用于治疗癌症的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂

摘要

本说明书涉及用于在治疗癌症中使用的表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，其中该EGFR TKI与Smac模拟物组合施用。

说明书

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2020年1月20日提交的美国临时申请号62/963,213的优先权权益，出于所有目的将其通过引用以其全文并入本文。

技术领域

本说明书涉及用于在治疗癌症中使用的表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，其中该EGFR TKI与Smac模拟物组合施用。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR)中激活突变的发现彻底改变了疾病的治疗。在2004年，报道了EGFR的外显子18-21中的激活突变与NSCLC中对EGFR-TKI疗法的反应相关(Science[科学][2004]，第304卷，1497-1500；New England Journal of Medicine[新英格兰医学杂志][2004]，第350卷，2129-2139)。据估计，这些突变在大约10％-16％的美国和欧洲NSCLC人类患者以及大约30％-50％的亚洲NSCLC人类患者中普遍存在。其中两个最显著的EGFR激活突变是外显子19缺失和外显子21中的错义突变。外显子19缺失占已知EGFR突变的大约45％。在外显子19中检测到导致三至七个氨基酸缺失的十一个不同突变，所有这些突变均以氨基酸747-749的一致缺失的密码子为中心。最显著的外显子19缺失是E746-A750。外显子21中的错义突变占已知的EGFR突变的大约39％-45％，其中取代突变L858R占外显子21中总突变的大约39％(J.Thorac.Oncol.[胸部肿瘤学杂志][2010]，1551-1558)。

目前有两种第一代(埃罗替尼和吉非替尼)、两种第二代(阿法替尼和达克替尼)和一种第三代(奥希替尼)表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)可用于管理EGFR突变阳性NSCLC。所有这些TKI在NSCLC患者中均有效，其中这些患者的肿瘤中携带外显子19的框内缺失和外显子21的L858R点突变。这两种突变约占所有EGFR突变的90％。在大约50％的患者中，对第一代和第二代EGFR TKI的抗性是由获得“看门人(gatekeeper)”突变T790M而介导的。目前，奥希替尼是唯一对外显子19缺失和L858R突变具有活性(无论是否存在T790M突变)的注册EGFR TKI。然而，即使用奥希替尼治疗的患者最终也会进展，这主要是由于其他抗性机制导致获得性抗性的发展。因此，仍然需要开发用于治疗NSCLC的新疗法，特别是对于那些在用第三代EGFR TKI治疗后已出现疾病进展的患者。

经由凋亡诱导程序性细胞死亡是奥希替尼和其他EGFR TKI抗癌作用的关键机制。凋亡可经由细胞内信号传导(所谓的“内源性”凋亡途径)或经由细胞外配体激活的信号(“外源性”途径)激活。c-IAP(IAP＝“凋亡抑制蛋白”)和x-IAP蛋白都是外源性凋亡的关键调节子，可阻止其触发。已经开发了几种称为Smac模拟物的小分子抑制剂，它们直接结合c-IAP和x-IAP以抑制其功能，从而导致凋亡。

发明内容

本说明书提供了一种利用Smac模拟物化合物与EGFR TKI组合来增强NSCLC中EGFRTKI治疗的抗增殖作用和促凋亡作用的手段。

通过使用对奥希替尼敏感的癌细胞群体进行实验室实验，发现使用Smac模拟物可在某些患者中增强EGFR TKI的作用。

还发现了EGFR TKI和Smac模拟物的组合可以提供针对EGFR相关癌症的有效的一线疗法，即在先前未接受EGFR TKI治疗的患者(在本文中称为EGFR TKI初治患者(EGFR

此外，已经发现在EGFR TKI治疗中存活但以非增殖性抗性前状态存在的细胞子集(在本文中称为药物耐受性持久性(Drug Tolerant Persister)[DTP]细胞))上调c-IAP1和c-IAP2，并因此对Smac模拟物敏感，并且发现用这些药剂治疗导致细胞死亡。

不受理论的束缚，提出在对EGFR途径依赖的癌细胞中，抑制该蛋白质会诱导细胞对Smac模拟物易感的状态。经过EGFR TKI单一疗法长期治疗后仍能存活的细胞具有细胞死亡缺陷，并可作为临床抗性发展的储存库。然而，在这些患者的子集中，在EGFR抑制存在下的癌细胞避免死亡所需的细胞适应可能会揭示出Smac模拟物的新颖脆弱性。在临床前细胞系模型中，与对奥希替尼敏感的亲本细胞相比，对奥希替尼耐受的细胞子集显示出对Smac模拟物的敏感性增强(无论是否存在共给药的奥希替尼)。在不影响亲本细胞的剂量下，Smac模拟物诱导DTP细胞显著水平的凋亡。呈现出对Smac模拟物具有增强敏感性的耐受性细胞表现出与c-IAP1和c-IAP2蛋白两者相对应的mRNA的上调。因此，患者肿瘤组织中这些mRNA或蛋白标记的高表达可能是患者中对Smac模拟物具有敏感性的潜在生物标记。

