一种日香桂抗盐相关基因及其编码蛋白和应用

摘要

本发明公开了一种日香桂抗盐相关基因及其编码蛋白和应用，属于植物分子生物学领域。本发明基于植物基因克隆技术从日香桂中分离、克隆出的三个Trihelix转录因子，分别命名为OfGT3、OfGT42和OfGT46基因，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1‑3所示，对应的氨基酸序列依次如SEQ ID NO.4‑6所示，在此基础上构建了超表达载体并利用农杆菌花絮浸泡法将上述基因导入本氏烟草中，获得转基因植株，通过对250mM NaCl处理前后的膜脂过氧化指标分析，结果发现非转基因的植株的耐盐性明显低于转基因的植株，表明上述基因是潜在的耐盐性指示基因。

说明书

技术领域

本发明属于植物分子生物学领域，具体涉及一种日香桂抗盐相关基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

日香桂(Osmanthus fragrans cv.′rixianggui′)，是桂花的一个园艺品种，因具有不断开花，香气浓郁的特点而得名。集绿化、美化、香化于一体的观赏与实用兼备的优良园林树种，观赏与经济价值较高，然而对盐胁迫敏感，在高纬度地区的栽培与应用受到限制。因此，在桂花中发掘抗盐基因，对于桂花抗盐性的提升具有重要的意义。Trihelix转录因子是近年来被广泛关注的一类转录因子，在调节植物胁迫响应和发育过程中发挥重要作用，但桂花中的Trihelix转录因子尚未被探索。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的第一技术问题在于提供一种日香桂抗盐相关基因；本发明所要解决的第二技术问题在于提供日香桂抗盐相关基因的表达蛋白；本发明所要解决的第三技术问题在于提供日香桂抗盐相关基因在植物抗盐遗传改良中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种日香桂抗盐相关基因，所述基因为OfGT3、OfGT42、OfGT46中的一种，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1-3所示，其表达蛋白的氨基酸序列依次如SEQ ID NO.4-6所示。

利用ExPASy软件分析，发现OfGT3、OfGr42、OfGT46基因长度分别为1587bp、1590bp、1458bp，分别编码528、530、486个氨基酸蛋白，蛋白的分子量分别为60.06kDa、60.23kDa、56.6kDa，等电点分别为5.61、5.58、7.16。

含有所述的日香桂抗盐相关基因的重组表达载体或重组菌。

所使用的载体为Super1300载体，将上述基因序列插入到Super1300载体的多克隆位点Sma I和Spe I之间，改造得到相应的重组表达载体。

所述的日香桂抗盐相关基因在改良植物对盐的耐受性的遗传育种中的应用，所述植物为本氏烟草或日香桂。

所述的日香桂抗盐相关基因在提高植物对环境盐胁迫抗性中的应用，所述植物为本氏烟草或日香桂。

进一步的，构建所述日香桂抗盐相关基因的过表达载体，并将其通过稳定遗传转化的方式转化到植物中，筛选获得盐胁迫抗性提高的植物。

本申请采用的是农杆菌注射法介导基因瞬时表达。

本申请通过对250mM NaCl处理后的膜脂过氧化(MDA)指标分析，结果发现转OfGT3/OfGT42/OfGT46烟草的耐盐性明显高于非转基因植株，表明上述基因是潜在的耐盐性指示基因。

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明基于植物基因克隆技术从日香桂中分离、克隆出的三个Trihelix转录因子，分别命名为OfGT3、OfGT42和OfGT46基因，在此基础上构建了超表达载体并利用瞬时转化法将上述基因导入本氏烟草中，获得转基因植株，通过对250mM NaCl处理后的烟草进行膜脂过氧化指标分析，发现细胞膜的损伤程度明显低于对照植株，这表明非转基因的植株的耐盐性明显低于转基因的植株，表明上述基因是潜在的耐盐性指示基因。

附图说明

图1为目的基因OfGT3、OfGT42和OfGT46扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；

