用于治疗心脏病的具有心肌细胞增殖活性的新型杂环衍生物

摘要

提供了用于治疗心脏病的具有心肌细胞增殖活性的新型杂环衍生物。具体地，提供了式(I)化合物或药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂合物或前药、其制备方法、其应用和用于治疗心脏疾病的药物组合物。

说明书

发明领域

本发明属于医疗技术和药物领域，具体地，涉及用于治疗心脏疾病的具有心肌细胞增殖活性的新型杂环衍生物。

背景技术

多种因素可导致心肌细胞死亡和/或心肌细胞功能紊乱，引起许多心脏疾病。然而，在新生阶段一个狭窄的增殖窗口后，成年心肌细胞几乎失去了进行细胞分裂和增殖的能力。(Science 2011；331:1078-1080；Circulation 2018；24:2809-2816)。这种几乎完全丧失再生能力的成年心肌细胞严重限制了心肌损伤的修复。成年哺乳动物的心脏在受伤后会形成纤维化的疤痕，这可能导致心力衰竭、心律失常和死亡。现有治疗方法可以暂时改善心脏功能，但不能取代失去的心肌细胞。因此，多个研究领域都集中在可能通过药物治疗或干细胞治疗使心脏心肌细胞再生的药剂。

最近的评论文章(J.Med.Chem.2015,58:9451-9479；Science.2017,356:1035–1039)强调了许多不同的方法来治疗心脏疾病相关的心肌细胞生长和增殖。一些激酶抑制剂，如GSK b抑制剂被认为可以激活WnT途径引起细胞生长。这些化合物中的一些也是干细胞分化的激活剂。另一份出版物(Cell Stem Cell 2019,24:579-591.e12)强调了一种MAP4K4抑制剂,其可在急性心肌梗塞中保护心脏。如其他一些参考文献中所述，已知其他激酶抑制剂(例如DYRK和CLK激酶抑制剂)也有助于细胞生长，尤其是胰腺细胞生长(WO2018081401和WO2019136320)。其他包括CLK2激酶抑制剂，其已显示出骨关节炎的破骨细胞生长并已被证明对治疗骨关节炎有用。

本领域迫切需要开发能有效促进心肌细胞增殖和心肌再生的新化合物。

发明内容

本发明的目的是提供具有全新结构的化合物，这些化合物能调节全新的靶点，能有力地促进心肌细胞的增殖和心肌再生，从而预防和治疗主要的心血管疾病(如心肌梗塞、心力衰竭、扩张型心肌病和先天性心脏病)的发生和发展。进一步说，该化合物可以有效和快速地促进心肌细胞的增殖或再生，并治疗心脏病和心肌梗塞。

在本发明的第一方面，提供了一种式(I)化合物；或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药；

其中，

环A1和环A2各自独立地选自下组：取代或未取代的C3-C10杂环基、C4-C10杂芳基、C6-C10芳基，其中杂环和杂芳基具有1-4个选自N、O、S的杂原子；

环B为具有两个N杂原子或一个N杂原子和一个S或O杂原子的取代的5元杂芳基，其中1或2个环C原子具有氧代(＝O)取代基；

La为不存在，或者为取代或未取代的二价或三价连接基团，并且骨架连接原子(N、C、O)的数量为1、2或3，其中，当

Lb为取代或未取代的二价连接基团，且骨架连接原子(N、C、O)的数量为1、2或3；

R

其中，两个相邻的Rc可共同形成取代或未取代的C4-C8杂环、取代或未取代的C4-C7杂芳基、取代的或未取代的C6芳基；

其中，两个相邻的Rd可共同形成取代或未取代的C4-C8杂环、取代或未取代的C4-C7杂芳基、取代的或未取代的C6芳基；

n1和n2独立地为0、1、2、3、4或5；

除非另有说明，术语“取代的”是指基团中的一个或多个(优选1、2、3、4或5)个氢被R'基团取代；

R'各自独立地选自下组：D、卤素(优选F、Cl、Br、I)、-OH、硝基、氰基、磺酰基、R"、-N(R")、R"-O-、R"-S-、R"-S(O)

以及，在R'中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环烷基和杂芳基，作为整个基团或部分基团，可任选被选自下组的取代基取代：卤素(优选F、Cl、Br、I)、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、-OH、硝基、氰基、磺酰基和氨基；

限定条件是：

(A)当Lb、环B和环La共同形成

(P1)环A1不为取代或未取代的苯基；或

(P2)环A2不选自下组：

(P3)环A1和/或环A2选自下组：

或

(B)环A1和环A2都不为取代或未取代的苯基；或

(C)环A2不为

在另外优选的实施方式中，(D)环B1不为

在另外优选的实施方式中，Lb和La连接在环B1的两个不同的位置上，两个位置被至少一个环原子分隔开(或不相邻)。

在另外优选的实施方式中，Lb和La均不具有–CO-O-部分或片段。

在另外优选的实施方式中，环A1和环A2均不为

除非另有定义，术语“取代或未取代的苯基”是指具有单环结构、没有或含一个或多个取代基的苯基。

在另外优选的实施方式中，(P2)中，所述取代的苯基为

在另外优选的实施方式中，环B中的“取代”是指基团中一个或多个(优选地，1、2、3、4或5)氢原子被选自下组的取代基取代：D、卤素(优选地，F、Cl、Br、I)、-OH、硝基、氰基、磺酰基、R"、-N(R")、R"-O-、R"-S、-R"-S(O)

在另外优选的实施方式中，环B1具有选自下组的结构：

其中，R为H或C1-C4烷基、C3-C4环烷基或C1-C4卤代烷基。

在另外优选的实施方式中，其中环B1具有选自下组的结构：

在另外优选的实施方式中，Lb为-Lb1-Lb2-Lb3-，其中，Lb1和Lb2各自独立地选自下组：不存在、-S-、-O-、-NRa-、-N(CORa)-、-N(COORa)-或-C(R

R

在另外优选的实施方式中，Lb为-NRa-、-N(CORa)-、-N(COORa)-或-C(R

在另外优选的实施方式中，Lb为-NH-、-CH

在另外优选的实施方式中，Lb为不存在。

在另外优选的实施方式中，La为-La1-La2-La3-,其中La1选自下组：＝CRb-、-CRb＝、-S-、-O-、-NRa-、-N(CORa)-、-N(COORa)-、-N(S(O)

