一种低温消毒剂及其制备方法（二溴海因）

摘要

本发明涉及消毒剂技术领域，尤其涉及一种低温消毒剂及其制备方法（二溴海因）。低温消毒剂按质量百分比计，其组分包括二溴海因0.03~0.2%、防冻剂20~25%、稳定剂0.04~0.2%、助溶剂0.01~1%、pH调节剂1~3%、纯化水70~75%。低温消毒剂的制备方法包括如下步骤：将纯化水和助溶剂加入烧杯中，搅拌溶解后，依次加入二溴海因、稳定剂、防冻剂、pH调节剂，混合均匀，得到低温消毒剂。利用本发明方法制备的低温消毒剂适用于在‑18℃的低温环境下使用，对不锈钢基本无腐蚀性。可满足食品冷链运输的要求；可直接使用在皮肤上，对皮肤无刺激、经口无毒。

说明书

【技术领域】

本发明涉及消毒剂技术领域，尤其涉及一种低温消毒剂及其制备方法（二溴海因）。

【背景技术】

冷链食品的安全问题越来越受到人们的关注。尤其在当前新冠肺炎疫情的情况下，由于缺乏有效的低温消毒剂，导致冷链食品频繁被检出核酸阳性的情况。开发出一种适用于低温环境、安全、有效的低温消毒剂是当务之急。

【发明内容】

本发明的目的在于提供。一种低温消毒剂及其制备方法（二溴海因），用于克服现有技术中的缺陷。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种低温消毒剂，其特征在于：按质量百分比计，其组分包括二溴海因0.03~0.2%、防冻剂20~25%、稳定剂0.04~0.2%、助溶剂0.01~1%、pH调节剂1~3%、纯化水70~75%。

作为本发明的进一步改进，所述的防冻剂为氯化钙。

作为本发明的进一步改进，所述的稳定剂为乙酸和乙酸钠的混合物。

作为本发明的进一步改进，所述的稳定剂中乙酸和乙酸钠的质量比为1:2~5。

作为本发明的进一步改进，所述的助溶剂烷基三甲基铵盐类、二烷基二甲基铵盐类、烷基二甲基苄基氯化铵类中的一种。

作为本发明的进一步改进，所述pH调节剂为酸性氧化电位水和碱性氧化电位水中的任意一种或两者的混合物。

一种低温消毒剂的制备方法，其特征在于：具体步骤为将纯化水和助溶剂加入烧杯中，搅拌溶解后，依次加入二溴海因、稳定剂、防冻剂、pH调节剂，混合均匀，得到低温消毒剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、利用本发明方法制备得到的低温消毒剂适用于最低在-18℃的低温环境下使用，对不锈钢基本无腐蚀性，可满足食品冷链运输的要求。

2、本发明的低温消毒剂可直接使用在皮肤上，对皮肤无刺激、经口无毒。

【具体实施方式】

下面将结合实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例中所用的试剂，如无特殊说明，可以常规市售购得。

实施例1

将718g纯化水和10g十六烷基三甲基氯化铵加入烧杯中，搅拌溶解后，依次加入1.5g二溴海因、0.15g乙酸、0.35g乙酸钠、240g氯化钙、10g酸性氧化电位水、20g碱性氧化电位水，混合均匀，得到低温消毒剂。

实施例2

将750g纯化水和5g十二烷基二甲基苄基氯化铵加入烧杯中，搅拌溶解后，依次加入1g二溴海因、0.2g乙酸、1g乙酸钠、222.8g氯化钙、8g酸性氧化电位水、10g碱性氧化电位水，混合均匀，得到低温消毒剂。

实施例3

将732g纯化水和1.3g二烷基二甲基氯化铵加入烧杯中，搅拌溶解后，依次加入0.8g二溴海因、0.3g乙酸、0.6g乙酸钠、250g氯化钙、8g酸性氧化电位水、7g碱性氧化电位水，混合均匀，得到低温消毒剂。

实施例4

将750g纯化水和0.5g十八烷基三甲基氯化铵加入烧杯中，搅拌溶解后，依次加入0.5g二溴海因、0.5g乙酸、1.5g乙酸钠、237g氯化钙、4g酸性氧化电位水、6g碱性氧化电位水，混合均匀，得到低温消毒剂。