图2为目的基因OfGT3、OfGT42和OfGT46扩增片段与Super1300载体连接转化后菌落检测图；

图3为转化农杆菌GV3101后的菌检琼脂糖凝胶电泳图；

图4为瞬时转基因苗的半定量检测图；图中，泳道L1-L3为对照组空载瞬时转化植株，泳道L4-L11为目的基因瞬时转化植株的条带；NBL25为烟草内参基因；

图5瞬时转基因的烟草中MDA含量测定图；

图6NbSOD/NbCAT/NbAPX在转OfGT3/OfGT42/OfGT46和非转基因烟草中的表达量。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均可参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的方法或本领域的常规方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本实施例采用TIANGEN植物RNA提取试剂盒(DP432)提取植物总RNA。采用TaKaRaPrimeScript

实施例1构建日香桂OfGT3/OfGT42/OfGT46基因的超表达载体

(1)获取目的基因

根据已发表的桂花全基因组数据库，筛选得到Trihelx基因家族的全部成员，并把其中的3个基因序列分别命名为OfGT3、OfGT42和OfGT46。

(2)设计引物

利用BioXM软件对上述基因的核苷酸全长序列进行酶切位点分析，选择Sma I和Spe I酶作为两个限制性内切酶。利用CE design软件设计引物。按要求进行相关信息的填写，具体包括载体上的酶切位点附近的序列、目的基因全长、按顺序填写2个酶切位点(5′端和3′端)，即可得到扩增引物。设计好的序列发送邮箱至捷瑞生物公司合成。

OfGT3F：aagcttctgcaggggcccgggATGTTGGATAGTTCAGTTTTCTCGG；

OfGT3R：cactagtatttaaatgtcgacCCCCATCGTTGGTAATGAAAA。

OfGT42F：aagcttctgcaggggcccgggATGTTGGCTAGTTCAGTTTTCTTGG；

OfGT42R：cactagtatttaaatgtcgacCCCCATGGTTGACAATGGAA。

OfGT46F：aagcttctgcaggggcccgggATGTTTGATGGTATGCAGTCTGGT；

OfGT46R：cactagtatttaaatgtcgacTTGGTTTTCCGGTTCATTATCTG。

(3)载体双酶切

提前将Super1300载体从-80℃超低温冰箱中取出进行活化和摇菌，按照试剂盒提取Super1300载体质粒，随后进行双酶切实验，体系如下：Sma I酶1μL；Spe I酶1μL；Buffer2μL；载体质粒XμL；ddH

其中X(μL)＝1000ng/载体质粒浓度(ng/μL)。将离心管微微震荡，使其混匀，瞬时离心6s，置于37℃的水浴锅内培养1h。将获得的双酶切后的载体进行琼脂糖电泳，然后利用试剂盒进行切胶回收。

(4)目的基因扩增

以稀释10倍的cDNA为模板，进行PCR扩增，体系如下：ForwardPrimer 1μL；ReversePrimer 1μL；cDNA 1μL；Prime STAR 10μL；ddH

每个基因做3个20μL体系。反应条件为：98℃变性10s；58℃退火15s；72℃延伸1min，35个循环；72℃总延伸10min；16℃终止反应。将获得的扩增产物进行琼脂糖电泳(图1)，然后利用试剂盒进行切胶回收。

(5)连接转化

在离心管中配置连接转化体系：线性化载体X μL；插入目的片段YμL；5×CE IIBuffer 4μL；Exnase II 2μL；ddH

将离心管微微震荡，使其混匀，瞬时离心6s，置于37℃的水浴锅内培养30min，冰上2min。

转化：超净工作台内，用移液枪取5μL的连接产物于50μL的TreliefTM 5α感受态细胞，轻弹混匀，冰浴5min，42℃水浴60s，再冰浴2min，加250μL液体LB(不含Kana)，37℃，200rpm的摇床内孵育30min。

涂板：取200μL孵育后的菌液，用灭菌的玻璃棒均匀涂布在LB固体培养基上(内含50mg/L的Kana)并晾干，用封口膜后倒置在37℃恒温培养箱内培养12-14h。

