一种蝴蝶兰的化学诱变方法和蝴蝶兰新品种的培育方法

摘要

本发明属于花卉育种技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰的化学诱变方法和蝴蝶兰新品种的培育方法。本发明通过采用55～65μg/mL的平阳霉素同时对蝴蝶兰幼苗的根部和茎间进行诱变，可以对蝴蝶兰进行稳定诱变；在此基础上，结合在1/2MS培养基中培养，可以得到性质稳定的蝴蝶兰新品种，得到的新品种花瓣边缘伴有白边，具有较好的观赏性，为蝴蝶兰种质资源的后续研究提供研究基础。

说明书

技术领域

本发明属于花卉育种技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰的化学诱变方法和蝴蝶兰新品种的培育方法。

背景技术

蝴蝶兰属兰科、蝴蝶兰属，是一种多年生附生植物，花形如彩蝶飞舞，色彩艳丽，是国际流行的名贵花卉，具有很高的观赏价值和经济价值。同时，蝴蝶兰是世界上栽培最广泛、最普及的洋兰品种之一，被誉为“洋兰皇后”。花卉在长期无性繁殖后会造成种性退化，蝴蝶兰也不例外，因而，改良和创新其种质资源具有重要意义。

目前，我国未曾对蝴蝶兰种质资源开展系统研究，仍处于常规育种阶段，人工诱导突变体是获得植物新种质的重要途径之一，已在多种植物中进行应用，但是目前人工诱导突变体来获得蝴蝶兰种质资源的研究很少，仅涉及如利用

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝴蝶兰的化学诱变方法和蝴蝶兰新品种的培育方法，采用本发明提供的诱变方法可以得到性质稳定的蝴蝶兰新品种。

本发明提供了一种蝴蝶兰的化学诱变方法，包括如下步骤：

将蝴蝶兰幼苗在MS培养液中培养，并采用55～65μg/mL的平阳霉素溶液对幼苗茎尖进行包裹处理，得到诱变蝴蝶兰；

所述MS培养液的组成包括1/2MS液体培养基和平阳霉素，所述MS培养液中的平阳霉素的浓度为55～65μg/mL。

优选的，所述包裹处理的时间为2～4天，每天早晨、中午和晚上各一次，每次处理5～10min。

优选的，所述幼苗茎尖为幼苗茎尖生长点。

优选的，所述蝴蝶兰幼苗为子叶展平真叶显露时的幼苗。

优选的，所述蝴蝶兰幼苗的培育方法包括：将蝴蝶兰种子撒播在诱导萌发培养基上，培养，得到所述蝴蝶兰幼苗；

所述诱导萌发培养基以1/2MS为基本培养基，还包括150g/L马铃薯汁。

优选的，所述蝴蝶兰种子为从消毒灭菌的蝴蝶兰果荚中获得的种子。

优选的，所述消毒灭菌的蝴蝶兰果荚的获得方法包括：将成熟蝴蝶兰果荚依次经过水洗、消毒、再水洗和灭菌，得到所述消毒灭菌的蝴蝶兰果荚；

所述消毒用溶剂为体积分数为60～80％的酒精溶液，所述灭菌用溶剂为质量浓度为0.1～0.3％的升汞。

优选的，所述消毒的时间为1min，所述灭菌的时间为5～10min。

本发明还提供了一种蝴蝶兰新品种的培育方法，将上述技术方案得到的诱变蝴蝶兰于1/2MS液体培养基中培养30～40天，得到所述蝴蝶兰新品种。

优选的，所述蝴蝶兰新品种的表型包括花瓣边缘伴有白边。

有益效果：

本发明提供了一种蝴蝶兰的化学诱变方法，本发明通过采用55～65μg/mL的平阳霉素同时对蝴蝶兰幼苗的根部和茎间进行诱变，可以对蝴蝶兰进行稳定诱变；在此基础上，结合在1/2MS培养基中培养，可以得到性质稳定的蝴蝶兰新品种，得到的新品种花瓣边缘伴有白边，具有较好的观赏性，为蝴蝶兰种质资源的后续研究提供研究基础。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为实施例2中诱变前后的蝴蝶兰表型，左图为诱变后的变异株，右图为诱变前的原始株；