R

在另外优选的实施方式中，La为＝CRb-、＝CRb-C(Rb)

在另外优选的实施方式中，La为＝CH

在另外优选的实施方式中，La为＝CH

在另外优选的实施方式中，

在另外优选的实施方式中，

在另外优选的实施方式中，环A1和环A2各自独立地选自下组：单环、稠合环(或双环)或三环。

在另外优选的实施方式中，环A1和环A2中的至少一个选自下组：取代或未取代的稠合环(或双环)或三环，其中，稠合环(或双环)或三环各自具有0-5个选自N、O、S的杂原子。

在另外优选的实施方式中，环A1和环A2均选自下组：取代或未取代的稠合环(或双环)或三环。

在另外优选的实施方式中，环A1和/或环A2为六元环加六元环结构的双环，或六元环加五元环结构的双环。

在另外优选的实施方式中，环A1和/或环A2为六元芳香环加六元环芳香或非芳香结构的双环，或六元芳香环加五元芳香或非芳香环结构的双环。

在另外优选的实施方式中，所述5元芳香或非芳香环结构具有0、1、2或3个杂原子(N、S或O)。

在另外优选的实施方式中，所述6元芳香或非芳香环结构具有0、1、2或3个杂原子(N、S或O)。

在另外优选的实施方式中，环A1和/或环A2选自下组：

在另外优选的实施方式中，稠合环(或双环)选自下组：

在另外优选的实施方式中，环A2选自下组：

在另外优选的实施方式中，除非另有说明，所述杂芳基是指含1、2或3个选自以下的杂原子的芳香环：O、N和S。

在另外优选的实施方式中，除非另有说明，所述杂环烷基是指含1、2或3个选自以下的杂原子的环烷基：O、N和S。

在另外优选的实施方式中，

其中，所述化合物是指化合物具有式A或式B结构

R为烷基、芳基、SO

R

R

R

在另外优选的实施方式中，A1、A2、B1、La、Lb、

在另外优选的实施方式中，式(I)化合物为在实施例1至105中制备的化合物中的任一个。

在另外优选的实施方式中，所述化合物选自表A、表1或表2中的任一个。

在另外优选的实施方式中，所述化合物选自表A：

表A

在本发明的第二方面中，提供了一种药物组合物，其包括如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药，以及药学上可接受的载体。

在本发明的第三方面中，提供了一种如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药在制备用于治疗或预防心血管疾病的药物中的用途。

在另外优选的实施方式中，所述心血管疾病是心脏疾病。

在另外优选的实施方式中，所述心脏疾病选自下组：心肌梗塞、心力衰竭、心房颤动、冠心病、心肌梗死、房间隔缺损、冠状动脉疾病和它们的组合。

在另外优选的实施方式中，所述心血管疾病是通过抑制选自下组的一个或多个激酶的活性的来治疗或预防的：DYRK1A、DYRK2、CLK1、CIT、HIPK1和CK2α2(CK2a2)。

在另外优选的实施方式中，所述心血管疾病是通过抑制选自下组的一个或多个激酶的活性的来治疗或预防的：DYRK1A、DYRK2、CLK1、CIT、HIPK1、CK2α2(CK2a2)(优选地，选自下组:DYRK1A、CLK1和CK2α2(CK2a2))，并且不是通过抑制GSK3b激酶的活性。

在本发明的第四方面，提供了一种促进心肌细胞体外生长的方法，其包括以下步骤：

在式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药的存在下培养心肌细胞。

在本发明的第五方面，提供了一种促进心肌细胞体外增殖和/或再生的方法，其包括以下步骤：

将心肌细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而促进心肌细胞的增殖和/或再生。

在本发明的第六方面，提供了一种治疗心血管疾病的方法,其包括以下步骤：向有需要的对象施用如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药。

在另外优选的实施方式中，所述对象包括人或非人哺乳动物。

在本发明的第七方面，提供了一种抑制DYRK1A激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制DYRK1A激酶活性。

在另外优选的实施方式中，所述化合物对DYRK1A的IC50值与对GSK3β的IC50值的比率小于1/5，优选小于1/10，更优选小于1/20。

在本发明的第八方面，提供了一种抑制DYRK2激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制DYRK2激酶活性。

在本发明的第九方面，提供了一种抑制CLK1激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制所述激酶活性。

在另外优选的实施方式中，所述化合物对CLK1的IC50值与对GSK3β的IC50值的比率小于1/5，优选小于1/10，更优选小于1/20。

在本发明的第十方面，提供了一种抑制CIT激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制CIT激酶活性。

在本发明的第11方面，提供了一种抑制HIPK1激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制HIPK1激酶活性。

在本发明的第12方面，提供了一种抑制HIPK2激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制HIPK2激酶活性。

在本发明的第13方面，提供了一种抑制CKα2(CK2a2)激酶活性的方法，其中，所述方法包括以下步骤：将细胞与如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药接触，从而抑制CKα2(CK2a2)激酶活性。

在另外优选的实施方式中，所述化合物对CK2α2(CK2a2)的IC50值与对GSK3β的IC50值的比率小于1/5，优选小于1/10，更优选小于1/20。

在另外优选的实施方式中，第7至第13方面的中所述的方法是体外或体内方法。

应该理解的是，本发明的上述每个技术特征和下面具体描述的每个技术特征(如在实施例中)可以在本发明的范围内相互结合，从而构成新的或优选的技术方案。

发明详述

经过广泛而深入的研究，发明人意外地研发出一种新颖的式I化合物，其能有效地刺激心肌细胞的增殖和再生。此外，发明人还意外地发现这些化合物可以有效地抑制某些与心肌细胞的增殖和/或再生有关的激酶如HIPK1、HIPK2、CK2α2和CIT。在此基础上完成了本发明。

如本文所用，术语“C1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链饱和脂族烃基，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等，且优选具有1至4个碳原子的烷基，更优选具有1至3个碳原子的烷基。

如本文所用，术语“C2-6烯基”是指具有2至6(优选2至4)个碳原子和碳-碳双键(C＝C)的直链或支链不饱和脂肪烃基，例如乙烯基、丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、戊烯基、己烯基等等。

如本文所用，术语“C2-6炔基”是指具有2至6(优选2至4)个碳原子和碳-碳三键的直链或支链不饱和脂肪烃基，例如乙炔基、丙炔基、正丁炔基、异丁炔基、戊炔基、己炔基等。

