一种3D体外培养中华乌塘鳢精原细胞产生功能精子的方法

摘要

本发明公开一种3D体外培养中华乌塘鳢精原细胞产生功能精子的方法，包括以下步骤：（1）对分离的中华乌塘鳢精巢进行消毒、清洗、剪碎，加入精巢消化液进行消化，然后经过滤网过滤去除未消化的细胞碎片或者细胞团，制得精巢单细胞悬液；精巢单细胞悬液加入percoll梯度溶液中进行离心，分离得到精原细胞；percoll梯度溶液由22~30%和35~45%两种浓度组成percoll溶液；（2）精原细胞转移到3D培养皿中，用精子诱导培养基进行培养；精子诱导培养基包括基础精子培养基和性激素，进一步还包括褪黑素。该方法从精原细胞的分离、培养和诱导条件进行了优化和改良，提高体外培养精原细胞产生具有功能的精子的效率。