图2为实施例2诱变前蝴蝶兰原始株生长后期表型图；

图3为实施例2诱变后蝴蝶兰变异株生长后期表型图；

图4为实施例3诱变前蝴蝶兰原始株生长后期表型图；

图5为实施例3诱变后蝴蝶兰变异株生长后期表型图。

具体实施方式

本发明提供了一种蝴蝶兰的化学诱变方法，包括如下步骤：

将蝴蝶兰幼苗在MS培养液中培养，并采用55～65μg/mL的平阳霉素溶液对幼苗茎尖进行包裹处理，得到诱变蝴蝶兰；所述MS培养液的组成包括1/2MS液体培养基和平阳霉素，所述MS培养液中的平阳霉素的浓度为55～65μg/mL。

本发明将蝴蝶兰幼苗在MS培养液中培养前，优选还包括培育蝴蝶兰幼苗，所述蝴蝶兰幼苗的培育方法优选包括将蝴蝶兰种子撒播在诱导萌发培养基上，培养，得到所述蝴蝶兰幼苗。

本发明优选将成熟蝴蝶兰果荚依次经过水洗、消毒、再水洗和灭菌，得到所述消毒灭菌的蝴蝶兰果荚。本发明对所述水洗没有特殊要求，按照本领域常规操作将成熟蝴蝶兰果荚冲洗干净即可。本发明优选采用体积百分含量为60～80％的酒精对所述冲洗干净的成熟蝴蝶兰果荚消毒，更优选为体积百分含量为75％的酒精；所述消毒的时间为1min。完成所述消毒后，本发明优选对所述消毒后的蝴蝶兰果荚进行再水洗，所述再水洗的用水优选为灭菌水，所述再水洗的次数优选为1次。

完成所述再水洗后，本发明优选对再水洗后的蝴蝶兰果荚灭菌，所述灭菌的试剂优选为质量浓度为0.1～0.3％的升汞，更优选为质量浓度为0.1％的升汞；所述灭菌的时间优选为5～10min，更优选为8min。本发明所述灭菌的操作优选在无菌超净台上完成。完成所述灭菌后，本发明优选还包括采用灭菌水对灭菌后的蝴蝶兰果荚冲洗，所述冲洗的次数优选为2～5次，更优选为3次。

得到所述消毒灭菌的蝴蝶兰果荚后，本发明优选从所述消毒灭菌的蝴蝶兰果荚中获得蝴蝶兰种子。本发明获得所述蝴蝶兰种子的方式优选包括采用解剖刀纵向切开果荚，将粉状种子轻轻夹出。

得到所述蝴蝶兰种子后，本发明优选将蝴蝶兰种子撒播在诱导萌发培养基上，培养，得到所述蝴蝶兰幼苗。本发明所述诱导萌发培养基优选以1/2MS为基本培养基，还包括150g/L马铃薯汁。本发明对撒播在诱导萌发培养基上的蝴蝶兰种子的量没有特殊限定，按照本领域常规撒播量即可。本发明对所述培养的具体条件没有特殊限定，采用本领域常规培养方式使幼苗出瓶即可。

得到所述蝴蝶兰幼苗后，本发明将蝴蝶兰幼苗在MS培养液中培养，并采用55～65μg/mL的平阳霉素溶液对幼苗茎尖进行包裹处理，得到诱变蝴蝶兰。本发明所述蝴蝶兰幼苗优选为子叶展平真叶显露时的幼苗。本发明所述MS培养液的组成优选包括1/2MS液体培养基和平阳霉素，所述MS培养液中平阳霉素的浓度优选为55～65μg/mL，更优选为60μg/mL。本发明用于所述包裹处理的平阳霉素溶液的浓度优选为55～65μg/mL，更优选为60μg/mL。本发明所述平阳霉素溶液的溶剂优选为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的pH优选为7。本发明所述包裹处理优选包括将浸泡过所述平阳霉素溶液的棉球放在幼苗茎尖上，所述幼苗茎尖优选为幼苗茎尖生长点。本发明所述包裹处理的时间优选为2～4天，更优选为4天；本发明优选每天早晨、中午和晚上各进行所述包裹处理一次，每一次的处理时间优选为5～10min，更优选为8min。本发明所述包裹处理优选为连续处理，即按照上述限定连续处理4天。本发明通过将蝴蝶兰幼苗在含有平阳霉素的1/2MS培养基中培养对蝴蝶兰幼苗根尖进行诱导，同时采用平阳霉素溶液对蝴蝶兰幼苗茎尖进行包裹处理，二者共同进行，达到诱变蝴蝶兰的技术效果。