如本文所用，术语“C3-8环烷基”是指具有3至8个碳原子的环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

如本文所用，术语“C1-4烷氧基”是指C1-4烷基-O-，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。

如本文所用，术语“C6-10芳基”是指具有6至10个碳原子的芳香烃基，例如苯基、萘基等。如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

如本文所用，术语“二价C1-4烃基”是指直链或支链亚烷基(alkylidene)(或“亚烷基基团(alkylenegroup)”)、亚烯基(alkenylidene)或亚炔基(alkynylidene)，其中，“亚烷基(alkylidene)”或“亚烷基基团(alkylene group)”是指二价烷基，例如亚甲基(methylidene)、亚乙基(ethylidene)等；而“亚烯基(alkenylidene)”是指二价烯基。“亚烷基(alkynylidene)被取代”是指二价直链或支链C

除非特别定义，术语“环烷基”也可指代双环烃环和多环烃环，例如，双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。

除非特别定义，术语“杂环烷基”是指含一至五个选自N、O和S的杂原子的环烷基，其中氮和硫原子任选地被氧化和氮原子任选地被季铵化。所述杂环烷基可以是单环、双环或多环体系。杂环烷基的非限制性示例包括：吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑啉酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二氧六环、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可通过环碳或杂原子与分子的其他部分连接。

除非特别定义，除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和通常为芳香性的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多三环)。

除非特别定义，术语“杂芳基”是指含一至五个选自N、O和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化以及氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子与分子的其他部分连接。芳基的非限制性例子包括：苯基、萘基和联苯基；且杂芳基的非限制性例子包括：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基(cinnolinyl)、酞嗪基(phthalaziniyl)、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并噁唑基(benzooxazolyl)、苯并三唑基、苯并异恶唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚啉嗪基(indolizinyl)、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、苯并噻唑基(benzothiaxolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。用于上述记载的每个芳基和杂芳基环系统的取代基选自后文所述的可接受的取代基。

药物组合物

一般来说，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前药可与一种或多种药学上可接受的载体一起形成合适的剂型来给药。这些剂型适用于口服、直肠、局部、口腔给药和其他肠外给药(如皮下、肌肉内、静脉内给药等)。例如，适合于口服的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂和糖浆。包含在这些制剂中的本发明化合物可以是固体粉末或颗粒；水或非水液体中的溶液剂或悬浮液剂；油包水或水包油乳剂等。这类剂型可通过常规药学方法用活性化合物和一种或多种载体或赋形剂制备。上述载体应与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常规的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖等。用于液体制剂的载体包括水、盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇、聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液剂或悬浮液剂。

本发明的组合物是以符合医学实践的方式配制、定量和给药的。给药的化合物的“有效量”取决于各种因素，如要治疗的具体疾病、被治疗的个体、病因、药物靶标和给药方式等。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”包括药学上可接受的酸加成盐和碱加成盐。

如本文所用，术语“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而没有其他副作用并与无机或有机酸形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐等。这些盐可以通过本领域已知的方法制备。

“药学上可接受的碱加成盐”包括但不限于无机碱的盐，如钠、钾、钙和镁盐；还包括但不限于有机碱的盐，如铵盐、三乙胺盐、赖氨酸盐、精氨酸盐等。这些盐可以通过本领域已知的方法制备。

如本文所用，式(I)的化合物可以以一种或多种结晶形式存在。本发明的活性化合物包括各种多晶型和其混合物。

本发明中提到的“溶剂合物”是指与本发明的化合物和溶剂形成的复合物。溶剂合物可以通过在溶剂中的反应或从溶剂中沉淀或结晶形成。例如，与水形成的复合物被称为“水合物”。式(I)化合物的溶剂合物在本发明的范围内。

本发明的式(I)化合物可以包含一个或多个手性中心，并可以以不同的光学活性形式存在。当化合物含有一个手性中心时，该化合物包括对映体。本发明包括两种异构体和其混合物，如外消旋混合物。对映体可以用本领域已知的方法来拆分，如结晶和手性色谱等。当式(I)化合物含有一个以上的手性中心时，该化合物可能包括非对映体。本发明包括拆分为光学纯的特定异构体，以及非对映异构体的混合物。非对映异构体可以用本领域已知的方法来拆分，如结晶和制备色谱法。

本发明包括上述化合物的前药。前药包括已知的氨基保护基和羧基保护基，它们在生理条件下水解或通过酶反应释放以获得母体化合物。前药的具体制备方法可以参考(Saulnier,MG；Frennesson,DB；Deshpande,MS；Hansel,SB和Vysa,DMBioorg.Med.ChemLett.1994,4,1985-1990；以及Greenwald,RB；Choe,YH；Conover,CD；Shum,K.；Wu,D.；Royzen,.J.Med.Chem.2000,43,475)。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指对人类和/或动物产生功能或活性并可被人类和/或动物耐受的量。

本发明提供的药物组合物优选含有重量比1至99％的活性成分。优选地，通式I的化合物作为活性成分占总重量的65wt％至99wt％，且其余为药学上可接受的载体、稀释剂、溶液或盐溶液。

本发明提供的化合物和药物组合物可以是各种形式，如片剂、胶囊、粉剂、糖浆剂、溶液剂、悬浮液剂、气雾剂等，并可以存在于合适的固体或液体载体或稀释剂中，以及适合注射或滴注的消毒剂中。

本发明的药物组合物的各种剂型可以按照制药领域的常规制备方法来制备。其制剂配方的单位剂量包含0.05-200mg的式I化合物，优选地，制剂配方的单位剂量包含0.1mg-100mg的式I化合物。本发明的化合物可单独给药或与其他药学上可接受的化合物(如其他治疗心脏疾病的药物)联合给药。

本发明的化合物和药物组合物可以在临床上用于哺乳动物，包括人类和动物，可以通过口、鼻、皮肤、肺或胃肠道给药。最优选的是口服。最优选的每日剂量为0.01-200mg/kg体重单次剂量，或0.01-100mg/kg体重的分次剂量。无论采用哪种给药方法，个体的最佳剂量应基于具体的治疗。通常，从小剂量开始，逐渐增加，直到找到最合适的剂量。

