小儿消积止咳颗粒质量检测方法及其应用

摘要

本发明涉及中药制剂分析领域，具体涉及一种小儿消积止咳颗粒质量检测方法及其应用，包括采用HPLC法对制剂中柚皮苷成分进行定量检测，还包括采用TLC法对制剂中的槟榔、枳实、连翘3味原料药材进行定性鉴别。本发明所建立的质量检测方法稳定、可控，质量标准中的检测方法能专属、重复、有效地控制产品的质量，从而确保临床用药的安全性和有效性。

说明书

技术领域

本发明涉及一种小儿消积止咳颗粒质量检测方法及其应用，属于中药制剂分析领域。

背景技术

小儿消积止咳颗粒收载于SFDA标准颁布件(2010)，由山楂、槟榔、枳实、枇杷叶、瓜蒌、连翘、莱菔子、葶苈子、蝉蜕和桔梗10味原料药材制成，具清热肃肺、消积止咳功效，临床上用于小儿饮食积滞、痰热蕴肺所致的咳嗽、夜间加重、喉间痰鸣、腹胀、口臭的治疗，临床效果显著。该发明的药品名称为小儿消积止咳颗粒(批准文号：国药准字Z20060159)，均为鲁南厚普制药有限公司的中成药产品，商品名为

小儿消积止咳颗粒针对小儿食积郁热引起的咳嗽，合理组方，具有消食导滞、化痰止咳双重功效，并首次提出了“消积止咳”的治疗方法，为中医治疗食积咳嗽开辟了一条新的途径，填补了市售药物中缺乏治疗食积咳嗽药物的空白，并完善了咳嗽病的中医理论体系。多年的临床应用表明其疗效确切，尤其适合食积咳嗽的小儿患者服用，深得医患好评。

目前，尚未见有专利公开及文献报道对小儿消积止咳颗粒质量检测方法的研究。本发明公开了一种以HPLC法检测小儿消积止咳颗粒中柚皮苷的方法，同时公开了以TLC法对小儿消积止咳颗粒中的槟榔、枳实和连翘进行定性鉴别的方法，从而填补了小儿消积止咳颗粒质量检测方法研究的空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗食积咳嗽的中成药小儿消积止咳颗粒的质量检测方法，所述小儿消积止咳颗粒是由山楂、槟榔、枳实、枇杷叶、瓜蒌、连翘、莱菔子、葶苈子、蝉蜕和桔梗10味原料药材组方，经提取、纯化制成。

本发明采用HPLC测定制剂中的柚皮苷的含量，同时采用薄层色谱法定性检测制剂中的槟榔、枳实和连翘3味原料药材，实现对小儿消积止咳颗粒质量精准地评价和控制，从而为小儿消积止咳颗粒的真伪鉴别和内在质量优劣检测提供准确的依据。

一种小儿消积止咳颗粒质量检测方法，包括以HPLC法测定制剂中柚皮苷的含量，步骤如下：

1)供试品溶液制备：取小儿消积止咳颗粒，称定，加入甲醇溶液，超声提取，称定，用甲醇补足减失重量，过滤，取续滤液，得供试品溶液；

2)对照品溶液制备：取柚皮苷对照品，加甲醇制成对照品溶液，即得；

3)HPLC色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A,以水为流动相B；理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000；

4)测定方法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。

优选地，以HPLC法测定制剂中柚皮苷的含量，步骤如下：

1)供试品溶液制备：取小儿消积止咳颗粒，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，称定重量，以功率250W、频率40kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

2)对照品溶液制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL含60μg柚皮苷对照品的溶液，即得；

3)HPLC色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-水(35:65)；检测波长为283nm；流速0.8mL/min；柱温为40℃；理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000；