实施例5 低温试验

依据《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》，对实施例1的低温消毒剂进行低温试验，试验的环境温度为-18℃。

试验结果：测试的低温消毒剂在-18℃环境中保持12小时，产品保持液体状态、无析出、无结晶。

由试验结果可知，实施例1的低温消毒剂符合《低温消毒剂卫生安全评价技术要求》要求。

实施例6 消毒效果的评价试验

a. 细菌定量杀灭试验

通过中和剂鉴定试验和细菌定量杀灭试验，对本发明方法制备的低温消毒剂进行消毒效果的评价，实验方法参照卫生部《消毒技术规范》（2002年版）“2.1.1.5.6 中和剂载体定量鉴定试验操作程序”和“2.1.1.7 细菌定量杀灭试验”。

中和剂鉴定试验：

中和剂选用D/E中和肉汤，试验菌为大肠杆菌。试验分组为⑴消毒剂+菌片；⑵（消毒剂+菌片）+中和剂；⑶中和剂+菌片；⑷（消毒剂+中和剂）+菌片；⑸稀释液+菌片；⑹同批次稀释液+同批次中和剂+同批次培养基。试验前，将实施例1的低温消毒剂与菌片置入-18℃低温环境下保持30分钟。低温消毒剂在-18℃低温环境下，分别作用2分钟，试验重复3次。

表1大肠杆菌中和剂鉴定试验结果

由试验结果可知，D/E中和肉汤能有效中和实施例1的低温消毒剂对大肠杆菌的杀菌作用，该中和剂及中和产物对大肠杆菌及培养基无不良影响。由此表明，D/E中和肉汤做为中和剂适用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的定量杀灭试验。

载体定量杀菌试验：

试验菌为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，试验前将低温消毒剂和菌片置入-18℃低温环境下保持30分钟。低温消毒剂在-18℃低温环境下分别作用10分钟、20分钟、30分钟，试验重复3次，培养温度为37.0℃。

表2 低温消毒剂对大肠杆菌的杀灭效果

表3 低温消毒剂对金黄色葡萄球菌的杀灭效果

试验结果表明：在-18℃低温环境下，实施例1的低温消毒剂对载体上的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用10分钟、20分钟、30分钟的平均杀灭对数值均＞3.00，符合《消毒技术规范》（2002年版）的标准要求。

b. 消毒剂对其他表面消毒模拟现场鉴定试验

通过消毒剂对其他表面消毒模拟现场鉴定试验，对本发明的低温消毒剂进行消毒效果的评价，实验方法参照卫生部《消毒技术规范》（2002年版）“2.1.2.9消毒剂对其它表面消毒模拟现场鉴定试验”。

试验步骤：

（1）染菌时，用微量移液器吸取菌悬液滴加于60个不锈钢片载体，均匀涂布。30个作为阳性对照组，30个作为试验组。待自然干燥后进行试验，将不锈钢片载体置于-18℃冷库内的某个物体表面，放置30分钟。

（2）阳性对照组：将不锈钢片载体放入含5ml稀释液试管中，振打200次，作用20分钟。

（3）试验组：用喷壶将实施例1 的低温消毒剂喷雾于不锈钢片载体表面进行消毒，作用20分钟。消毒后，将不锈钢片载体放入含5ml中和剂试管中，振打200次，作用20分钟。

（4）试验结束后，分别将未用过的同批中和剂、稀释液和棉拭子作为阴性对照组样本。

（5）分别吸取阳性对照组、阴性对照组和试验组样本各1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37℃恒温箱中培养48h，观察最终结果。重复3次试验，计算杀灭对数值。

表4 低温消毒剂对其他表面消毒模拟现场鉴定试验（金黄色葡萄球菌、不锈钢片载体）结果

表5 低温消毒剂对其他表面消毒模拟现场鉴定试验（大肠杆菌、不锈钢片载体）结果

实验结果表明：在-18℃低温环境下，本发明的低温消毒剂作用20分钟对所有不锈钢片载体上的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭对数值均＞3.00，符合《消毒技术规范》（2002年版）的标准要求。