本发明提供了式(I)化合物的制备方法。本发明的化合物可以很容易地通过各种合成操作来制备，这些操作对于本领域的技术人员来说是熟悉的。这些化合物的示例性制备可包括(但不限于)以下描述的过程。

一般来说，在制备过程中，每个反应一般在惰性溶剂中，在室温至回流温度(如0-150℃，优选0-100℃)下进行。反应时间通常为0.1小时-60小时，优选0.5-48小时。

优选地，本发明的式(I)化合物可以参照以下方案制备。在实践中，方法的步骤可以根据需要进行扩展或组合。

方案1

方案显示了可用于获得本专利中合成的目标的一条路线。中间体I-1可以用Rou等人,N.；Bergman,J.Synthesis of the marine alkaloid leucettamine B.Tetrahedron1999,55,14729–14738和J.Med.Chem.2011,54,4172–4186中描述的路线制备。式I-1的化合物可市售获得，或通过本领域技术人员已知的方法根据文献报道的条件(J.Med.Chem2015,58(17),6889；WO2014188193,2014)制备。用于制造目标的试剂醛和胺也是可市售获得或者可通过本领域技术人员已知的方法制备的。

化合物I-1可以通过以下反应制备。

在含醇或非质子溶剂中使用催化碱如Et3N、DIPEA、哌啶等进行的I-1与醛的反应得到中间体I-2。然后，该中间体可以在氧化剂如TBHP和胺(无论是伯胺还是仲胺)的存在下进行反应，得到所需的目标I-4。所提到的详细条件已在J.Med,Chem.2011,54,4172-486中描述。在伯胺(R2＝H)的情况下，产物I-4可在碱如NaH、K

I-2也可以与R3X烷基化，其中R3为烷基，X为卤化物或O-砜，从而得到I-3。然后其可在碱(烷基胺或无机碱)的存在下与伯胺或仲胺反应，得到I-4。其可进一步与R6X反应，得到烷基化目标I，其中R

本发明中公开的式(I)化合物、其制备方法、药物组合物和治疗方案可由本领域的技术人员通过参考本发明公开的工艺参数的适当改进来实现。应特别指出的是，所有这些改变和变化对技术人员来说是显而易见的，而且它们被认为包括在本发明中。本发明的产品、方法和用途的优选实施方式已经描述，相关人员显然可以在不脱离本发明的内容、精神和范围的情况下，对本发明的方法和用途进行改变或更改和组合，以实现和应用本技术。

与现有技术相比，本发明的主要优点包括：

(1)本发明的化合物对CLK1(如CLK1A)和DYRK1显示出高抑制活性。

(2)几个具有肌细胞生长活性的关键化合物也显示出对HIPK1、HIPK2、CK2和/或CIT激酶的抑制活性。

(3)本发明的化合物展现出对GSKb的选择性。

(4)最重要的是，本发明的化合物表现出优异的肌细胞增殖活，因此对治疗与心肌细胞有关的心脏疾病很有用。

下面将参照具体实例进一步说明本发明。应该理解，这些例子只是为了说明本发明，而不是限制本发明的范围。以下实施例中所描述的无特定条件的实验方法一般在常规条件下进行，或根据制造商的说明进行。除非另有说明，份数和百分比均按重量计算。

除非另有定义，本文使用的术语与本领域技术人员熟悉的术语相同。此外，任何与本发明中记载的方法或材料相似或相当的方法或材料都可以用于本发明中。

试剂和仪器

所有的反应都在干燥的氮气环境下进行，除非另有规定。反应用TLC板监测，其用紫外光或适当的染色剂来可视化。快速色谱是指硅胶(40-60μm)柱色谱，采用玻璃柱。另外，使用ISCO、Biotage SP1或Biotage Isolera系统进行自动色谱，在220或254nm处进行紫外检测，并采用Biotage正相或反相硅胶盒。进一步的细节可以在相关的实验过程中找到。

用于LCMS的体系如下：Agilent 6120(二元泵)，Waters CORTECS C18柱，2.7μm，4.6×30mm，45℃，1μL进样量，1.8mL/min，用根据以下时间的梯度使用乙腈的0.05％甲酸水溶液：

用于UPLC(无质谱)的体系如下：Waters H-Class(四元泵),Waters ACQUITY BEHC18 1.7μm,2.1×50mm,0.5mL/min,45℃；梯度5-95％乙腈的0.05％三氟乙酸水溶液，经2min，然后保持95％乙腈0.5分钟，重新平衡到5％的乙腈2.7分钟，总共3.5分钟。NMR谱是用布鲁克(Bruker)光谱仪在400MHz(1H)，376MHz(19F)或100MHz(13C)下测量的。样品所用的溶剂在每个化合物的实验程序中都有说明。

制备型高效液相色谱法(制备型HPLC)：Waters PHW007，XBridge C18柱，4.6x150mm，3.5um。

使用ISCO Combiflash-Rf75或Rf200自动洗脱柱仪器，Agela 4g、12g、20g、40g、80g、120g的一次性硅胶柱。

本发明的已知起始材料通过本领域已知的方法合成，或从毕得化学有限公司(Bide Chemical ltd.)、Bridge、Combi Blocks、药明康德(Wuxi Lab Networks)、AcrosOrganics、奥德里奇化学公司(Aldrich Chemical Company)、韶远科技(上海)有限公司(Accela ChemBio Inc)和达瑞化学品公司(Darui Chemical Company)等购买。

所有的实施例都是在氮气或氩气环境下进行的，如果没有特别说明，溶液指的是水溶液。

在这些实施例中，反应过程通过薄层色谱法(TLC)进行监控，化合物通过柱色谱法进行纯化。柱色谱或TLC中使用的洗脱剂选自二氯甲烷和甲醇、正己烷和乙酸乙酯、石油醚和乙酸乙酯，或丙酮等体系，其中溶剂的体积比可根据化合物的不同极性来调节。

DMF是指二甲基甲酰胺，DMSO是指二甲基亚砜，THF是指四氢呋喃，DIEA是指N,N-二异丙基乙胺，EA是指乙酸乙酯，PE是指石油醚。BINAP是指(2R,3S)-2,2’-双二苯基膦-1,1’-联萘，NBS是指N-溴代琥珀酰亚胺，NCS是指N-氯代琥珀酰亚胺，Pd

如本文所用，室温指的是约25℃。

实施例1：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

向苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲醇(10.0g,65.7mmol)的DCM(150mL)溶液加入活化MnO