本发明还提供了一种蝴蝶兰新品种的培育方法，将上述技术方案得到的诱变蝴蝶兰于1/2MS液体培养基中培养30～40天，得到所述蝴蝶兰新品种。

本发明将所述诱变蝴蝶兰于1/2MS液体培养基中培养前，优选还包括用清水冲洗诱变后的蝴蝶兰。本发明对所述冲洗过程没有特殊限定，采用本领域中常规操作即可。完成所述冲洗后，本发明将所述诱变蝴蝶兰于1/2MS液体培养基中培养30～40天，得到所述蝴蝶兰变异株。本发明所述培养时间优选为30天。得到所述蝴蝶兰变异株后，本发明优选还包括将所述蝴蝶兰变异株在温室中进行常规管理，得到蝴蝶兰新品种。本发明在所述常规管理的过程中优选还包括喷洒营养液补充营养，所述营养液优选为1/2MS液体培养液。本发明所述蝴蝶兰新品种的表型优选包括花瓣边缘伴有白边，更优选为花边边缘伴有不规则白边。

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种蝴蝶兰的化学诱变方法，由以下步骤组成：

(1)将成熟蝴蝶兰果荚经自来水冲洗干净，用75％酒精表面消毒1min，灭菌水冲洗1次，在无菌超净台上用0.1％升汞灭菌8min，再用灭菌水冲洗3次后取出。在无菌碟上，用解剖刀纵向切开果荚，将粉状种子轻轻夹出，撒播在无菌的诱导萌发培养基上，每个果荚的粉状种子可均匀撒播在5～6瓶培养基上，待幼苗出瓶后进行常规管理。所述培养基以1/2MS为基本培养基，添加马铃薯汁150g/L。

(2)以pH值为7的磷酸盐缓冲液为溶剂与平阳霉素混合制备平阳霉素溶液，平阳霉素溶液的浓度为55μg/mL；将平阳霉素和1/2MS液体培养基混合制备MS营养液，MS营养液中平阳霉素的浓度均为55μg/mL；幼苗出瓶后，待子叶展平真叶显露时，将300株蝴蝶兰幼苗放入上述制得的MS营养液中进行水培处理，同时采用上述制得的平阳霉素溶液浸泡棉球后处理蝴蝶兰幼苗茎尖生长点，每天早、中、晚各处理一次，连续处理4天，每次8min，处理完成后用清水冲洗蝴蝶兰幼苗茎尖生长点和根部，得到诱变蝴蝶兰。

实施例2

一种蝴蝶兰新品种的培育方法，由以下步骤组成：

将实施例2中得到的诱变蝴蝶兰转移到没有添加平阳霉素的1/2MS液体培养液中培养，处理一个月后，蝴蝶兰的花色逐渐出现变异，主要表现为花瓣边缘花色变白，如图1所示，其中左图为诱变后变异株，右图为原始株。将有变异性状的植株在温室内进行常规管理，并喷洒1/2MS液体培养液补充营养，统计诱变后蝴蝶兰的死亡数、死亡率、变异数和变异率。

实施例3～4及对比例1～10

按照实施例2中的方法进行实施例3～4及对比例1～10，区别在于MS培养液和平阳霉素溶液中的平阳霉素浓度不同(MS培养液和平阳霉素溶液中的平阳霉素浓度保持一致)，处理一个月后，蝴蝶兰的花色逐渐出现变异，主要表现为花瓣边缘花色变白，统计诱变后蝴蝶兰的死亡数、死亡率、变异数和变异率，结果如表1所示：

表1实施例1～3及对比例1～10的参数及结果数据

由表1可以看出，采用本发明提供的55～65μg/mL的平阳霉素对蝴蝶兰进行诱变，较对比例中的变异率更高，可以得到性状稳定的蝴蝶兰新品种(如图2～5)。

由以上实施例可以得出，采用本发明提供的化学诱变方法可以得到蝴蝶兰新品种。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。