因此，本说明书披露了EGFR TKI和Smac模拟物的组合，其既作为EGFR突变型NSCLC的一线治疗(即在EGFR TKI初治患者中)，也作为EGFR突变型NSCLC的微小残留病阶段的治疗(即在先前用EGFR TKI治疗的患者中，其中在最大药物反应点开始组合治疗)。

在第一方面，提供了用于在治疗人类患者的癌症中使用的EGFR TKI，其中该EGFRTKI与Smac模拟物组合施用。

在另一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗癌症的方法，该方法包括向该人类患者施用治疗有效量的EGFR TKI，其中该EGFR TKI与治疗有效量的Smac模拟物组合施用。

在另一个方面，提供了EGFR TKI在制备用于治疗人类患者的癌症的药物中的用途，其中该EGFR TKI与Smac模拟物组合施用。

在另一个方面，提供了包含EGFR TKI、Smac模拟物和药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。

在另一个方面，提供了用于在治疗人类患者的非小细胞肺癌中使用的Smac模拟物，其中该患者的疾病在先前EGFR TKI治疗期间或治疗后已达到最大反应。

附图说明

图1：用奥希替尼长时间治疗后，EGFRm NSCLC细胞系的子集上调了c-IAP1和c-IAP2 mRNA的表达。对用奥希替尼长期治疗(14天)的细胞进行RNA测序(RNAseq)，并与未经治疗(DMSO)或短期治疗(24h)的细胞进行比较。将BIRC2 mRNA(c-IAP1)和BIC3mRNA(c-IAP2)的水平以log2标度绘制。

图2：Smac模拟物AZD5582增强了奥希替尼诱导的一组EGFRm细胞系的凋亡在一组6个EGFRm细胞系中，用奥希替尼单一疗法治疗或奥希替尼与AZD5582组合治疗48h后，测量胱天蛋白酶-3/7激活(凋亡启动的直接读数)。数据使用凋亡事件数除以细胞汇合来计算，并归一化为针对DMSO对照的值。数据以log标度显示，以更好地可视化所有细胞系。

图3：多个Smac模拟物分子增强了奥希替尼诱导的NCI-H1975和PC9细胞的凋亡在NCI-H1975和PC9细胞中，用奥希替尼单一疗法治疗或奥希替尼与4种不同的Smac模拟物小分子组合治疗48h后，测量胱天蛋白酶-3/7激活(凋亡启动的直接读数)。数据使用凋亡事件数除以细胞汇合来计算，并归一化为针对DMSO对照的值。

图4：AZD5582增强了奥希替尼在一系列EGFRm细胞系中的抗增殖作用。将HCC2935、NCI-H1975和PC9细胞用奥希替尼、AZD5582或这两种药剂的组合治疗10天，然后去除药物以使细胞再生长。在Incucyte成像平台上测量细胞汇合，作为细胞数的替代物。

图5：用奥希替尼/AZD5582组合治疗的细胞在去除药物后无法再生长。代表性图像取自图4中描述的PC9和HCC2935细胞系中的细胞生长实验。将细胞仅用奥希替尼或用奥希替尼与AZD5582组合治疗10天，此时从7天去除药物。

图6：奥希替尼DTP对Smac模拟物治疗敏感。用奥希替尼和4种不同的Smac模拟物的组合治疗亲本PC9细胞，以确定DTP存活率和再生长率。在Incucyte成像平台上测量细胞汇合，作为DTP数的替代物。

图7：Smac模拟物治疗诱导DTP中的凋亡。PC9 DTP的产生是通过用奥希替尼单一疗法治疗14天且随后用奥希替尼与Smac模拟物组合治疗72h。将细胞用绿色荧光胱天蛋白酶活性试剂共治疗，并在Incucyte成像平台上随时间监控。

图8：AZD5582增强了奥希替尼在体内PC9异种移植物中的抗增殖作用。媒介物、奥希替尼25mg/kg PO QD、AZD5582 2mg/kg IV QW、或这两种药剂的组合给药持续3周，随后在裸鼠PC9模型皮下再生长一段时间的肿瘤生长抑制。数据表示为平均值±SEM(n＝8/组)或单个小鼠的肿瘤体积。

图9：在微小残留病时递送的AZD5582增强了奥希替尼在体内PC9异种移植物中的抗增殖作用。媒介物给药持续3周、奥希替尼25mg/kg PO QD给药持续6周、或奥希替尼25mg/kg PO Qd给药持续3周，随后奥希替尼25mg/kg PO QD和AZD5582 2mg/kg IV QW组合给药持续3周，随后在裸鼠PC9模型皮下再生长一段时间的肿瘤生长抑制。数据表示为平均值SEM(n＝8/组)或单个小鼠的肿瘤体积。

具体实施方式

EGFR突变阳性NSCLC和诊断方法

在实施例中，癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌(NSCLC)。

在实施例中，癌症上调IAP。在实施例中，癌症过表达IAP。在实施例中，癌症具有增加的IAP表达。在实施例中，由于暴露于EGFR TKI，癌症具有增加的IAP表达。