向2-硫代咪唑烷-4-酮(1.9g,17mmol)和苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲醛(3.0g,20.4mmol)于甲苯(30mL)中的混合物中加入哌啶(71mg,0.85mmol),并将混合物在120℃下搅拌19h。浓缩后，将残余物从DCM(30mL)中重结晶，得到(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-硫代咪唑烷-4-酮(3.8g,90％)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步骤。LRMS(M+H

向(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-硫代咪唑烷-4-酮(600mg,2.4mmol)和苯胺(2235mg,24mmol)于甲醇(8mL)中的混合物中加入TBHP溶液(70％于水中,649mg,7.2mmol)，并将混合物在室温下搅拌17h。将反应混合物浓缩以移除多余的苯胺并将残余物从MeOH(20mL)中重结晶，以得到(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(65.0mg,35％)，为黄色固体。LRMS(M+H

实施例2：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-3-苄基-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

向(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(46mg,0.15mmol)、苯甲醇(21mg,0.195mmol)和三苯基膦(59mg,0.225mmol)于THF(1mL)中的混合物中在室温下加入DIAD(46mg,0.225mmol)。在N

LRMS(M+H

实施例3：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-3-甲基-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

在N

向3-甲基-2-硫代咪唑烷-4-酮(200mg,1.538mmol)和3,4-二甲氧基苯甲醛(692mg,4.615mmol)于甲苯(5mL)中的悬浮液中加入哌啶(7mg,0.076mmol)并将反应在微波照射下于120℃下搅拌1.5h。将混合物过滤并将滤饼用Et

向(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-3-甲基-2-硫代咪唑烷-4-酮(628mg,2.4mmol)和N-甲基苯胺(2568mg,24mmol)于甲醇(8mL)中的混合物中加入TBHP溶液(70％水中,649mg,7.2mmol)。将混合物在室温下搅拌17h。将反应混合物浓缩以除去多余的苯胺并将残余物从MeOH(20mL)中重结晶，以得到(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-3-甲基-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(53.0mg)。LRMS(M+H

实施例4：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(乙基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(乙基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(3.9mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例5：(Z)-N-(4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-N-苯乙酰胺

在0℃下，向(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(30mg,0.1mmol,1.0当量)的DCM溶液中加入乙酰氯(11.7mg,0.15mmol,1.5当量)和TEA(30.3mg,0.3mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌17h。浓缩后，将残余物用水稀释，并用DCM萃取(10mL×3)。合并的有机层用Na

实施例6：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

向2-硫代咪唑烷-4-酮(1.9g,17mmol,1.0eq.)和苯并[d]三唑-6-甲醛(3.0g,20.4mmol,1.2eq.)于甲苯(30mL)中的混合物中加入哌啶(71mg,0.85mmol,0.05eq.)，并将反应混合物在120℃下搅拌19h。将混合物浓缩并将残余物从DCM(30mL)中重结晶，得到(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-硫代咪唑烷-4-酮(3.8g,90％)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步骤。LRMS(M+H

在室温下，向(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-硫代咪唑烷-4-酮(496mg,2.0mmol,1.0eq.)于乙腈(6mL)中的混合物中加入K

在微波照射下,在160℃下,将(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(乙硫基)-1,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(150mg,0.54mmol,1.0eq.)和苯胺(1.0g)的混合物搅拌2h。将反应混合物用DCM稀释，然后将沉淀过滤并通过过滤收集，得到(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(54mg,31％)，为黄色固体。LRMS(M+H

实施例7：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(30mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例8：(Z)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.4mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例9：(Z)-5-((5-氧代-2-(苯基氨基)-1,5-二氢-4H-咪唑-4-亚基)甲基)吡啶-2(1H)-酮

(Z)-5-((5-氧代-2-(苯基氨基)-1,5-二氢-4H-咪唑-4-亚基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(5.87mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例10：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(35mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例11：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(20mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例12：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(15mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例13：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((2-羟乙基)(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((2-羟乙基)(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(19.30mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例14：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(6.8mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例15：(Z)-2-(苯基氨基)-5-(噻唑-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯基氨基)-5-(噻唑-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(6.6mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例16：(Z)-2-(苯基氨基)-5-(喹喔啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯基氨基)-5-(喹喔啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(12.8mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例17：(Z)-5-((2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(19.2mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例18：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(甲基(吡啶-3-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(甲基(吡啶-3-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.0mg)以实施例6所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例19：(Z)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(14.2mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例20：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(甲基(2-吗啉基乙基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(甲基(2-吗啉基乙基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(4.58mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例21：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((2-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-((2-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.83mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例22：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(10.41mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例23：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苄基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苄基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(50.57mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例24：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-氯苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

将(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(乙硫基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(150mg,0.52mmol)和1-(4-氯苯基)-N-甲基甲胺(121mg,0.78mmol)的AcOH(8mL)溶液在120℃下搅拌4h。完成后，将混合物浓缩以除去AcOH并将残余物通过制备型HPLC(EA/PE＝1/2,v/v)纯化，得到(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-氯苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮，为黄色固体(79.8mg)。LRMS(M+H

实施例25：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(26.9mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例26：(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(5.31mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例27：(Z)-3-((4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)(苯基)氨基)丙酸

(Z)-3-((4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)(苯基)氨基)丙酸(7.17mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例28：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苄基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苄基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(39.7mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例29：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2-吗啉基乙基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2-吗啉基乙基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(23.6mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例30：(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(甲基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(14.55mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例31：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苄基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苄基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(27.9mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例32：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(2-吗啉基乙基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(7.7mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例33：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.4mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例34：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((环丙基甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(23.8mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例35：(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(20.74mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例36：(Z)-3-((4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)(苯基)氨基)丙酰胺

(Z)-3-((4-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)(苯基)氨基)丙酰胺(4.38mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例37：(Z)-2-((4-氨基苯基)(甲基)氨基)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((4-氨基苯基)(甲基)氨基)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(2.64mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例38：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(69.3mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例39：(Z)-2-((环丙基甲基)(苯基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((环丙基甲基)(苯基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(13.7mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例40：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((4-氯苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((环丙基甲基)(苯基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.2mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例41：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(17.16mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例42：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3-苄基-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3-苄基-2-(苄基(苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(2.22mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例43：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(4-硝基苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(4-硝基苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(14.0mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例44：(Z)-2-((4-氨基苯基)(甲基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