4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

优选地，所述小儿消积颗粒中枳实药材以柚皮苷(C

本申请所述小儿消积止咳颗粒治疗检测方法，还包括如下槟榔、枳实和连翘中至少一种原料药材的定性鉴别的方法：

1)小儿消积止咳颗粒中原料药材槟榔的鉴别：

取小儿消积止咳颗粒10g，研细，加浓氨试液3mL，三氯甲烷30mL，置水浴加热回流1小时，滤过，取三氯甲烷层，加稀盐酸5mL与水20mL，振摇提取，分取酸水层，用浓氨试液调pH值至8-9，加三氯甲烷振摇提取两次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸至近干，残渣加甲醇0.5mL溶解，作为供试品溶液；取槟榔对照药材1g，按步骤1)同法制成对照药材溶液；分别吸取供试品溶液10μL、对照药材溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：浓氨试液＝7.5:7.5:0.2为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

2)小儿消积止咳颗粒中原料药材枳实的鉴别：

取小儿消积止咳颗粒3g，研细，加甲醇25mL，超声处理40分钟，滤过，置水浴上蒸至约5mL，作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；分别吸取供试品溶液10μL、对照品溶液2μL，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：浓氨试液＝20:5:1.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置60℃烘箱中加热约15分钟，取出，放冷，喷以0.2％茚三酮乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

3)小儿消积止咳颗粒中原料药材连翘的鉴别：

取小儿消积止咳颗粒3g，研细，加甲醇25mL，超声处理40分钟，滤过，置水浴上蒸至约5mL，作为供试品溶液；取连翘对照药材2g，加水20mL，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液；分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇＝20:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

优选地，所述小儿消积止咳颗粒由如下中药组分制成：

优选地，所述山楂为炒山楂，枇杷叶为蜜枇杷叶，莱菔子为炒莱菔子，葶苈子为炒葶苈子。

与现有技术对比，本发明取得了以下有益技术效果：

1)本发明首次建立了小儿消积止咳颗粒质量检测方法，同时采用薄层色谱法定性检测制剂中的槟榔、枳实和连翘3味原料药材，实现对小儿消积止咳颗粒质量精准地评价和控制，填补了小儿消积止咳颗粒制剂检测方法的空白；

2)本发明方法具有快速，灵敏，重复性好等优点，能准确检测小儿消积止咳颗粒中柚皮苷的含量，并能准确定向鉴别制剂中的3种原料药材，专属性强、重现性好，能全面有效地控制小儿消积止咳颗粒的质量，有利于稳定产品的质量，确保临床用药安全性和有效性，同时更好地满足医疗和市场的需要。

附图说明

图1为小儿消积止咳颗粒HPLC色谱图，上、中、下依次为柚皮苷对照品、阴性对照色谱图、供试品色谱图；

图2为HLPC法测定小儿消积止咳颗粒中柚皮苷的标准曲线图；

图3为天津特纳KromasilC18(250×4.6mm，5μm)色谱图；

图4为安捷伦ExtendC18(250×4.6mm，5μm)色谱图；

图5为安捷伦ZorbaxSBC18(250×4.6mm，5μm)色谱图；

图6为小儿消积止咳颗粒中槟榔薄层色谱图；其中a为槟榔对照药材，b为阴性对照，c为供试品，d为槟榔对照药材；

图7为枳实薄层色谱图；其中a辛弗林对照品，b供试品，c阴性对照，d辛弗林对照品；

图8为连翘薄层色谱图；其中a连翘对照药材，b阴性对照，c供试品，d连翘对照药材。

具体实施方式

为了更加充分理解本发明，下面通过典型的实施案例对本发明做进一步的说明。本发明专利申请说明书以及权利要求书中所述的“小儿消积止咳颗粒”均指的是由鲁南厚普制药有限公司生产的样品，其处方配比和制备方法在以上的发明内容有明确的限定。

实施例1小儿消积止咳颗粒中柚皮苷HPLC测定方法学研究

1仪器与试剂Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器。

2色谱条件天津特纳KromasilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇-水(35:65)；检测波长为283nm；流速0.8mL/min；柱温为40℃。