在实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在实施例中，EGFR突变阳性NSCLC包含EGFR中的激活突变。在另外的实施例中，EGFR突变阳性NSCLC包含非抗性突变。在另外的实施例中，EGFR中的激活突变包含外显子18-21中的激活突变。在另外的实施例中，EGFR中的激活突变包含外显子19缺失或外显子21中的错义突变。在另外的实施例中，EGFR中的激活突变包含外显子19缺失或L858R取代突变。在另外的实施例中，EGFR中的突变包含T790M突变。

在实施例中，EGFR突变阳性NSCLC是局部晚期EGFR突变阳性NSCLC。

在实施例中，EGFR突变阳性NSCLC是转移性EGFR突变阳性NSCLC。

在实施例中，EGFR突变阳性NSCLC不适用于治愈性手术或放射疗法。

技术人员将认识到存在许多用于检测EGFR激活突变的方法。适合用于在这些方法中使用的多个测试已由美国食品和药物管理局(FDA)批准。这些方法包括基于肿瘤组织的诊断方法和基于血浆的诊断方法。通常，首先使用来源于人类患者的肿瘤组织活检样品来评估EGFR突变状态。如果肿瘤样品不可用，或如果肿瘤样品为阴性，则可以使用血浆样品来评估EGFR突变状态。用于检测EGFR突变(特别是检测外显子19缺失、L858R取代突变和T790M突变)的合适诊断测试的具体实例是Cobas

因此，在实施例中，EGFR突变阳性NSCLC包含EGFR中的激活突变(例如外显子18-21中的激活突变，如外显子19缺失、外显子21中的错义突变、和L858R取代突变；以及抗性突变，如T790M突变)，其中使用适当的诊断测试来确定人类患者的EGFR突变状态。在另外的实施例中，使用肿瘤组织样品来确定EGFR突变状态。在另外的实施例中，使用血浆样品来确定EGFR突变状态。在另外的实施例中，诊断方法使用FDA批准的测试。在另外的实施例中，诊断方法使用Cobas

在实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。

在实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在实施例中，人类患者先前接受过用奥希替尼或其药学上可接受的盐治疗。在另外的实施例中，人类患者的疾病在先前EGFR TKI治疗期间或治疗后已达到最大反应(微小残留病)阶段。在另外的实施例中，人类患者的疾病在先前用奥希替尼或其药学上可接受的盐治疗期间或治疗后已达到最大反应。EGFR TKI治疗包括用第一、第二、或第三代EGFR TKI或其组合治疗。在实施例中，人类患者患有已发展的EGFR T790M突变阳性NSCLC。

在实施例中，EGFR TKI与Smac模拟物的组合施用诱导药物耐受性持久性细胞中的细胞死亡。

EGFR TKI

EGFR TKI可以表征为第一代、第二代或第三代EGFR TKI，如下所述。

第一代EGFR TKI是带有激活突变的EGFR的可逆抑制剂，其不会显著抑制带有T790M突变的EGFR。第一代TKI的实例包括吉非替尼和埃罗替尼。

第二代EGFR TKI是带有激活突变的EGFR的不可逆抑制剂，其不会显著抑制带有T790M突变的EGFR。第二代TKI的实例包括阿法替尼和达克替尼。

第三代EGFR TKI是带有激活突变的EGFR的抑制剂，其也可以显著抑制带有T790M突变的EGFR，而不能显著抑制野生型EGFR。第三代TKI的实例包括具有式(I)的化合物、奥希替尼、AZD3759、拉泽替尼(lazertinib)、纳扎替尼(nazartinib)、CO1686(罗西替尼(rociletinib))、HM61713、ASP8273、EGF816、PF-06747775(马韦尔替尼(mavelertinib))、阿维替尼(avitinib)(艾维替尼(abivertinib))、艾氟替尼(AST2818)和CX-101(RX-518)、阿美替尼(almonertinib)(HS-10296)和BPI-7711。

在实施例中，EGFR TKI是第一代EGFR TKI。在另外的实施例中，第一代EGFR TKI选自由以下组成的组：吉非替尼或其药学上可接受的盐、埃克替尼或其药学上可接受的盐、和埃罗替尼或其药学上可接受的盐。

在实施例中，EGFR TKI是第二代EGFR TKI。在另外的实施例中，第二代EGFR TKI选自达克替尼或其药学上可接受的盐、和阿法替尼或其药学上可接受的盐。

在实施例中，EGFR TKI是第三代EGFR TKI。在另一个实施例中，第三代EGFR TKI是如下定义的具有式(I)的化合物。在另外的实施例中，第三代EGFR TKI选自由以下组成的组：奥希替尼或其药学上可接受的盐、AZD3759或其药学上可接受的盐、拉泽替尼或其药学上可接受的盐、艾维替尼或其药学上可接受的盐、艾氟替尼或其药学上可接受的盐、CX-101或其药学上可接受的盐、HS-10296或其药学上可接受的盐、和BPI-7711或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，第三代EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。