向(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(4-硝基苯基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(150mg,0.39mmol)的AcOH(8mL)和MeOH(8mL)溶液中加入Fe粉(214mg,3.9mmol)，并将混合物在50℃下搅拌16h。完成后，将混合物过滤，滤液浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化，得到(Z)-2-((4-氨基苯基)(甲基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.4mg)，为黄色固体。LRMS(M+H

实施例45：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(异丙基氨基)-3-甲基-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(异丙基氨基)-3-甲基-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(11.98mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例46：(Z)-5-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

将6-溴-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑(600mg,2.8mmol,1.0eq.)和John-Phos(62mg,0.28mmol,0.1eq.)、Pd(OAc)

(Z)-5-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(81.9mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例47：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(156.7mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例48：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(74.7mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例49：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-2-(异丙基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-2-(异丙基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(18.11mg)以实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例50：(Z)-2-(金刚烷-1-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(金刚烷-1-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(10.2mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例51：(Z)-5-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.3mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例52：(Z)-5-(苯并呋喃-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并呋喃-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(30.8mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例53：(Z)-2-(苯基氨基)-5-(喹啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯基氨基)-5-(喹啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.4mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例54：(Z)-5-((1H-吲唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.6mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例55：(Z)-5-((1H-吲唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(32.5mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例56：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

在0℃下，向4,5-二氯苯-1,2-二胺((4.8g,25.7mmol,1eq)的乙酸(45mL)和水(15mL)的溶液中加入HCl(2mL)，然后加入亚硝酸钠(2.8g,40.5mmol,1.5eq)的水(15mL)溶液。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后用水稀释。过滤所得混合物，用水洗涤并真空干燥，将粗产物溶解于热乙醇中。过滤掉固体，然后将水加入至乙醇中，过滤沉淀物，用水洗涤并真空干燥，得到6-溴-1H-苯并[d][1,2,3]三唑(4.1g,81％)，为白色固体。LRMS(M+H

将6-溴-1H-苯并[d][1,2,3]三唑(600mg,3.1mmol,1.0eq.)、John-Phos(65mg,0.31mmol,0.1eq.)、Pd(OAc)

(Z)-5-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.9mg)按照实施例1所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例57：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-5-基亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(152.7mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例58：(Z)-5-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(30.9mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例59：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并呋喃-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并呋喃-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(46.4mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例60：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(喹啉-7-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(喹啉-7-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(25.9mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例61：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(56.1mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例63：(Z)-5-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.1mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例65：(Z)-5-((4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-7-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(16.0mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例69：(Z)-2-((1H-吲哚-5-基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((1H-吲哚-5-基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.5mg)以实施例24中所述的步骤制备。LRMS(M+H

实施例70：(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(64.6mg)以实施例24中所述的步骤制备。LRMS(M+H

实施例71：

(Z)-5-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(TJU-B274)

(Z)-5-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H+)m/z计算值318.1，实测值318.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(s,0.5H),8.37(s,1H),8.13(m,1H),7.89(d,J＝7.3Hz,1H),7.57(dd,J＝31.6,7.6Hz,2H),7.37(dd,J＝21.0,13.1Hz,3H),7.06(d,J＝7.3Hz,1H),6.63(s,1H),3.82(m,2H).

实施例72：

(Z)-5-(苯并[b]噻吩-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(TJU-277)

(Z)-5-(苯并[b]噻吩-5-基亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H+)m/z计算值320.1，实测值320.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.87(s,1H),8.62(s,1H),8.17(d,J＝8.2Hz,1H),8.04(d,J＝8.5Hz,1H),7.83–7.79(m,3H),7.49-7.41(m,3H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),6.65(s,1H).

实施例73：

(Z)-5-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(TJU-278)

(Z)-5-((1H-吲哚-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例74：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(40.0mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例75：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.4mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例76：(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-6-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-苯并[d]咪唑-6-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(86.20mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例77：(Z)-5-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(39.1mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例78：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(81.7mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例79：5-((1-甲基-1H-吲唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

在N

5-((1-甲基-1H-吲唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.50mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例80：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((1-甲基-1H-吲唑-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((1-甲基-1H-吲唑-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(42.40mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例81：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(4.6mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例82：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(喹喔啉-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(喹喔啉-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(40.1mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例83：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(33.1mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例84：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-5-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(17.6mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例85：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-5-(喹啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-5-(喹啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(55.8mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例86：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(甲基(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(7.2mg)以实施例24所述相同的步骤制备。LRMS(M+H

实施例87：(Z)-5-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲哚-5-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(甲基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(12.8mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例88：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3-甲基-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3-甲基-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(62.4mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例89：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(2-甲氧基乙基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(2-甲氧基乙基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.5mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例90：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(11.2mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例91：(Z)-5-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-6-基)亚甲基)-2-(苯基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮的制备

向(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(75.0mg，0.2mmol,1eq.)于DCM(5mL)中的混合物中加入TEA(60.0mg,0.6mmol,3eq.)和乙酰氯(31.0mg,0.4mmol,2eq.)。将混合物在室温下搅拌18h。将混合物浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化，得到(Z)-N-(苯并[d]噻唑-6-基)-N-(4-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-5-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2基)乙酰胺，为黄色固体(23.5mg,29％)。LRMS(M+H

实施例92：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(噻唑-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(噻唑-5-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(11.0mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例93：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(23.1mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例94：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(喹喔啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(喹喔啉-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.2mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例95：(Z)-5-((1H-吲唑-6-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-5-((1H-吲唑-6-基)亚甲基)-2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.7mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例96：(Z)-5-(苯并[b]噻吩-5-基亚甲基)-2-硫代咪唑烷-4-酮

(Z)-5-(苯并[b]噻吩-5-基亚甲基)-2-硫代咪唑烷-4-酮(2.0mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例97：(Z)-2-((1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(35.7mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例98：(Z)-2-((4-氨基苯基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-((4-氨基苯基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(14.4mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例99：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(苄基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(苄基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(21.4mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例100：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2-(异丙基氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

