一种基于波谱特征的伏立康唑结构检测方法

摘要

本发明涉及伏立康唑检测技术领域，尤其涉及一种基于波谱特征的伏立康唑结构检测方法，采用紫外吸收光谱(UV)，红外吸收光谱(IR)，超高分辨质谱(FT‑MS)，1D/2D核磁共振(NMR)，热分析(TGA、DSC)及X‑射线粉末衍射(XRD)对伏立康唑的结构进行检测分析，本研究利用紫外吸收光谱(UV)、红外吸收光谱(IR)、超高分辨质谱(FT‑MS)、核磁共振波谱(

说明书

技术领域

本发明涉及伏立康唑检测技术领域，尤其涉及一种基于波谱特征的伏立康唑结构检测方法。

背景技术

药物的结构确证研究是药物研发的基础，不论是新药还是仿制药，都必须先明确其结构。伏立康唑(Voriconazole)为氟康唑衍生物(结构见图1)，2002年在美国首先上市的第二代三唑类抗真菌新药，它由美国辉瑞公司研发，临床上主要用于治疗急性或慢性深部真菌感染。由于它具有抗菌效力强，抗菌谱广，安全性好等特点，被称为"高效低毒"新药，在国内外市场上深受欢迎，商业价值较高。

现有技术中，伏立康唑的检测方法为：(1)取样品，加乙醇溶解并稀释制成每1mL中约含0.2mg的溶液，照紫外-可见分光光度法(2010年版药典二部附录ⅣA)测定，在261nm与267nm的波长处有最大吸收，在264nm的波长处有最小吸收；(2)样品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(《药品红外光谱集》893图)一致；(3)样品显有机氟化物的鉴别反应(2010年版药典二部附录Ⅲ)，但是此种检测方法的问题在于不够全面，不能够提供准确的数据支持，因此急需一种可以数据准确可靠的伏立康唑结构检测的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是以通过紫外吸收光谱(UV)，红外吸收光谱(IR)，超高分辨质谱(FT-MS)，1D/2D核磁共振(NMR)，热分析(TGA、DSC)及X-射线粉末衍射(XRD)对伏立康唑的结构进行分析，通过解析证实了伏立康唑的化学结构为(2R,3S)-2-(2,4-二氟苯基)-3-(5-氟嘧啶-4-基)-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-丁醇，并获得一种基于波谱特征的伏立康唑结构检测方法。

本申请实施例提供了一种基于波谱特征的伏立康唑结构检测方法，采用紫外吸收光谱(UV)，红外吸收光谱(IR)，超高分辨质谱(FT-MS)，1D/2D核磁共振(NMR)，热分析(TGA、DSC)及X-射线粉末衍射(XRD)对伏立康唑的结构进行检测分析，其检测方法包括如下步骤：

S1：取伏立康唑样品适量溶于乙醇中，适当稀释，制得溶液，放置在紫外可见分光光度计内部，测得溶液紫外吸收光谱；

S2：取伏立康唑样品适量，采用溴化钾压片法将样品制成压片，放置在红外光谱仪内部，测得样品的红外图谱；

S3：取伏立康唑样品适量，用甲醇:1％甲酸水溶液(甲醇：甲酸水溶液＝100:1)溶解，经Φ0.22微米的滤膜过滤后，直接置于变换质谱仪内部，采用ESI正离子模式，进行FT-MS分析，测得高分辨质谱；

S4:取伏立康唑样品适量，以氘代二甲基亚砜为溶剂，采用直径为5mm的NMR样品管，将样品溶于溶剂内部，置于核磁共振谱仪中，以TMS为内标，BBO宽带5mm探头，1H NMR、13C NMR和19F NMR的工作频率分别为600.25MHz、150.81MHz和564.80MHz，1D核磁试验1H-NMR谱宽12019.23Hz，13C-NMR谱宽36 057.69Hz，19F-NMR谱宽133 928.58Hz，2D核磁试验包括1H-1H COSY、13C-1H HSQC和13C-1H HMBC。1H-1H COSY的F2(1H)和F1(1H)维谱宽均为4807.69Hz，采样数据点阵t2×t1＝2 048×256；13C-1H HSQC的F2(1H)和F1(13C)维谱宽分别为4 807.69Hz和24906.43Hz，13C-1H HMBC的F2(1H)和F1(13C)维谱宽分别为4 807.69Hz和33 524.82Hz，采样数据点阵均为t2×t1＝2048×256，测得1H-NMR谱、重氢交换谱、13C-NMR谱、DEPT135谱、DEPT90谱、19F-NMR谱、1H-1H COSY谱、13C-1H HSQC谱、13C-1H HMBC和1H-1H NOESY；