实施例7 毒理学相关的评价试验

a. 急性经口毒性试验

通过小鼠急性经口毒性试验，对本发明方法制备的低温消毒剂进行毒理学相关评价，实验方法参照卫生部《消毒技术规范》（2002年版）“2.3.1急性经口毒性试验”。

实验步骤：按一次最大限度试验法进行，雌雄动物的剂量均为5000mg/kg体重。取实施例1制备的低温消毒剂6.5g，加入蒸馏水至20mL混合均匀，作为受试物。小鼠禁食12小时，但不限制饮水，经口一次灌胃给予受试物，灌胃体积为0.2mL/10g。灌胃后观察小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察时间为14天。

表6 小鼠急性经口毒性试验结果

由实验结果可知，在14天的观察时间内，雌雄小鼠均未见明显中毒症状，活动正常。眼、鼻、口未见分泌物，无肿胀；被毛整齐光滑、乳白色，黏膜无充血、水肿，体质量增长正常，未发现死亡。结果表明，实施例1制成的受试物对雌雄小鼠经口LD

b. 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

通过检测消毒剂对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成的影响，评价消毒剂的染色体损伤毒性。实验方法参照卫生部《消毒技术规范》（2002年版）“2.3.8.4小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验”。

试验方法：

选用小鼠50只，雌雄各半，随机分组。由于受试样本对小鼠的急性经口LD

操作步骤：

（1）动物染毒采用经口灌胃30h 染毒法，即两次染毒间隔24h。第二次染毒后6h用颈椎脱臼法处死动物，取出股骨，剥除肌肉，擦净血污。切断股骨或胸骨两端，暴露骨髓腔。

（2）用注射器吸取0.1ml灭活无菌小牛血清，冲洗骨髓腔。用冲洗液常规涂片，晾干或热风吹干。将已干的涂片，在甲醇中固定5～10分钟。用姬姆萨应用液染色10～15分钟，然后用pH6.8PBS 液冲洗，晾干。阳性与阴性对照组的操作程序同试验组。阳性组选用环磷酰胺(50 mg/kg体重)，阴性对照组用受试物溶剂。

（3）选择细胞分布均匀、完整、着色适当的区域。在油镜下计数含微核的嗜多染红细胞（PCE）数。

（4）每只动物计数1000个PCE。微核细胞率指含有微核的PCE数，以千分率表示。1个PCE中出现有2个或多个微核，仍按1个计数。此外，还应观察PCE/NCE 比例，作为对细胞毒性的指标。计数200个PCE，同时记数所见到的NCE，并计算出PCE/NCE的比值。

表7 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果

由试验结果可知，在染毒后，未见动物出现明显中毒症状。试验过程中，无动物死亡。经泊松分布检验方法经统计学处理后表明，阴性对照组与阳性对照组之间微核发生率有显著性差异（P＜0.01），各剂量组与阴性对照组之间的微核发生率无显著性差异（P＞0.05）。因此，依据《消毒技术规范》（2002年版）的相关标准判定，实施例1的低温消毒剂对小鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核作用。

c. 金属腐蚀性试验

参照卫生部《消毒技术规范》（2002年版）“2.2.4消毒剂对金属腐蚀性的测定”的试验方法，检测本发明的低温消毒剂对金属的腐蚀性。

金属片规格：圆形，直径24.0 mm，厚1.0 mm，穿一直径为2.0mm 小孔，表面积总值约为9.80 cm

试验方法：将每一种金属片置于200mL的实施例1 的低温消毒剂中于22℃放置72小时。浸泡到规定时间后，取出金属片，先用自来水冲洗，再用毛刷或其它软性器具去除腐蚀产物。用粗滤纸吸干水分，置于垫有滤纸的平皿中，放入50℃ 温箱，干燥1h，用镊子夹取，待其温度降至室温后分别在天平上称重。天平回零后称3 次，以其平均值作为试验后重量。

表8 金属腐蚀性试验结果

由实验结果表明：根据腐蚀性分级标准判定，本发明的低温消毒剂对不锈钢片基本无腐蚀，对铝轻度腐蚀，对铜和碳钢中度腐蚀。