在N

将2-溴-6-硝基苯并[d]噻唑(77.0mg,0.3mmol)和丙-2-胺(177.0mg,3.0mmol)于THF(5mL)中的混合物在40℃下搅拌16h。将混合物浓缩，并将残余物通过制备型TLC(PE/EA＝3/1,v/v)纯化，得到N-异丙基-6-硝基苯并[d]噻唑-2-胺(64.0mg,90％)，为黄色固体。LRMS(M+H

向N-异丙基-6-硝基苯并[d]噻唑-2-胺(64.0mg,0.27mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入Pd/C(19.0mg,30％)。将混合物室温下搅拌16h。完成后，将DCM(50mL)加入到反应混合物中并将混合物在室温搅拌20分钟。将混合物用DCM/MeOH(12/1,50mL)过滤。浓缩有机相，得到N

将(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(乙硫基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(62.0mg,0.21mmol)和N

实施例101：(Z)-2-(苯并[b]噻吩-5-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[b]噻吩-5-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(103.0mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例102：2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(8.1mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

实施例103：(Z)-2-氨基-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-氨基-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.3mg)如实施例1所述制备。LRMS(M+H

实施例104：(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-((2-(苯基氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氨基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

将2-溴-6-硝基苯并[d]噻唑(387.0mg,1.5mmol)和苯胺(210.0mg,2.25mmol)、Ruphos Pd G2(117.0mg,0.15mmol)和Cs

向6-硝基-N-苯基苯并[d]噻唑-2-胺(120.0mg,0.44mmol)的MeOH/DCM(12/4mL)溶液中加入Pd/C(36.0mg,30％)。将混合物室温下搅拌16h。完成后，将DCM(50mL)加入到反应混合物中并将混合物在室温搅拌20分钟。将混合物用DCM/MeOH(12/1,50mL)过滤。浓缩有机相，得到N

将(Z)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-2-(乙硫基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(75.0mg,0.26mmol)和N

实施例105：(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(环丙基甲基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮

(Z)-2-(苯并[d]噻唑-6-基(环丙基甲基)氨基)-5-(苯并[d]噻唑-6-基亚甲基)-3,5-二氢-4H-咪唑-4-酮(9.1mg)如实施例24所述制备。LRMS(M+H

测试例1

(1)检测方案

1.新生大鼠心室肌细胞(NRVM)的分离和培养

将新生大鼠的心室与心房分离，切成小块(约2×2mm

2.EdU测定

2.1.固定：去除培养基，用4ul的PFA于200ul中(以覆盖为准)固定细胞15分钟，用500ul的PBS清洗细胞两次，每次5分钟。

2.2.破碎膜：在每个孔中加入200ul 0.3％Triton-X 100(在PBS中稀释)，在室温下孵育10-15min(时间不宜过长)，然后用500ul的PBS清洗细胞两次，每次5分钟。

2.3.阻断：每孔加入200ul的10％正常山羊血清(用0.1％PBST稀释)，室温下孵育1h，用500ul的0.1％PBST洗两次，每次5分钟。

2.4.一抗：将一抗(abcam，ab8295)以1:200的比例稀释到阻断液中，每孔加入100ul，室温下孵育1h(可能略长于2-3小时)，用500ul的0.1％PBST洗涤细胞两次，每次5分钟。

2.5.二抗：将荧光标记的二抗(abcam，ab150117)按1：200的比例稀释到阻断液中，每孔加入100ul，室温下孵育1h(时间不宜过长)，用0.1％PBST洗细胞两次，每次5min，注意整个过程。避开光线。

2.6.Edu染色(英杰C10338)

2.6.1根据表3准备

表3.

2.6.2将0.1mL的

2.6.3在室温下避光孵育30分钟。

2.6.4移除反应混合物，然后用0.1％PBST清洗细胞两次，每次5分钟。

2.7.DAPI染色：将DAPI染色剂按1:1000的比例稀释到PBS中，每孔100ul，室温下孵育30分钟，用PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。

3.数据分析

我们使用分子器件(Molecular Devices)的Image Xpress Micro Confocal进行高通量拍照和数据分析。

缓冲溶液

1.PBS缓冲液：以500ml的体积为例，25ml的PBS缓冲液(20X)(Sangon生物技术，B548117-0500)+475ml ddH

2.0.1％PBST：以500ml为例，25ml的PBS缓冲液(20X)(Sangon生物技术,B548117-0500)+475ml ddH

用于心肌细胞增殖试验的参考文献：

1.Chen,J.等人mir-17-92簇需要并足以诱导产后和成人心脏的心肌细胞增殖(mir-17-92cluster is required for and sufficient to induce cardiomyocyteproliferation in postnatal and adult hearts).Circ Res 112,1557-1566,doi:10.1161/CIRCRESAHA.112.300658(2013).

2 Andersson,O.等人腺苷信号能促进体内胰岛β细胞的再生(Adenosinesignaling promotes regeneration of pancreatic beta cells in vivo).Cell Metab15,885-894,doi:10.1016/j.cmet.2012.04.018(2012).

3 Dogra,D.等人激活素2型受体配体在发育和修复过程中对心肌细胞增殖的相反影响(Opposite effects of Activin type 2receptor ligands on cardiomyocyteproliferation during development and repair).Nat Commun 8,1902,doi:10.1038/s41467-017-01950-1(2017).

4 Hirose,K.等人获得内温过程中激素控制心脏再生能力的证据(Evidence forhormonal control of heart regenerative capacity during endothermyacquisition).Science 364,184-188,doi:10.1126/science.aar2038(2019).

5 Lin,Z.等人Pi3kcb连接Hippo-YAP和PI3K-AKT信号通路，促进心肌细胞的增殖和生存(Pi3kcb links Hippo-YAP and PI3K-AKT signaling pathways to promotecardiomyocyte proliferation and survival).Circ Res 116,35-45,doi:10.1161/CIRCRESAHA.115.304457(2015).

6 Wang,J.,Cao,J.,Dickson,A.L.&Poss,K.D.心外膜再生受心脏流出道和刺猬信号的引导(Epicardial regeneration is guided by cardiac outflow tract andHedgehog signalling).Nature 522,226-230,doi:10.1038/nature14325(2015).

7 Salic,A.&Mitchison,T.J.一种快速、灵敏检测体内DNA合成的化学方法(Achemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo).Proc Natl Acad Sci USA 105,2415-2420,doi:10.1073/pnas.0712168105(2008).