S5：取伏立康唑样品适量于Al2O3坩埚中，置于热重分析仪内部分析样品熔点；

S6：取伏立康唑样品适量，置于玻璃凹槽，将表面压平后放置X射线衍射仪试样台上，从3°～60°，以步宽角度为0.013°，用PIXCEL探测器扫描得到谱图。

优选的，所述S1中紫外可见分光光度计为Lambda35型紫外可见分光光度计。

优选的，所述S2中红外光谱仪为VERTEX70傅立叶变换红外光谱仪，压片为KBr。

优选的，所述S3中变换质谱仪为Solarix7.0超高分辨四级杆串联傅里叶变换质谱仪。

优选的，所述S4中核磁共振谱仪为AscendTM 600M超导核磁共振谱仪。

优选的，所述S5中热重分析仪为Pyris1 TGA热重分析仪，且检测项目如下：

热重分析(TGA)：在氮气氛围下，从30℃以5℃/min升温到500℃；

差热分析(DSC)：在氮气氛围下，以空Al皿为参比，从30℃以5℃/min升温到200℃。

优选的，所述伏立康唑样品经液相色谱法分析，纯度>99％。

优选的，所述S3中甲醇：甲酸水溶液的比例为：100:1。

本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

本研究利用紫外吸收光谱(UV)、红外吸收光谱(IR)、超高分辨质谱(FT-MS)、核磁共振波谱(

附图说明

图1为本申请伏立康唑结构式；

图2为本申请中伏立康唑的紫外可见光谱图；

图3为本申请中伏立康唑的IR图；

图4为本申请中伏立康唑的FT-MS图；

图5为本申请中伏立康唑的二级质谱图；

图6为本申请中伏立康唑质谱解析图；

图7为本申请中伏立康唑的

图8为本申请中伏立康唑的重氢交换谱；

图9为本申请中伏立康唑的

图10为本申请中伏立康唑的DEPT135谱；

图11为本申请中伏立康唑的DEPT90谱；

图12为本申请中伏立康唑的

图13为本申请中伏立康唑的

图14为本申请中伏立康唑的

图15为本申请中伏立康唑的

图16为本申请中伏立康唑H-H NOESY谱；

图17为本申请中伏立康唑的TGA和DSC图；

图18为本申请中伏立康唑的X射线衍射图。

具体实施方式

本发明提供了一种技术方案：

一种基于波谱特征的伏立康唑结构检测方法，采用紫外可见分光光度计，变换红外光谱仪，超高分辨质谱(FT-MS)，1D/2D核磁共振(NMR)，热分析(TGA、DSC)及X-射线粉末衍射(XRD)对伏立康唑的结构进行检测分析，其检测方法包括如下步骤：

如图2所示：取伏立康唑样品适量溶于乙醇中，适当稀释，制得溶液，放置在Lambda35型紫外可见分光光度计，测得溶液紫外吸收光谱，该化合物在256nm处有吸收峰和肩峰，为苯环和杂环的B带吸收，与伏立康唑结构相符。

如图3所示：取伏立康唑样品适量，采用溴化钾压片法将样品制成压片，压片为KBr，放置在VERTEX70傅立叶变换红外光谱仪内部，测得样品的红外图谱，该化合物有羟基、仲胺、1,2,4-取代苯环、甲基、亚甲基、醚、碳硫、氟代苯环等基团，与伏立康唑结构相符，根据实用红外光谱解析(卢涌泉、邓振华注.1989年出版)一书为依据，对峰位进行归属，具体红外数据与解析见表1：

表1伏立康唑红外吸收光谱数据

如图4-6中所示：取伏立康唑样品适量，用甲醇:1％甲酸水溶液(甲醇：甲酸水溶液＝100:1)溶解，经Φ0.22微米的滤膜过滤后，直接置于Solarix7.0超高分辨四级杆串联傅里叶变换质谱仪内部，采用ESI正离子模式，进行FT-MS分析，测得高分辨质谱；

一级质谱图见图4，从一级质谱图可以推测出准分子离子峰[M+H]+为350.1220，通过软件模拟m/z 350.1220的分子式为C

由m/z 350.1221的二级质谱图(见图5)可推测：样品分子(M)得到H

由m/z 521.1783的二级质谱图(见图5)：样品分子(M)失去H

如图7-图16中所示：取伏立康唑样品适量，以氘代二甲基亚砜为溶剂，采用直径为5mm的NMR样品管，将样品溶于溶剂内部，置于Ascend

利用伏立康唑

由NOESY谱(图16)可知：C16-H与-OH有空间相关信号，说明C16-H和-OH空间构型属于面的同侧。

表2伏立康唑核磁共振波谱数据

表3F-NMR的归属

伏立康唑结构式中有14个质子，在

上述取代苯环上的

由COSY谱(图13)中，δ

根据HSQC谱图(图14)，δ

进一步的由NOESY谱(图16)可知：C16-H与-OH有空间相关信号，说明C16-H和-OH空间构型属于面的同侧。

如图17中所示：取伏立康唑样品适量于Al2O3坩埚中，置于Pyris1TGA热重分析仪内部分析样品熔点，其检测项目如下：

热重分析(TGA)：在氮气氛围下，从30℃以5℃/min升温到500℃；

差热分析(DSC)：在氮气氛围下，以空Al皿为参比，从30℃以5℃/min升温到200℃。

伏立康唑样品的DSC图(图17)在139.29℃有一向上吸热峰，结合TGA图(图17)可以看出样品在该温度区间没有明显失重，且加热实验后样品由粉末状态变成熔融状态，分析该吸热峰为熔融，与中国药典(2015版)二部报道的伏立康唑熔点一致。

如图18中所示：取伏立康唑样品适量，置于玻璃凹槽，将表面压平后放置X’Pert3PowderX射线衍射仪台上，从3°～60°，以步宽角度为0.013°，用PIXCEL探测器扫描得到谱图。由X射线衍射峰的相关数据(见表4)可知样品呈多晶衍射峰状态，有结晶性物质存在。

表4伏立康唑的X射线衍射主要峰位值列表

进一步的，所述伏立康唑样品经液相色谱法分析，纯度>99％，符合药物结构鉴定的需要。

综上所述，利用UV、IR、FT-MS、一维和二维核磁等仪器对伏立康唑的化学结构进行了详细解析，对

以上所述仅为本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，对于本领域技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明精神和原则内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。