3供试品溶液的制备取小儿消积止咳颗粒(批号：180204)适量，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4对照品溶液的制备精密称取柚皮苷对照品(批号：110722-201312，中国食品药品检定研究院)适量，加50％甲醇制成每1mL含0.060072mg的溶液，即得。

5阴性对照溶液的制备取不含枳实药材的阴性对照，照供试品溶液的制备项下同法操作，制成阴性对照溶液，从色谱图可以看出，在柚皮苷位置处无干扰。见附图1。

6线性关系考察精密吸取0.5006mg/mL的柚皮苷对照品溶液，分别精密吸取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分别置25mL量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定峰面积，如表1。以测得峰面积为横坐标，对照品进样浓度(mg/mL)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝190124435.67719X-33294.5，R2＝0.99995，柚皮苷进样浓度在0.020024-0.100120mg/mL范围内线性良好。结果见附图2。

表1线性关系考察结果

7精密度试验精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次5μL，峰面积RSD＝0.455％，表明仪器精密度良好。结果见表2。

表2精密度试验结果

8稳定性试验取同一供试品溶液，分别于配制后0h，2h，4h，6h，8h测定，结果表明供试品溶液在8h内稳定。结果见表3。

表3稳定性试验结果

9重复性试验分别取同一批号的样品6份，照“供试品溶液的制备”项下的样品制备方法操作，分别测定，计算含量，RSD为1.004％。结果见表4。

表4重复性试验结果

10回收率试验精密量取0.5006mg/mL的对照品溶液，精密吸取6份各2mL，分别置锥形瓶中，挥去溶剂，精密称取样品6份各0.15g，分别置上述锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，补重，摇匀，滤过，进样测定，得柚皮苷平均回收率为99.29％，RSD为1.156％。结果见表5。

表5回收率试验结果

11耐用性试验取不同品牌和型号的色谱柱，按正文测定方法测定，分别见附图3、4、5，分离均良好，阴性无干扰。图中上、中、下依次为柚皮苷对照品、阴性对照、供试品色谱图

12样品含量测定取样品按上述样品处理方法同法操作，结果见表6。

表6样品含量测定结果

13含量限度本次申请为辅料变更申请，方法学研究表明辅料变更对含量测定没有影响，本品含量限度每袋含枳实以柚皮苷(C

实施例2薄层色谱鉴别制剂中槟榔的方法学研究

取小儿消积止咳颗粒(批号：180204)10g，研细，加浓氨试液3mL，三氯甲烷30mL，置水浴加热回流1小时，滤过，取三氯甲烷层，加稀盐酸5mL与水20mL，振摇提取，分取酸水层，用浓氨试液调pH值至8-9，加三氯甲烷振摇提取两次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸至近干，残渣加甲醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。另取槟榔对照药材1g，同法制成对照药材溶液。取槟榔阴性对照颗粒10g，同法制备阴性对照溶液，吸取供试品溶液10μl、阴性对照溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯－浓氨试液＝7.5:7.5:0.2为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，列入标准。见附图6。

实施例3薄层色谱鉴别制剂中枳实的方法学研究

取小儿消积止咳颗粒(批号：180204)3g，加甲醇25mL，超声处理40分钟，滤过，置水浴上蒸至约5mL，作为供试品溶液。取枳实阴性对照颗粒同法制备阴性对照溶液。另取辛弗林对照品(批号：110727-201608，中国食品药品检定研究院)，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液各10μL、阴性对照溶液10μL、对照品溶液2μL，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：浓氨试液＝20:5:1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2％茚三酮乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰，列入标准。见附图7。

实施例4薄层色谱鉴别制剂中连翘的方法学研究

取小儿消积止咳颗粒(批号：180204)3g，加甲醇25mL，超声处理40分钟，滤过，置水浴上蒸至约5mL，作为供试品溶液。取连翘阴性颗粒同法制备阴性对照溶液。另取连翘对照药材2g，加水20mL，加热回流30分钟，滤过，滤液用正丁醇振摇提取3次，每次15mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为对照药材溶液。吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇＝20:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。阴性无干扰，列入标准。见附图8。