(6)阳性单菌落检测和测序

当培养基上长出菌后，于超净工作台内进行单菌落检测。每个基因挑取8个饱满的单菌落，依序依次在含Kana抗性的LB固体培养基上进行备份，并用无菌牙签将相应的单菌落沾取至以下体系进行菌检35sF 1μL；Gene R 1μL；Green Mix 10μL；ddH

其中，35S F：ACGCACAATCCCACTATCCTTC；Gene R见实施例1(2)小节引物设计。

PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s；58℃退火30s；72℃延伸1min，35个循环；72℃总延伸10min；16℃终止反应。将获得的扩增产物进行琼脂糖电泳(图2)，挑取3个正确的阳性菌落送测。

实施例2转化农杆菌GV3101

(1)将保存在-80℃超盐冰箱内的GV3101感受态取出放在冰上融化。每33μL感受态加入1μL质粒，吸打混匀后依次冰浴20min、液氨速冻5min、37℃水浴5min、冰浴5min；

(2)加500μL无抗性的LB液体培养基，28℃，200rpm摇床上培养1h；

(3)培养完成后，将菌液6000rpm，离心1min，弃去部分上清液，留100μL均匀涂布于LB固体培养基上(内含50mg/L Kana)，封口膜密封，倒置于28℃培养箱中培养40-48h；

(4)菌检和备份：菌检中的目的条带正确且亮度一致(图4)，则将备份的板子中相对应的菌落挑入LB液体培养基(内含50mg/L Kana)中摇菌，再将菌液和50％甘油按3∶7的体积比保菌，液氮中速冻后保存在-80℃超盐冰箱内。

实施例3侵染本氏烟草并进行MDA指标测定

(1)摇菌：将Super1300空载、P19辅助表达载体和已转入农杆菌的GFP：：Super1300-OfGT3/GFP：：Super1300-OfG42/GFP：：Super1300-OfG46目标基因融合表达载体的菌液于-80℃取出常温融化至冰水混合状态后插入冰中融化，按照300μL菌液加入30mLLB液体培养基中(含Kana 10μg·mL

(2)准备混合菌液：称取0.0196g的AS粉末，使用二甲基亚砜助溶(在通风橱操作)，再加入适量无菌水定容到100ml，获得母液，取母液15ml加入85ml的无菌水，从而获得150μmol·L-1的乙酰丁香酮(AS)；称取0.2035g的MgCl

(3)侵染：生长健壮的35-40d左右的本氏烟草提前2天控水，使用1mL一次性注射器将混合菌液注入本氏烟草叶片背面。

(4)培养：将注射过目的基因混合菌液的瞬时转化植株和注射过空载体菌液的瞬时转化植株浇透水，放于生长室中培养2天(日照：15/9h，144μmol·m

(5)瞬时转基因苗盐胁迫处理：将注射过目的基因混合菌液的瞬时转化植株和注射过空载体菌液的瞬时转化植株用250mM NaCl处理12h后用无菌剪刀剪下注射过菌液的本氏烟草叶片，迅速放入液氮中冷冻样品，并移至-80℃超低温冰箱进行保存。

(6)瞬时转化植株的半定量验证(图4)：采用TIANGEN植物RNA提取试剂盒(DP432)提取植物总RNA。采用TaKaRa PrimeScript

(7)丙二醛(MDA)含量测定参照李合生硫代巴比妥酸比色法(TAB)比色法(李合生.植物生理生化实验原理和技术[M].北京：高等教育出版社.2000.261-263)。

计算公式：C(nmol·g

式中：D

V

W-样品鲜重(g)；

V

(8)了进一步探索OfGT家族的功能，对OfGT3/42/46和空载体瞬时表达烟草中的ROS相关基因(NbAPX、NbCAT和NbSOD)进行了qRT-PCR分析(图6)。值得注意的是，与对照相比，OfGT3/42/46过表达植物中NbAPX的表达水平显着上调，此外，OfGT3/42过表达植物中NbCAT的表达水平显着高于对照。这意味着GT3/42/46可能通过提高对活性氧的清除能力而使烟草的耐盐性增强。NbAPX、NbCAT和NbSOD的引物如下：