在一个方面，EGFR TKI是具有式(I)的化合物：

其中：

G选自4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基、吲哚-3-基、吲唑-1-基、3，4-二氢-1H-[1，4]噁嗪并[4，3-a]吲哚-10-基、6，7，8，9-四氢吡啶并[1，2-a]吲哚-10-基、5，6-二氢-4H-吡咯并[3，2，1-ij]喹啉-1-基、吡咯并[3，2-b]吡啶-3-基和吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基；

R

R

R

R

R

X是CH或N；并且

n是0、1或2；

或其药学上可接受的盐。

在另一个方面，提供了如上定义的具有式(I)的化合物，其中G选自吲哚-3-基和吲唑-1-基；R

具有式(I)的化合物的实例包括描述于WO 2013/014448、WO 2015/175632、WO2016/054987、WO 2016/015453、WO 2016/094821、WO 2016/070816和WO 2016/173438中的那些。

奥希替尼具有以下化学结构：

已知奥希替尼的游离碱的化学名为：N-(2-{2-二甲基氨基乙基-甲基氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺。奥希替尼描述于WO2013/014448中。奥希替尼也被称为AZD9291。

奥希替尼能以如下甲磺酸盐的形式存在：N-(2-{2-二甲基氨基乙基-甲基氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸盐。甲磺酸奥希替尼也被称为TAGRISSO

甲磺酸奥希替尼目前被批准为每日一次口服片剂配制品，剂量为80mg(以游离碱表示，相当于95.4mg甲磺酸奥希替尼)，用于治疗转移性EGFR T790M突变阳性NSCLC人类患者。如果需要改变剂量，则可用40mg每日一次口服片剂配制品(以游离碱表示，相当于47.7mg甲磺酸奥希替尼)。片芯包含药物稀释剂(如甘露醇和微晶纤维素)、崩解剂(如低取代的羟丙基纤维素)和润滑剂(如硬脂酰富马酸钠)。片剂配制品描述于WO2015/101791中。

因此，在实施例中，奥希替尼或其药学上可接受的盐是甲磺酸盐的形式，即N-(2-{2-二甲基氨基乙基-甲基氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺甲磺酸盐。

在实施例中，奥希替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，甲磺酸奥希替尼每日施用一次。

在实施例中，奥希替尼的总日剂量为约80mg。在另外的实施例中，甲磺酸奥希替尼的总日剂量为约95.4mg。

在实施例中，奥希替尼的总日剂量为约40mg。在另外的实施例中，甲磺酸奥希替尼的总日剂量为约47.7mg。

在实施例中，奥希替尼或其药学上可接受的盐是片剂形式。

在实施例中，奥希替尼或其药学上可接受的盐以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的形式施用。在另外的实施例中，该组合物包含一种或多种药物稀释剂(如甘露醇和微晶纤维素)、一种或多种药物崩解剂(如低取代的羟丙基纤维素)或一种或多种药物润滑剂(如硬脂酰富马酸钠)。

在实施例中，组合物是片剂的形式，其中片芯包含：(a)从2至70份奥希替尼或其药学上可接受的盐；(b)从5至96份两种或更多种药物稀释剂；(c)从2至15份一种或多种药物崩解剂；以及(d)从0.5至3份一种或多种药物滑润剂；并且其中所有份是按重量计并且这些份(a)+(b)+(c)+(d)之和＝100。

在实施例中，组合物是片剂的形式，其中片芯包含：(a)从7至25份奥希替尼或其药学上可接受的盐；(b)从55至85份两种或更多种药物稀释剂，其中这些药物稀释剂包含微晶纤维素和甘露醇；(c)从2至8份药物崩解剂，其中这些药物崩解剂包含低取代的羟丙基纤维素；(d)从1.5至2.5份药物滑润剂，其中这些药物滑润剂包含硬脂酰富马酸钠；并且其中所有份是按重量计并且这些份(a)+(b)+(c)+(d)之和＝100。

在实施例中，组合物是片剂的形式，其中片芯包含：(a)约19份甲磺酸奥希替尼；(b)约59份甘露醇；(c)约15份微晶纤维素；(d)约5份低取代的羟丙基纤维素；以及(e)约2份硬脂酰富马酸钠；并且其中所有份是按重量计并且这些份(a)+(b)+(c)+(d)+(e)之和＝100。

AZD3759具有以下化学结构：

已知AZD3759的游离碱的化学名为：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基-6-喹唑啉基(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪甲酸酯。AZD3759描述于WO 2014/135876中。

在实施例中，AZD3759或其药学上可接受的盐每日施用两次。在另外的实施例中，AZD3759每日施用两次。

在实施例中，AZD3759的总日剂量为约400mg。在另外的实施例中，约200mg的AZD3759每日施用两次。

拉泽替尼具有以下化学结构：

已知拉泽替尼的游离碱的化学名为：N-{5-[(4-{4-[(二甲基氨基)甲基]-3-苯基-1H-吡唑-1-基}-2-嘧啶基)氨基]-4-甲氧基-2-(4-吗啉基)苯基}丙烯酰胺。拉泽替尼配制品WO 2016/060443中。拉泽替尼也被称为YH25448和GNS-1480。

