公开/公告号CN115108935A
专利类型发明专利
公开/公告日2022-09-27
原文格式PDF
申请/专利权人 沈阳药科大学;
申请/专利号CN202210904605.8
申请日2022-07-29
分类号C07C235/34(2006.01);C07C231/24(2006.01);C07C231/20(2006.01);C07D207/333(2006.01);A61K31/165(2006.01);A61K31/40(2006.01);A61P25/00(2006.01);
代理机构沈阳东大知识产权代理有限公司 21109;
代理人李珉
地址 117004 辽宁省本溪市高新技术产业开发区华佗大街26号
入库时间 2023-06-19 17:09:24
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2023-11-03
授权
发明专利权授予
2022-10-18
实质审查的生效 IPC(主分类):C07C 235/34 专利申请号:2022109046058 申请日:20220729
实质审查的生效
2022-09-27
公开
发明专利申请公布
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及白英中的生物碱类化合物及其制备方法和其在医药方面的用途,尤其涉及从植物白英全草中提取制备的生物碱类化合物及其在制备治疗神经退行性疾病药物方面的应用。
背景技术
神经退行性疾病是一种慢性进行性的中枢神经组织退行性病变和丢失而产生的疾病总称,主要病理表现为脑或脊髓神经元变性和丧失,而导致痴呆等认知障碍。其具体包括阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)和亨廷顿氏病(Huntington’s disease,HD)等。由于这些疾病易受人口老龄化的影响,使得患者生活质量严重下降,增加了世界各地医疗系统的负担,所以从天然药物中制备具有神经保护活性的化合物具有重大的意义。
白英(Solanum lyratum Thunb.),属茄科(Solanaceae)茄属(Solanum),别名毛风藤、白毛藤、葫芦草、鬼目草等,是一种资源丰富的草质藤本植物。白英主要分布于安徽、浙江、江苏等江南地区。白英的化学成分有甾体类、生物碱类、倍半萜类、木脂素类和其他类化合物。现代药理学研究表明,其具有抗肿瘤、抗炎、保肝护肝、神经保护等药理作用,是一种具有极高药用价值和研究前景的天然药物。
本发明中涉及的八个生物碱类化合物,经实验证明,所述的化合物具有神经细胞保护活性,可应用于治疗神经退行性疾病。
发明内容
本发明的目的是提供八种从茄科茄属植物白英(Solanum lyratum Thunb.)中分离得到的生物碱类化合物,结构如下:
本发明的所述八个生物碱类化合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)白英的干燥全草用70%-80%乙醇进行提取,提取液减压浓缩成浸膏;
(2)浸膏采用乙酸乙酯和正丁醇分别进行萃取并将所得流份经硅胶柱色谱,以二氯甲烷/甲醇系统100:1-10:1进行梯度洗脱,共收集到2个流份A、B;
(3)流份B经胶柱色谱,以二氯甲烷/甲醇系统30:1-3:1进行梯度洗脱,共收集到2个流份B
(4)流份B
(5)流份B
(6)所得流份经硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇系统50:1-8:1进行梯度洗脱,得到4个流份1-4;
(7)利用半制备HPLC对流份1-4以乙腈/水系统进行洗脱,得到化合物(±)-1、化合物(±)-2、化合物(±)-3、化合物4和化合物5;采用手性色谱柱拆分得到化合物1a/1b、2a/2b和化合物3a/3b。
具体操作步骤如下:
利用半制备HPLC对流份1以乙腈/水系统31:69进行洗脱,得到了化合物(±)-2,对流份3以乙腈/水系统35:65进行洗脱,分离得到了化合物(±)-1和化合物(±)-3,对流份4以乙腈/水系统41:59进行洗脱,分离得到了化合物4和化合物5;利用Daicel Chiralpak IC手性色谱柱以正己烷/异丙醇系统1:1对化合物(±)-1和化合物(±)-2进行手性拆分得到化合物1a/1b和2a/2b;利用Daicel Chiralpak IA手性色谱柱以正己烷/异丙醇系统1:1对化合物(±)-3进行手性拆分得到化合物3a/3b。
所述的制备方法,其中,
所述步骤(1)中,提取为回流提取,提取2-3次,每次2-3小时。
使用的白英为茄科茄属植物白英(S.lyratum)。
上述制备方法所得化合物1a/1b、2a/2b、3a、4和5经过系统结构鉴定结果如下:
利用紫外光谱、高分辨质谱、一维和二维NMR技术对化合物1-5的平面结构进行鉴定。利用实测ECD和计算ECD方法,对拆分后的光学纯化合物1a/1b、2a/2b和3a的绝对构型进行确定(如图1-41)。
化合物1:黄色油状物(甲醇)。UV(MeOH)λ
在HMBC谱中,7′-OCH
化合物2:白色粉末(甲醇)。UV(MeOH)λ
为了进一步确定化合物2的平面结构,我们进行了二维谱的测试。在HMBC谱中,H-2′/C-4′,C-6′,C-7′,H-5′/C-1′,C-3′,H-6′/C-2′,C-4′,C-7′,H-7′/C-2′,C-6′,H-8′/C-1′,δ
化合物3a:白色粉末(甲醇)。UV(MeOH)λ
