评价两者具有同等的生物利用度，仅通过体外溶出曲线对比无法预测。经发明人研究发现，当原研药为胃漂浮型药物，仿制药为胃黏附型药物，且仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50时，二者的生物利用度等效与否主要受仿制药在胃粘膜上的黏附性影响，本发明提供的评价仿制药和原研药生物利用度的方法，简单方便，通过生物黏附性的考察预测仿制药体内PK特征，对于仿制药的研制具有指导意义。

在一些优选的实施方式中，还包括去黏附力测试，所述去黏附力测试包括：将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，分别测量将对照仿制药和待测仿制药从黏附材料上分离的力，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度。

本发明中对于去黏附力测试的方法不作具体限制，例如可以为，以新鲜的猪胃黏膜作为黏附材料，水平放置，将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，考察将药片在竖直方向上从黏附材料分离的力。

在一些优选的实施方式中，采用生物等效性试验判断原研药和对照仿制药是否生物利用度等效。

在一些优选的实施方式中，所述黏附材料包括但不限于琼脂板或者哺乳动物胃粘膜，其中哺乳动物胃粘膜优选为猪胃粘膜，有利于更好的模拟人体胃环境；

在一些优选的实施方式中，所述原研药、对照仿制药和待测仿制药包括但不限于普瑞巴林缓释片，或者本领域技术人员所熟知的其他缓释类药物。

在一些优选的实施方式中，所述模拟胃液包括但不限于FeSSGF（USP模拟胃液）。

在一些优选的实施方式中，所述方法还包括骨架磨损测试，所述骨架磨损测试包括：将所述对照仿制药和待测仿制药置于往复筒溶出仪中，于模拟胃液中进行往复运动，测量对照仿制药和待测仿制药经过相同时间后的骨架尺寸，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度；

所述往复筒溶出仪中含有塑料珠，用于模拟食物磨损。

其中，模拟胃液包括但不限于FeSSGF。

通过往复筒结合塑料珠的方法，模仿餐食后食物的磨损作用，考察对片剂的磨损，更少的磨损，可延长通过幽门的时间，提高生物利用度。

作为进一步技术方案，所述塑料珠的材质例如可以为PA66，粒径例如可以为7mm、8mm或9mm，密度例如可以为1g/cm

需要说明的是，上述实验过程中优选将对照仿制药和待测仿制药的大小形状保持一致，有助于提高检测的准确性。

第二方面，本发明提供了上述方法在仿制药研制中的应用。

本发明提供的评价仿制药和原研药生物利用度的方法简单方便，能够准确实现对仿制药和原研药生物利用度的评价，对于仿制药的研制具有指导意义。

下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

需要说明的是，以下实施例或试验中，自研制剂和对照（参比）制剂均为普瑞巴林缓释片，其中自研制剂来源于宁波双城药业，对照制剂来源于辉瑞制药。

实施例1

步骤一：体外溶出曲线的测定：测定pH5.0介质下自研制剂（处方一）同参比制剂的溶出曲线，进行f2对比，结果如表1所示。

表1

步骤二：人体预实验：与原研药进行简化的人体生物等效性试验（受试者少于正式的人体生物等效性试验），寻找仿制药（处方一）与原研药在体内吸收的差异。

1. 餐前试验

1）试验方案

研究入选8例健康受试者。按照T-R和R-T两种给药顺序随机分为2个序列组，每个序列组4例受试者。研究分两个周期进行，受试者在第一周期空腹状态下接受受试制剂T或参比制剂R，经过洗脱期后进入第二周期，在相同状态下接受参比制剂R或受试制剂T，周期之间的洗脱期为至少3天。每个周期受试者在给药前1天晚上统一清淡饮食，之后禁 食10h以上，在试验当天空腹状态下，使用240mL水送服研究药物。服药前1小时和服药后1小时内禁止饮水，给药后每隔2h（+10min）统一给予200ml饮水，给药后14h可自由饮水；用药后4h内保持上身直立状态；给药后4h和10h左右分别进食午餐和晚餐。具体给药方案如表2所示：