在实施例中，拉泽替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，拉泽替尼每日施用一次。

在实施例中，拉泽替尼的总日剂量为约20至320mg。

在实施例中，拉泽替尼的总日剂量为约240mg。

阿维替尼具有以下化学结构：

已知阿维替尼的游离碱的化学名为：N-(3-((2-((3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并(2，3-d)嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙-2-烯酰胺。阿维替尼披露于US2014038940中。阿维替尼也被称为艾维替尼。

在实施例中，阿维替尼或其药学上可接受的盐每日施用两次。在另外的实施例中，马来酸阿维替尼每日施用两次。

在实施例中，马来酸阿维替尼的总日剂量为约600mg。

艾氟替尼具有以下化学结构：

已知艾氟替尼的游离碱的化学名为：N-{2-{[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基}吡啶-3-基}丙烯酰胺。艾氟替尼披露于WO 2016/15453中。艾氟替尼也被称为AST2818。

在实施例中，艾氟替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，甲磺酸艾氟替尼每日施用一次。

在实施例中，甲磺酸艾氟替尼的总日剂量为约80mg。

在实施例中，甲磺酸艾氟替尼的总日剂量为约40mg。

阿法替尼具有以下化学结构：

已知阿法替尼的游离碱的化学名为：N-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-[(3S)-氧杂戊环-3-基]氧基喹唑啉-6-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺。阿法替尼披露于WO 02/50043中。阿法替尼也被称为吉泰瑞(Gilotrif)。

在实施例中，阿法替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，马来酸阿法替尼每日施用一次。

在实施例中，马来酸阿法替尼的总日剂量为约40mg。

在实施例中，马来酸阿法替尼的总日剂量为约30mg。

CX-101具有以下化学结构：

已知CX-101的游离碱的化学名为：N-(3-(2-((2，3-二氟-4-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)喹唑啉-8-基)苯基)丙烯酰胺。CX-101披露于WO 2015/027222中。CX-101也被称为RX-518。

HS-10296(阿美替尼)具有以下化学结构：

已知HS-10296的游离碱的化学名为：N-[5-[[4-(1-环丙基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基]-2-[2-(二甲基氨基)乙基-甲基-氨基]-4-甲氧基-苯基]丙-2-烯酰胺。HS-10296披露于WO 2016/054987中。

在实施例中，HS-10296的总日剂量为约110mg。

埃克替尼具有以下化学结构：

已知埃克替尼的游离碱的化学名为：N-(3-乙炔基苯基)-2，5，8，11-四氧杂-15，17-二氮杂三环[10.8.0.0

在实施例中，埃克替尼或其药学上可接受的盐每日施用三次。在另外的实施例中，盐酸埃克替尼每日施用三次。

在实施例中，盐酸埃克替尼的总日剂量为约375mg。

BPI-7711具有以下化学结构：

已知BPI-7711的游离碱的化学名为：N-[2-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-4-甲氧基-5-[[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺。BPI-7711披露于WO 2016/94821中。

在实施例中，BPI-7711的总日剂量为约180mg。

达克替尼具有以下化学结构：

已知达克替尼的游离形式的化学名为：(2E)-N-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯酰胺。达克替尼披露于WO 2005/107758中。达克替尼也被称为PF-00299804。

达克替尼能以如下达克替尼一水合物的形式存在：即(2E)-N-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯酰胺一水合物。

在实施例中，达克替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，达克替尼一水合物每日施用一次。

在实施例中，达克替尼一水合物的总日剂量为约45mg。

在实施例中，达克替尼或其药学上可接受的盐是片剂形式。

在实施例中，达克替尼或其药学上可接受的盐以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的形式施用。在另外的实施例中，一种或多种药学上可接受的赋形剂包括乳糖一水合物、微晶纤维素、羟乙酸淀粉钠和硬脂酸镁。

吉非替尼具有以下化学结构：

已知吉非替尼的游离碱的化学名为：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉-4-基丙氧基)喹唑啉-4-胺。吉非替尼披露于WO 1996/033980中。吉非替尼也被称为IRESSA

在实施例中，吉非替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，吉非替尼每日施用一次。

在实施例中，吉非替尼的总日剂量为约250mg。

埃罗替尼具有以下化学结构：

已知埃罗替尼的游离碱的化学名为：N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺。埃罗替尼披露于WO 1996/030347中。埃罗替尼也被称为TARCEVA

在实施例中，埃罗替尼或其药学上可接受的盐每日施用一次。在另外的实施例中，埃罗替尼每日施用一次。

在实施例中，埃罗替尼的总日剂量为约150mg。

在实施例中，埃罗替尼的总日剂量为约100mg。

Smac模拟物

在实施例中，Smac模拟物是结合并抑制一个或多个IAP(例如细胞IAP(c-IAP，例如c-IAP1或c-IAP2)或X连接的IAP(x-IAP))的活性的任何分子。