NbSOD-F：AAAGGGCACCACAGAATTAAAGTA；

NbSOD-R：GCTCCAGTGCTCCATAGTCGTA。

NbAPX-F：CTCCTCCATATCCACAACAGAACTA；

NbAPX-F：GCAGAGTGCCATGCTAAACG。

NbCAT-F：GTATCGTCCGTCAAGTGCCT；

NbCAT-R：CGGGAGCTCGAAGGAAATCA。

序列表

<110> 南京林业大学，大千生态环境集团股份有限公司

<120> 一种日香桂抗盐相关基因及其编码蛋白和应用

<130> 1

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1587

<212> DNA

<213> OfGT3基因(Artificial)

<400> 1

atgttggata gttcagtttt ctcggaaaat tctggtgttg acggtgctga tggtagtggg 60

acaagtggtg gagcagccgc tcatggggtg gctgtggaac acagaaatga gggtggcagt 120

ggcgacggtg gtgaatattt tgaccggaat tcacctggta atcggtggcc tcgtgaggaa 180

actttggctt tgttaaagat aagagccgat atggaccatg catttcgtga ttccattctc 240

aaagctcctc tttgggatga agtttctagg aaattaggtg ggcttggata caatcgaagt 300

gccaagaaat gcaaagagaa attcgagaac atctataagt accacaagag aacgaaagaa 360

ggcagatcca gtcggcaaaa tgggaaaaac tatagattct tcgagttatt agaggttttt 420

gataatcaac tctctgttcc atcgactccc ttgaaccaag tccaaacata cctgatgaaa 480

acaacagcag cggcaccatt aagggtaaat cccataaacg catctcaaga ttttagggta 540

ccttgttcga atcaagatcc tgatactgaa ttcatgtcca cctctacatc ctcctcggag 600

gagagatctg aaggaagtgt taagagaaag aggaagttgg cagaatattt tgagggatta 660

atgaaggatg ttttgaagaa gcaggaggaa ttgcagaaca tgttcttaga atccatagag 720

aaatatgagg aggactggaa agcaagagaa gaagcatgga aggtacagga aatggctaga 780

ataaagagag aacaagattt cttagcccaa gaacgagcgg tttctgctgc aaaggatgca 840

gccgtgcttg catttttgca aaagatctcg cagtactcaa caactctgca aacaccggca 900

atcccatttc cgatatttga aaaacattcg gacccacatg acaatctgct ggagaagtgc 960

attgacaaac aacaaaatgg cgttggggag acttcaaatc atactgataa acaagagaat 1020

agtgttggtg agaatgctac tctaatgagc tcttcacggt ggccaaaagc agaagttgaa 1080

gctttgatta tgcttagaac tgatcttgat ttgaaataca acgataatgg gctgaaaggg 1140

cctttgtggg aggaaatttc ttctgccatg aagaagcttg gttatgatag aagtgcaaag 1200

aggtgtaaag agaaatggga gaatataaac aagtattaca agagagtgaa agatagcaac 1260

aagaggcggc ctcaggattc gaaaacttgt ccttatttca acacgctcga gtcaatctat 1320

gcaaagaagt ctaaaaccga acacgcttta gaaaattcga gttacaatat gcagcctgaa 1380

cgcattttat ttgaaatgat gggcaaacaa caacatcagc ctcctccact gccgccatca 1440

cagcaacaac atcagtcggg gacagaagac ggtgagagtg aaaatcaaaa tcaagaagaa 1500

aacgctgagg atgaagagga cgatgacaat ggagatggtt atcagattgt tgctaatatt 1560

cccttttcat taccaacgat ggggtaa 1587

<210> 2

<211> 1590

<212> DNA

<213> OfGT42基因(Artificial)