表2 给药方案

给药剂量：T：330mg；R：330mg。

2）实验结果

受试者单次空腹口服普瑞巴林缓释片受试制剂和参比制剂的药动学参数分析结果如表3所示，受试者单次空腹口服普瑞巴林缓释片受试制剂和参比制剂后血浆中普瑞巴林的线性均数浓度-时间曲线如图1所示。

表3 受试者单次空腹口服普瑞巴林缓释片受试制剂和参比制剂的药动学参数分析

2. 餐后试验

1）试验方案

研究入选12例健康受试者。按照T-R和R-T两种给药顺序随机分为2个序列组，每个序列组6例受试者。研究分两个周期进行，受试者在第一周期餐后状态下接受受试制剂T或参比制剂R，经过洗脱期后进入第二周期，在相同状态下接受参比制剂R或受试制剂T，周期之间的洗脱期为至少3天。每个周期受试者在给药前1天晚上统一清淡饮食，之后禁食10h以上，在试验当天餐后状态下，使用240mL水送服研究药物。服药前1小时和服药后1小时内禁止饮水，给药后每隔2h（+10min）统一给予200ml饮水，给药后14h。

可自由饮水；用药后4h内保持上身直立状态；给药后4h和10h左右分别进食午餐和晚餐。

具体给药方案如表4所示：

表4 给药方案

给药剂量：T：330mg；R：330mg。

2）实验结果

结果如表5和图2所示。

表5 受试者单次餐后口服普瑞巴林缓释片受试制剂和参比制剂的药动学参数分析

结果表明受试制剂与参比制剂不具有生物等效性。

步骤三：生物相关性方法开发及模型建立：对两个制剂（原研药和处方一）的体内吸收部位进行分析，开发具备生物相关性的分析方法，包括并不限于，溶出曲线、生物黏附力测试、骨架磨损测试等；

1. 人体试验结果分析

步骤一：通过一房室模型，将体内药物浓度-时间曲线，反卷积成为药物累计吸收浓度-时间曲线；

步骤二：药物累计吸收浓度-时间曲线，进而每个时间点的累计浓度除以最终时间点的累计浓度得到药物吸收%，即体内吸收曲线。

步骤三：药物累计吸收浓度-时间曲线，计算两个时间点之间的吸收量差值，得到体内吸收量-时间的关系。

1）空腹体内吸收曲线如图3所示，空腹体内吸收量曲线如图4所示。两制剂吸收基本一致，体内快速吸收，吸收量逐渐降低。T制剂吸收趋势同餐后基本一致，证明T制剂没有明显的胃滞留过程。R制剂在胃部较餐后，无明显的漂浮滞留或滞留时间较短。

2）餐后体内吸收曲线如图5所示，餐后体内吸收量曲线如图6所示。两制剂在4小时前均表现较快的吸收，自研吸收更快；T制剂在开始2h内吸收达到最大值，后续吸收逐渐下降，而R制剂吸收量出现波峰波谷；通过数据分析，T制剂未能表现出明显的胃滞留效果，而是随着食物胃排空的影响，导致吸收延后；R制剂吸收出现双峰，即体内释放发生在两个部位，且能说明R制剂在餐后条件下有明显的胃滞留过程，时间较长。

基于以上分析，T制剂与R制剂的主要区别在于胃滞留时间不同，推测延长T制剂的胃滞留时间有助于取得与R制剂更加相似的生物利用度。

2. 体内外相关性评价

经过研发，获得了处方二，测定pH5.0介质下自研制剂（处方二）同参比制剂的溶出曲线，进行f2对比，结果如表1所示。

1）生物黏附性考察

选择新鲜猪胃黏膜作为黏附材料，固定于平板上，然后将片剂（处方一和处方二）放置于黏附材料上，平板竖直放置。

（1）以FeSSGF作为介质，向平板上添加FeSSGF，使得模拟胃液沿粘附材料以相同流速流过参比仿制药和待测仿制药，25min后，考察片剂在平板上的位移距离，结果如图7所示。