在实施例中，Smac模拟物是在以下出版物中描述或要求保护的任何IAP抑制剂：US20050197403、US 7244851、US 7309792、US 7517906、US 7579320、US 7547724、WO 2004/007529、WO 2005/069888、WO 2005/069894、WO 2005097791、WO 2006/010118、WO 2006/122408、WO 2006/017295、WO 2006/133147、WO 2006/128455、WO 2006/091972、WO 2006/020060、WO 2006/014361、WO 2006/097791、WO 2007/021825、WO 2007/106192、WO 2007/101347、WO 2008/045905、WO 2008/016893、WO 2008/128121、WO 2008/128171、WO 2008/134679、WO 2008/073305、WO 2009/060292、WO 2007/104162、WO 2007/130626、WO 2007/131366、WO 2007/136921、WO 2008/014229、WO 2008/014236、WO 2008/014238、WO 2008/014240、WO 2008/134679、WO 2009/136290、WO 2008/014236和WO 2008/144925。

在实施例中，Smac模拟物选自由以下组成的组：AZD5582或其药学上可接受的盐、比瑞那帕(birinapant)或其药学上可接受的盐、LCL161或其药学上可接受的盐、GDC-0152或其药学上可接受的盐、GDC-0917或其药学上可接受的盐、HGS1029或其药学上可接受的盐、和AT-406或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，Smac模拟物是AZD5582或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，Smac模拟物是AZD5582二盐酸盐。在另外的实施例中，Smac模拟物是比瑞那帕或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，Smac模拟物是LCL161或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，Smac模拟物是GDC-0152或其药学上可接受的盐。

AZD5582具有以下化学结构：

已知AZD5582的游离碱的化学名为：3，3′-[2，4-己二炔-1，6-二基双[氧基[(1S，2R)-2，3-二氢-1H-茚-2，1-二基]]]双[N-甲基-L-丙氨酰基-(2S)-2-环己基甘氨酰基-L-脯氨酰胺。AZD5582披露于WO 2010142994中。

比瑞那帕或TL32711具有以下化学结构：

已知比瑞那帕的游离碱的化学名为：(2S，2′S)-N，N′-[(6，6′-二氟-1H，1′H-2，2′-二吲哚-3，3′-二基)双{亚甲基[(2R，4S)-4-羟基-2，1-吡咯烷二基][(2S)-1-氧代-1，2-丁烷二基]}]双[2-(甲基氨基)丙酰胺]。比瑞那帕披露于US 8283372中。

LCL161具有以下化学结构：

已知LCL161的游离碱的化学名为：(S)-N-((S)-1-环己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲酰基)噻唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(甲基氨基)丙酰胺。LCL161披露于WO2008016893中。

GDC-0152具有以下化学结构：

已知GDC-0152的游离碱的化学名为：(S)-1-[(S)-2-环己基-2-([S]-2-[甲基氨基]丙酰胺基)乙酰基]-N-(4-苯基-1，2，3-噻二唑-5-基)吡咯烷-2-甲酰胺。GDC-0152披露于US 20060014700中。

GDC-0917具有以下化学结构：

已知GDC-0917的游离碱的化学名为：(S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基)乙酰基)-N-(2-(噁唑-2-基)-4-苯基噻唑-5-基)吡咯烷-2-甲酰胺。GDC-0917披露于WO 2013103703中。

AT-406具有以下化学结构：

已知AT-406的游离碱的化学名为：(5S，8S，10aR)-N-二苯甲基-5-((S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基)-3-(3-甲基丁酰基)-6-氧代十氢吡咯并[1，2-a][1，5]二氮芳辛-8-甲酰胺。AT-406披露于WO 2008/128171中。

HGS1029具有以下化学结构：

已知HGS1029的游离碱为N1，N4-双((3S，5S)-1-((S)-3，3-二甲基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基)丁酰基)-5-((R)-1，2，3，4-四氢萘乙酰胺-1-基氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)对苯二甲酰胺。HGS1029披露于WO 2007104162中。

另外的实施例

在一个方面，提供了用于在治疗人类患者的癌症中使用的EGFR TKI，其中该EGFRTKI与Smac模拟物组合施用。在实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗癌症的方法，该方法包括向该人类患者施用治疗有效量的EGFR TKI，其中该EGFR TKI与治疗有效量的Smac模拟物组合施用。在实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了EGFR TKI在制备用于治疗人类患者的癌症的药物中的用途，其中该EGFR TKI与Smac模拟物组合施用。在实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了用于在治疗人类患者的癌症中使用的EGFR TKI和Smac模拟物的组合。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗癌症的方法，该方法包括向该人类患者施用治疗有效量的EGFR TKI和治疗有效量的Smac模拟物的组合。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了EGFR TKI和Smac模拟物的组合在制备用于治疗人类患者的癌症的药物中的用途。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFRTKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了用于在治疗人类患者的癌症中使用的奥希替尼或其药学上可接受的盐和Smac模拟物的组合，其中在将Smac模拟物施用至该人类患者之前，向该人类患者施用奥希替尼或其药学上可接受的盐。在实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗癌症的方法，该方法包括向该人类患者施用治疗有效量的奥希替尼或其药学上可接受的盐和治疗有效量的Smac模拟物的组合，其中在将Smac模拟物施用至该人类患者之前，向该人类患者施用奥希替尼或其药学上可接受的盐。在实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了奥希替尼或其药学上可接受的盐和Smac模拟物的组合在制备用于治疗人类患者的癌症的药物中的用途，其中在将Smac模拟物施用至该人类患者之前，向该人类患者施用奥希替尼或其药学上可接受的盐。在实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了用于在治疗人类患者的癌症中使用的EGFR TKI，其中该治疗包括向该人类患者分别、顺序或同时施用i)EGFR TKI和ii)Smac模拟物。如果治疗是分别的或顺序的，则可以选择EGFR TKI剂量与Smac模拟物剂量之间的间隔，以确保产生组合的治疗效果。