<400> 2

atgttggcta gttcagtttt cttggaaaat tctggtgttg acggtgctga tggtggtggt 60

acaagtggtg gcgcagcctc tcatggggtg gctatggaac atagaaatga gggtggcagt 120

ggcgacggcg gtgaagatat tgaccggaat tcacctggta atcggtggcc acgtgaggaa 180

actttggctt tgttaaagat aagatctgat atggactgtg catttcgtga cgccattctt 240

aaagctcctc tctgggacga agtttctagg aaattaggtg agcttggata caatcgaagt 300

gccaagaaat gcaaagagaa attcgagaac atctataagt atcacaaaag aacgaaagaa 360

ggcagatcca gtcggcaaaa cgggaaaaac tatagattct tcgagttatt agaggttttt 420

gataatcaac tctcagttcc atcgactccc ttgaaccaag tccaaaagta cctgacggaa 480

acaacagcaa cggcaccgtt aagggtaaat cccttaaatg catctcaaga ttttagggta 540

gtaccttgtt cgaatcaaga tcctgatact gacttcatgc ccacctctac atcctcctcg 600

gaagagagat ctgaaggaag tgttgagaaa aagaggaaat tagcagaata ttatgagaga 660

ttaatgaagg atgttttgaa gaagcaggag gatttacaga acaagttctt agaagccata 720

gagaaatatg agaaggatcg tatagcaaga gatgaagcat ggaaggtaca agaaatggct 780

agaataaaga gagaacgaga ttttttagcc caggaacgag caatttctgc tgcaaaggat 840

gcagccgtgc ttgcattttt gcaaaagatc tcgcagcatt caacgaatct ccaaattcca 900

gagatcccat tttcgatatt tgaaaaacat ttggagacaa atgataatgt gttggagaag 960

cgcattgaca aacaagaaaa tggtgttggg gagacttcaa atcatactga taaacaagag 1020

aatagtgttg gtgagaatac tactctgatg agctcttcaa ggtggccaaa agcagaagtt 1080

gaagctttga ttatgcttag aactgatctt gatttgaaat acaacgataa tgggccgaaa 1140

gggcccttgt gggaggagat ttcttctgcc atgaagaagc ttggttatga tagaagtgca 1200

aagaggtgta aagagaaatg ggaaaacata aacaagtatt acaagagagt aaaagataac 1260

aaaaagagga ggcctcagga ttcgaaaact tgtccctatt tcaacttgct tgagtctatc 1320

tatgcaaaga aatctaaaac cgaacatact tcagaaaatt cgagttacaa tatgcagcct 1380

gaacgtattt tattggaaat gatgggccaa caacaacatc agcctcctcc accacagcca 1440

acacaacaac aacatcagtc aggggcagac gatggtgaga gtgaaaatca aaatcaagga 1500

gacaacgctg aggatgaaga ggatgacgac aatggagatg gttaccagat tgttactaat 1560

atcccctttc cattgtcaac catggggtaa 1590

<210> 3

<211> 1458

<212> DNA

<213> OfGT46基因(Artificial)