8 Wang,Q.等人铜(I)催化的叠氮-炔[3+2]环化加成的生物结合(Bioconjugationby copper(I)-catalyzed azide-alkyne[3+2]cycloaddition).J Am Chem Soc 125,3192-3193,doi:10.1021/ja021381e(2003).

(2)结果

测试例1的结果如下表1中所示。

表1平均肌细胞增殖分析数据

注意：相对于没有添加化合物的空白肌细胞***＝>50％,**＝10％-50％,*＝<10％的增长。

测试例2：激酶分析方法

在以下实验中评估了本发明中的化合物对人类激酶活性的抑制作用。

1.GSK3β酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组的全长人GSK3β(在Sf9昆虫细胞中表达，N端有His标签)购自SignalChem(Cat#G09-10H)。GSK3底物肽(序列：YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQ(pS)EDEEE)购自SignalChem(Cat#G50-58)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和GSK3底物肽开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将GSK3β(4nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为13μM和25μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育60分钟。

之后加入ADP-Glo

2.DYRK1A酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组的全长DYRK1A(在大肠杆菌(E.Coli)细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#D09-10G)。DYRK底物肽(DYRK肽(DYRKtide)，序列：RRRFRPASPLRGPPK)购自SignalChem(Cat#D96-58)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和DYRK肽开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将DYRK1A(3nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为20μM和60μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育60分钟。

之后加入ADP-Glo

3.DYRK2酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组的全长人DYRK2(在大肠杆菌(E.Coli)细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#D10-10G)。DYRK肽(DYRKtide)肽(序列：RRRFRPASPLRGPPK)购自SignalChem(Cat#D96-58)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和DYRK肽开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将DYRK2(6nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为25μM和10μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育60分钟。

之后加入ADP-Glo

4.CLK1酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组人CLK1(129-端)(在Sf9昆虫细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#C57-11G)。重组全长人MBP(在大肠杆菌(E.Coli)细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#M42-54G)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和MBP蛋白开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将CLK1(16nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为2μM和10μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育60分钟。

之后加入ADP-Glo

5.CIT酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组人CIT(1-499)(在Sf9昆虫细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#C52-11G)。重组全长人MBP(在大肠杆菌(E.Coli)细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#M42-54G)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和MBP蛋白开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将CIT(20nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/mlBSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为0.05mg/ml和5μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育90分钟。

之后加入ADP-Glo

6.HIPK1酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组人HIPK1(156-555)(在Sf9昆虫细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#H03-11G)。重组全长人MBP(在大肠杆菌(E.Coli)细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#M42-54G)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和MBP蛋白开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将HIPK1(4nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为0.05mg/ml和5μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育90分钟。

之后加入ADP-Glo

7.HIPK2酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组人HIPK2(1-640)(在Sf9昆虫细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#H04-11BG)。重组全长人MBP(在大肠杆菌(E.Coli)细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#M42-54G)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和MBP蛋白开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将HIPK2(1nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为0.05mg/ml和5μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育90分钟。

之后加入ADP-Glo

8.CK2a2(CSNK2a2)酶的检测

根据制造商的方案，使用市售的ADP-Glo

重组人CK2a2(CSNK2a2)(全长)(在Sf9昆虫细胞中表达，N端有GST标签)购自SignalChem(Cat#C71-10G)。CK2底物(序列：RRRADDSDDDDD)购自SignalChem(Cat#C08-58)。该检测(以384孔板形式运行)是使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶活性的一种通用方法。基本的检测过程包括两个步骤：(1)酶法步骤：抑制剂与激酶一起孵育，然后加入ATP(包含在ADP-Glo激酶检测试剂盒中)和MBP蛋白开始酶促反应；(2)检测步骤：激酶反应后，首先加入ADP-Glo

简而言之，将CK2a2(CSNK2a2)(7nM)的酶缓冲溶液(40mM Tris,pH 7.5,20mMMgCl2,0.1mg/ml BSA,50μM DTT)与各种浓度的抑制剂(溶于100％DMSO中)混合。将这些溶液在25℃下孵育30分钟，随后加入底物肽和ATP的混合物，最终肽和ATP的浓度分别为0.04mg/ml和15μM。将酶-底物-ATP-化合物的最终反应混合物在25℃下孵育90分钟。

之后加入ADP-Glo

9.结果

测试例2的结果如下表2中所示。

表2：化合物的激酶活性

数据定义：++++:>10000nM,+++:1000-10000nM,++:100-1000nM,+:<100nM；-:NA

测试例3：体内方案：

1.心肌梗死

在腔内将6周大的C57/BL6小鼠用1％的异氟烷进行麻醉。将小鼠以左侧仰卧位放置于加热垫(37℃)上，并通过左侧第四肋间进行胸腔切口暴露心脏。然后打开心包，用7-0缝线永久结扎左冠状动脉。当左心室变得苍白时，就认为结扎成功。从术后一周开始，每隔一天通过尾静脉注射实施例1-105中制备的化合物或对照溶剂。然后在注射6周后对小鼠进行安乐死，并对其心脏进行组织学检查。

2.损伤区域划分

用于图像表征的心脏组织区域被描述为整个心脏、梗死区(左心室游离壁)、边界区(左心室前壁和后壁)或远端区(室间隔)。

3.组织学

对于组织学研究，在指定的时间点收集心脏。用冷的PBS从心尖逆行灌注除去血液后，在4℃下，用4％的多聚甲醛(PFA，Sigma)固定整个心脏过夜。接着，将心脏在浓度不断上升的乙醇中脱水，并包埋在石蜡中。根据先前公布的方法进行苏木精和伊红染色以及马松三色染色[Development 140,4683-4690(2013)]。

心脏切片厚度为8μm，以每玻片5个切片来制作载玻片。切片从结扎部位开始，到心尖结束(大约50张载玻片)。载玻片用马松三色染色法来确定纤维化的区域。通过检查从心尖到结扎部位的连续切片，用Image J软件根据马松三色染色计算纤维化面积占总面积的平均百分比，来量化疤痕的大小。

4.结果

体内试验表明，实施例1-105中制备的化合物可以促进心肌梗死模型中心肌细胞的增殖，减少梗死尺寸。

本申请中提到的所有文献都通过引用而纳入本文，就像每一个文献都通过引用而单独纳入。此外，应该理解的是，在阅读了上述教导后，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改变和修改。这些等价形式也落入所附权利要求书所定义的范围内。