在实施例中，顺序施用EGFR TKI和Smac模拟物，并且在施用Smac模拟物之前施用EGFR TKI。

在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗癌症的方法，该方法包括向该人类患者分别、顺序或同时施用i)治疗有效量的EGFR TKI和ii)治疗有效量的Smac模拟物。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了EGFR TKI在制备用于治疗人类患者的癌症的药物中的用途，其中该治疗包括向该人类患者分别、顺序或同时施用i)EGFR TKI和ii)Smac模拟物。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFRTKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了用于在治疗人类患者的癌症中使用的Smac模拟物，其中该治疗包括向该人类患者分别、顺序或同时施用i)EGFR TKI和ii)Smac模拟物。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗癌症的方法，该方法包括向该人类患者施用治疗有效量的Smac模拟物，其中该治疗包括向该人类患者分别、顺序或同时施用i)治疗有效量的EGFR TKI和ii)治疗有效量的Smac模拟物。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了Smac模拟物在制备用于治疗人类患者的癌症的药物中的用途，其中该治疗包括向该人类患者分别、顺序或同时施用i)EGFR TKI和ii)Smac模拟物。在实施例中，EGFR TKI是奥希替尼或其药学上可接受的盐。在另外的实施例中，人类患者是EGFR TKI初治人类患者。在另外的实施例中，人类患者先前接受过EGFR TKI治疗。在另外的实施例中，人类患者先前接受过奥希替尼或其药学上可接受的盐。在仍另外的实施例中，癌症是肺癌，例如NSCLC。在又另外的实施例中，NSCLC是EGFR突变阳性NSCLC。

在一个方面，提供了试剂盒，该试剂盒包含：

-第一药物组合物，该第一药物组合物包含EGFR TKI和药学上可接受的稀释剂或载体；以及

-第二药物组合物，该第二药物组合物包含Smac模拟物和药学上可接受的稀释剂或载体。

在一个方面，提供了用于在治疗人类患者的非小细胞肺癌中使用的Smac模拟物，其中该患者的疾病在先前EGFR TKI治疗期间或治疗后已达到最大反应。在实施例中，人类患者在先前用奥希替尼或其药学上可接受的盐治疗期间或治疗后已出现疾病进展。在实施例中，用Smac模拟物的治疗诱导药物耐受性持久性细胞中的细胞死亡。

在一个方面，提供了在治疗人类患者的非小细胞肺癌中使用的奥希替尼或其药学上可接受的盐，其中该人类患者在用不同的EGFR TKI治疗期间或治疗后已出现疾病进展。

在一个方面，提供了在需要这种治疗的人类患者中治疗非小细胞肺癌的方法，该方法包括向该人类患者施用治疗有效量的Smac模拟物，其中该患者在先前EGFR TKI治疗期间或治疗后已出现疾病进展。在实施例中，人类患者在先前用奥希替尼或其药学上可接受的盐治疗期间或治疗后已出现疾病进展。在实施例中，用Smac模拟物的治疗诱导药物耐受性持久性细胞中的细胞死亡。

在一个方面，提供了Smac模拟物在制备用于治疗人类患者的非小细胞肺癌的药物中的用途，其中该患者在先前EGFR TKI治疗期间或治疗后已出现疾病进展。在实施例中，人类患者在先前用奥希替尼或其药学上可接受的盐治疗期间或治疗后已出现疾病进展。在实施例中，用Smac模拟物的治疗诱导药物耐受性持久性细胞中的细胞死亡。

提供了以下具体实例并参考附图，仅用于说明目的而不应被解释为限制本文的教导。

PC9是来源于携带EGFR del E746_A750(Ex19-del)中激活突变的人肺腺癌的细胞系。HCC2935是来源于携带EGFR del E746_T751(Ex19-del)中激活突变的人肺腺癌的胸腔积液的细胞系。HCC2279是来源于带有EGFR del Em746_A750中激活突变的人肺腺癌的细胞系。HCC4006是来源于带有EGFR del E746_A750中激活突变的人肺腺癌的细胞系。II-18是来源于带有EGFR L858R中激活突变的人肺腺癌的细胞系。NCI-H1975是来源于带有EGFRL858R中激活突变和EGFR T790M中看门人突变的人肺腺癌的细胞系。