<400> 3

atgtttgatg gtatgcagtc tggtgatcaa tttcatcaat tcatagcttc accaagaact 60

tcatttccta ttcctctttc ttttccactt aatggagcaa acccatctgt aattcccagt 120

tttgatcctt tcacttctca tcaattacac cttcagttag agtcctctat taataacaag 180

gttgaacagg attatgaaga acaaaccagt ttaatctcaa ctaatttagt gctcgaaaga 240

gagagatcta tgccagaaac gacgatgact accgatctgg gctggtcgaa taatgaagtt 300

cttgctttgc tcagaattag atccaacatt gagaattggt tctcagattt cacttgggaa 360

caagtttcaa ggaaacttgg agagcttggg tttaaaagaa ctgctgataa atgcaaggag 420

aaatttgaag aagaaaccag aaatttcaac agtataagct acaacaagaa ttacaggatt 480

ttctccggcg acgatgaatt ttatcctgat gatcaagatc aagaactcca tatttctgca 540

gaaaagaatc atgcaaaatc aagaagaaga agaagaagat ataagggaga ggaatattgt 600

agaaggagaa tcagaaagaa ctcaattgtg aacaagataa tggttcaaca ggaagagttg 660

cacaataagc tgatagaaga catgttgaaa agggatgagc aaacaattgc aagagaagaa 720

gcttggagaa atcgacatac ggagatgatt aagaaggaaa ttgaaataag ggcggaagaa 780

caagccactg ctagggagag acaggccact attattgagt ttttgaagaa atttacatca 840

gattcttgtg aagaagatca ggaatttgta acgaaaattc aagatcttct caaggtcaat 900

atgacttgta caattcactc tcatgatcaa actacaacta cccaagaaaa agtagaagca 960

gccacttcat cgagcatggc ttttattcac caaaaaccta gttcaaaacc ctgctcctca 1020

tctgtactgc tccaaaaccc taatcctgca aaatcccaag agaataatca gttagaattg 1080

acaccatctt caaggaaaag gccttccaag aatttgcatt gtgaaagtgg agatagtggc 1140

aacagatggg ctagagatga agtgttagct ctgataaacc ttaagtgcaa actgaataat 1200

aatgatgaaa ttaaggatgg agaaaagggt ccattatggg aaagaatttc acaggggatg 1260

cttgaattgg gatacgggag gaatgccaaa agatgcaaag agaaatggga gaatataaat 1320

aagtatttca gaaagactaa agacagtagc aagaagaggt ctcttgattc aagaacatgt 1380

ccttattttc aacagttgag cagtttatac agtcaaggaa aactcgtcgc cccagataat 1440

gaaccggaaa accaatag 1458

<210> 4

<211> 528

<212> PRT

<213> OfGT3基因的表达蛋白(Artificial)

<400> 4

Met Leu Asp Ser Ser Val Phe Ser Glu Asn Ser Gly Val Asp Gly Ala

1 5 10 15

Asp Gly Ser Gly Thr Ser Gly Gly Ala Ala Ala His Gly Val Ala Val

20 25 30

Glu His Arg Asn Glu Gly Gly Ser Gly Asp Gly Gly Glu Tyr Phe Asp

35 40 45

Arg Asn Ser Pro Gly Asn Arg Trp Pro Arg Glu Glu Thr Leu Ala Leu

50 55 60

Leu Lys Ile Arg Ala Asp Met Asp His Ala Phe Arg Asp Ser Ile Leu

65 70 75 80

Lys Ala Pro Leu Trp Asp Glu Val Ser Arg Lys Leu Gly Gly Leu Gly

85 90 95

Tyr Asn Arg Ser Ala Lys Lys Cys Lys Glu Lys Phe Glu Asn Ile Tyr

100 105 110

Lys Tyr His Lys Arg Thr Lys Glu Gly Arg Ser Ser Arg Gln Asn Gly

115 120 125

Lys Asn Tyr Arg Phe Phe Glu Leu Leu Glu Val Phe Asp Asn Gln Leu

130 135 140

Ser Val Pro Ser Thr Pro Leu Asn Gln Val Gln Thr Tyr Leu Met Lys

145 150 155 160

Thr Thr Ala Ala Ala Pro Leu Arg Val Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gln