结果：处方2移动2.1cm，处方1移动4.2cm。

（2）以新鲜的猪胃黏膜作为黏附材料，考察去黏附力（将片剂放置于黏附材料上，考察将药片从黏附材料上分离的力）：

表6 粘附力结果

此外，发明人同样以琼脂替代胃粘膜作为黏附材料重复进行了上述实验，结果发现两个实验的结果趋势相同。

2）骨架磨损测试

溶出装置：往复筒溶出仪；

介质：FeSSGF，体积为250ml；

温度：37℃；

往复速率：15dpm（每分钟往复15次）；

食物磨损模拟：以加入塑料珠进行模拟，密度为1.1g/cm

筛网：下部为40mesh，上部无筛网；

考察时长：4小时；

评价方式：骨架的尺寸变化。

结果如表7所示。

表7 自研制剂尺寸变化

结论：处方二考察结束后，骨架尺寸明显大于处方一，说明更容易达到胃滞留，由此，生物利用度会更高。

步骤四：处方选择：根据上述生物相关性分析方法，选择黏附力更强的处方二进行BE试验，结果如表8所示。

表8 处方二BE试验结果

实施例2

一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法，包括：包括生物黏附力测试；

生物黏附力测试包括：a. 获得与原研药生物利用度等效的对照仿制药；

b. 将对照仿制药和待测仿制药置于新鲜猪胃粘膜的平板上，平板竖直放置，然后添加FeSSGF，使得FeSSGF沿黏附材料以相同流速流过对照仿制药和待测仿制药，测量对照仿制药和待测仿制药在25min内的移动距离，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度；

其中对照仿制药和待测仿制药为胃黏附型药物；原研药为胃漂浮型药物；对照仿制药和待测仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50。

实施例3

一种评价仿制药和原研药生物利用度的方法，包括：包括生物黏附力测试、去黏附力测试和骨架磨损测试；

生物黏附力测试包括：a. 获得与原研药生物利用度等效的对照仿制药；

b. 将对照仿制药和待测仿制药置于新鲜猪胃粘膜的平板上，平板竖直放置，然后添加FeSSGF，使得FeSSGF沿黏附材料以相同流速流过对照仿制药和待测仿制药，测量对照仿制药和待测仿制药在25min内的移动距离，根据测量结果的差异评价仿制药和原研药生物利用度。

去黏附力测试：以新鲜的猪胃黏膜作为黏附材料，水平放置，将对照仿制药和待测仿制药置于黏附材料上，考察将药片在竖直方向上从黏附材料分离的力。

骨架磨损测试：

溶出装置：往复筒溶出仪；

介质：FeSSGF，体积为250ml；

温度：37℃；

往复速率：15dpm（每分钟往复15次）；

食物磨损模拟：以加入塑料珠进行模拟，密度为1.1g/cm

筛网：下部为40mesh，上部无筛网；

考察时长：4小时；

评价方式：骨架的尺寸变化。

其中对照仿制药和待测仿制药为胃黏附型药物；原研药为胃漂浮型药物；对照仿制药和待测仿制药与原研药的溶出度相似因子f2不小于50。

试验例1

提供处方三和处方四，以实施例1中的处方二作为对照仿制药，采用实施例3提供的方法评价处方三和处方四与原研药的生物利用度。生物黏附力测试如表9所示，骨架磨损测试如表10所示。

表9 生物黏附力测试结果

表10 骨架磨损测试结果

将处方三、处方四进行简化BE试验，验证上述结果准确性，结果表明，处方三与原研不等效，处方四与原研等效。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。