在二维谱中,可观察到H-2′/C-4′,C-6′,C-7′,H-3′/C-1′,C-5′,H-5′/C-1′,C-3′,H-6′/C-2′,C-4′,C-7′,H-7′/C-2′,C-6′,C-8′,δ
化合物1-3的核磁数据如下表所示:
表1化合物1-3在DMSO-d
化合物4:黄色油状(甲醇)。UV(MeOH)λ
通过HMBC谱图信号H-4′/C-5′,H-6′/C-8′,C-9′,H-7′/C-5′,H-8′/C-5′提示了吡咯环与正丁基的连接方式,以及吡咯环被醛基的取代方式。H-3/C-1,C-5,C-9,H-2/C-4以上HMBC信号提示了双键所在的位置。综上,确定了化合物4的平面结构。
化合物5:黄色油状(甲醇)。UV(MeOH)λ
为了进一步确定其平面结构,进行了HSQC、HMBC以及COSY谱图的测试。在COSY和HMBC谱中,观察到H-6′/C-8′,H-7′/C-5′,C-9′,H-10′/C-6′,δ
化合物4-5的核磁数据如下表所示:
表2化合物4-5在DMSO-d
对本发明所述七个新化合物的H
一种药物组合物,包含所述八个生物碱类化合物和药学上可接受的载体和赋形剂。
所述八个生物碱类化合物或所述药物组合物在制备治疗神经退行性疾病药物方面的应用。
一种白英提取物,包含所述八个生物碱类化合物,应用于制备治疗神经退行性疾病药物中。
本发明的优点在于,所述化合物均为新化合物,且均为立体构型确定的光学纯化合物。同时部分化合物具有显著的体外神经细胞保护活性,具有进一步开发预防和治疗神经退行性疾病的医药新用途。
附图说明
图1为化合物1的UV谱;
图2为化合物1的HRESIMS谱;
图3为化合物1的
图4为化合物1的
图5为化合物1的HSQC(600MHz,DMSO-d
图6为化合物1的HMBC(600MHz,DMSO-d
图7为化合物1的
图8为化合物1的手性拆分色谱图;
图9为化合物1的实测与计算ECD谱图;
图10为化合物2的UV谱;
图11为化合物2的HRESIMS谱;
图12为化合物2的
图13为化合物2的
图14为化合物2的HSQC(600MHz,DMSO-d
图15为化合物2的HMBC(600MHz,DMSO-d
图16为化合物2的
图17为化合物2的手性拆分色谱图;
图18为化合物2的实测与计算ECD谱图;
图19为化合物3a的UV谱;
图20为化合物3a的HRESIMS谱;
图21为化合物3a的
图22为化合物3a的
图23为化合物3a的HSQC(600MHz,DMSO-d
图24为化合物3a的HMBC(600MHz,DMSO-d
图25为化合物3a的
图26为化合物3a的手性拆分色谱图;
图27为化合物3a的实测与计算ECD谱图;
图28为化合物4的UV谱;
图29为化合物4的HRESIMS谱;
图30为化合物4的
图31为化合物4的
图32为化合物4的HSQC(600MHz,DMSO-d
图33为化合物4的HMBC(600MHz,DMSO-d
图34为化合物4的
图35为化合物5的UV谱;
图36为化合物5的HRESIMS谱;
图37为化合物5的
图38为化合物5的
图39为化合物5的HSQC(600MHz,DMSO-d
图40为化合物5的HMBC(600MHz,DMSO-d
图41为化合物5的
具体实施方式
下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明,但不以任何方式限制本发明。
实施例1
白英中的生物碱类化合物1-5的制备方法,具体操作包括如下步骤:
(1)采用浓度为70%的工业乙醇对白英(S.lyratum)的40kg干燥全草加热回流提取3次,每次3小时,提取液减压浓缩后得到2.5kg浸膏。
(2)将浸膏用水混悬后,分别用18L乙酸乙酯和20L正丁醇萃取多次,依次得到293.0g乙酸乙酯层萃取物和1114.0g正丁醇层萃取物。使用二氯甲烷/甲醇系统100:1,50:1,30:1,15:1,10:1(v/v)进行梯度洗脱,共收集到2个流份A、B。
(3)流份B经胶柱色谱,以二氯甲烷/甲醇系统30:1,20:1,15:1,10:1,8:1,3:1(v/v)进行梯度洗脱,共收集到2个流份B
(4)流份B
(5)流份B
(6)所得流份经硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇系统50:1,30:1,20:1,15:1,10:1,8:1(v/v)进行梯度洗脱,得到4个流份1-4。
(7)利用半制备HPLC对流份1以乙腈/水系统31:69进行洗脱,得到了化合物(±)-2,对流份3以乙腈/水系统35:65进行洗脱,分离得到了化合物(±)-1和化合物(±)-3,对对流份4以乙腈/水系统41:59进行洗脱,分离得到了化合物4和化合物5。利用DaicelChiralpak IC手性色谱柱以正己烷/异丙醇系统1:1对化合物(±)-1和化合物(±)-2进行手性拆分得到化合物1a/1b和2a/2b。利用Daicel Chiralpak IA手性色谱柱以正己烷/异丙醇系统1:1对化合物(±)-3进行手性拆分得到化合物3a/3b。
实施例2
化合物1-5在体外对H
SH-SY5Y细胞处于对数生长期,密度为1.2×10
存活率(%)=[A
结果显示:在给药浓度为50μM的条件下,化合物1a和1b显示出了与阳性药Trolox相当的体外神经保护活性,与H
表3给药后细胞存活百分比
机译: 生物碱麦角生物碱的新衍生物,其制备方法及其在医药中的应用
机译: 肽生物碱麦角麦角生物碱的新衍生物,其制备方法及其在医药中的应用
机译: 肽生物碱麦角麦角生物碱的新衍生物,其制备方法及其在医药中的应用