165 170 175

Asp Phe Arg Val Pro Cys Ser Asn Gln Asp Pro Asp Thr Glu Phe Met

180 185 190

Ser Thr Ser Thr Ser Ser Ser Glu Glu Arg Ser Glu Gly Ser Val Lys

195 200 205

Arg Lys Arg Lys Leu Ala Glu Tyr Phe Glu Gly Leu Met Lys Asp Val

210 215 220

Leu Lys Lys Gln Glu Asp Leu Gln Asn Met Phe Leu Glu Ser Ile Glu

225 230 235 240

Lys Tyr Glu Glu Asp Trp Lys Ala Arg Glu Glu Ala Trp Lys Val Gln

245 250 255

Glu Met Ala Arg Ile Lys Arg Glu Gln Asp Phe Leu Ala Gln Glu Arg

260 265 270

Ala Val Ser Ala Ala Lys Asp Ala Ala Val Leu Ala Phe Leu Gln Lys

275 280 285

Ile Ser Gln Tyr Ser Thr Thr Leu Gln Thr Pro Ala Ile Pro Phe Pro

290 295 300

Ile Phe Glu Lys His Ser Asp Pro His Asp Asn Leu Leu Glu Lys Cys

305 310 315 320

Ile Asp Lys Gln Gln Asn Gly Val Gly Glu Thr Ser Asn His Thr Asp

325 330 335

Lys Gln Glu Asn Ser Val Gly Glu Asn Ala Thr Leu Met Ser Ser Ser

340 345 350

Arg Trp Pro Lys Ala Glu Val Glu Ala Leu Ile Met Leu Arg Thr Asp

355 360 365

Leu Asp Leu Lys Tyr Asn Asp Asn Gly Leu Lys Gly Pro Leu Trp Glu

370 375 380

Glu Ile Ser Ser Ala Met Lys Lys Leu Gly Tyr Asp Arg Ser Ala Lys

385 390 395 400

Arg Cys Lys Glu Lys Trp Glu Asn Ile Asn Lys Tyr Tyr Lys Arg Val

405 410 415

Lys Asp Ser Asn Lys Arg Arg Pro Gln Asp Ser Lys Thr Cys Pro Tyr

420 425 430

Phe Asn Met Leu Glu Ser Ile Tyr Ala Lys Lys Ser Lys Thr Glu His

435 440 445

Ala Leu Glu Asn Ser Ser Tyr Asn Met Gln Pro Glu Arg Ile Leu Phe

450 455 460

Glu Met Met Gly Lys Gln Gln His Gln Pro Pro Pro Leu Pro Pro Ser

465 470 475 480

Gln Gln Gln His His Ser Gly Thr Glu Asp Gly Glu Ser Glu Asn Gln

485 490 495

Asn Gln Glu Glu Asn Ala Glu Asp Glu Glu Asp Asp Asp Asn Gly Asp

500 505 510

Gly Tyr Gln Ile Val Ala Asn Ile Pro Phe Ser Leu Pro Thr Met Gly

515 520 525

<210> 5

<211> 529

<212> PRT

<213> OfG42基因的表达蛋白(Artificial)

<400> 5

Met Leu Ala Ser Ser Val Phe Leu Glu Asn Ser Gly Val Asp Gly Ala

1 5 10 15

Asp Gly Gly Gly Thr Ser Gly Gly Ala Ala Ser His Gly Val Ala Met

20 25 30

Glu His Arg Asn Glu Gly Gly Ser Gly Asp Gly Gly Glu Asp Ile Asp

35 40 45

Arg Asn Ser Pro Gly Asn Arg Trp Pro Arg Glu Glu Thr Leu Ala Leu

50 55 60

Leu Lys Ile Arg Ser Asp Met Asp Cys Ala Phe Arg Asp Ala Ile Leu

65 70 75 80

Lys Ala Pro Leu Trp Asp Glu Val Ser Arg Lys Leu Gly Glu Leu Gly

85 90 95

Tyr Asn Arg Ser Ala Lys Lys Cys Lys Glu Lys Phe Glu Asn Ile Tyr

100 105 110

Lys Tyr His Lys Arg Thr Lys Glu Gly Arg Ser Ser Arg Gln Asn Gly

115 120 125

Lys Asn Tyr Arg Phe Phe Glu Leu Leu Glu Val Phe Asp Asn Gln Leu

130 135 140

Ser Val Pro Ser Thr Pro Leu Asn Gln Val Gln Lys Tyr Leu Thr Glu

145 150 155 160

Thr Thr Ala Thr Ala Pro Leu Arg Val Asn Pro Leu Asn Ala Ser Gln

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