除非另有说明，否则所有试剂都是可商购的，并按原样使用。

本实验的目的是使用RNAseq分析经奥希替尼长期(14d)或短期(24h)治疗的EGFRm细胞系中的基因表达。数据表明，在奥希替尼治疗后，尤其是长期(DTP)方案治疗后，PC9、HCC2935和NCI-H1975细胞系中编码c-IAP1和c-IAP2的mRNA(分别为BIRC2和BIRC3)显著上调。

该实验的目的是展示，通过添加Smac模拟物可以增加奥希替尼对凋亡细胞死亡的诱导。数据表明达到此效果的原因是对于组中的每个细胞系，组合治疗组的凋亡事件数(归一化为细胞汇合)显著高于奥希替尼单一疗法组。

将EGFRm亲本细胞(HCC2279、HCC2935、HCC4006、II-18、NCI-H1975和PC9)以5000个细胞/孔的浓度接种在96孔板中。第二天，用奥希替尼单一疗法(160nM)、Smac模拟物单一疗法(1μM)、或其组合以及终浓度为1μM的Incucyte胱天蛋白酶3/7试剂(绿色)治疗细胞。然后将细胞置于Incucyte S3成像系统上，并且每4小时测量一次细胞汇合和绿色荧光。96h后终止实验，并通过将单个绿点(凋亡事件)的数目除以细胞汇合来计算凋亡值。对于每个细胞系，将数据归一化为48h处用DMSO治疗的值(峰凋亡)。图2显示了用奥希替尼+AZD5582治疗的所有6个细胞系的数据。图3显示了用奥希替尼+4种不同的Smac模拟物化合物治疗的PC9和NCI-H1975细胞系的数据。

该实验的目的是展示用Smac模拟物治疗抑制了EGFR TKI治疗后的药物耐受性持久性细胞的建立，并抑制了EGFR TKI单一疗法后的持久性细胞的再生长。数据表明达到此效果的原因是用奥希替尼和AZD5582的组合治疗10天的PC9、HCC2935或NCI-H1975细胞在实验结束时显示的百分比汇合(细胞生长的量度)比仅用奥希替尼治疗10天的细胞的百分比汇合低(图4)。类似地，与仅用奥希替尼治疗而随后不用Smac模拟物治疗相比，用奥希替尼治疗10天且随后用4种不同的Smac模拟物分子治疗的PC9细胞在实验结束时显示的百分比汇合(细胞生长的量度)更低(图6)。

将细胞以40,000个细胞/孔的浓度铺板在48孔板中。第二天，用奥希替尼单一疗法(500nM)、指示剂量的Smac模拟物、这两种药剂的组合治疗细胞，并使用Incucyte成像平台开始汇合测量。10天后，将组合治疗的孔、以及奥希替尼单一疗法治疗的孔的一个子集用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，并替换为无药物培养基。在单独的实验中，将PC9细胞用奥希替尼单一疗法治疗10天，用PBS洗涤2次，并替换为含有指示剂量的Smac模拟物的培养基或对照培养基(DMSO)。汇合测量再继续进行12-17天，并使用PRISM软件绘制结果。数据示于图4、5和6中。

该实验的目的是展示用Smac模拟物治疗诱导了奥希替尼药物耐受性持久性(DTP)PC9的凋亡。数据表明达到此效果的原因是观察到与用对照培养基(DMSO)或仅用奥希替尼治疗的DTP细胞相比，用Smac模拟物单一疗法、或奥希替尼和Smac模拟物的组合治疗的DTP细胞中胱天蛋白酶活性(凋亡的指标)增强(图7)。

用500nM奥希替尼治疗PC9亲本细胞10天，以建立药物耐受性持久性细胞。此时，将细胞用1μM剂量指示的Smac模拟物+/-奥希替尼(500nM)治疗，继续进行奥希替尼单一疗法(500nM)治疗或用无药物对照培养基治疗。所有孔另外用Incucyte胱天蛋白酶3/7试剂(1μM)治疗。然后将细胞置于Incucyte S3成像系统上，并且每4小时测量一次细胞汇合和绿色荧光。96h后终止实验，并通过将单个绿点(凋亡事件)的数目除以细胞汇合来计算凋亡值。对于每个治疗，将数据归一化为时间0处用奥希替尼单一疗法治疗的值。数据示于图6中。

该实验的目的是展示用Smac模拟物治疗增强了EGFR TKI治疗的抗肿瘤作用，并延迟了体内治疗释放后的再生长。数据表明达到此效果的原因是用奥希替尼和AZD5582的组合治疗21天的PC9异种移植物显示出与仅用奥希替尼治疗21天的细胞相比延迟的再生长(图8)。类似地，与仅用奥希替尼治疗42天而随后不用Smac模拟物治疗的PC9异种移植物相比，用奥希替尼治疗21天且随后用AZD5582和奥希替尼的组合治疗21天的PC9异种移植物显示出再生长延迟(图9)。