一种基于核酶-CRISPR的食品铅污染检测方法

摘要

本发明公开了一种基于核酶‑CRISPR的食品铅污染检测方法，利用核酶对铅离子的高度选择性及CRISPR相关蛋白Cas12a的反式切割活性的灵敏性对铅离子进行高灵敏定性、定量分析。通过报告分子的荧光强度变化指示铅离子的存在与否及浓度变化情况，将痕量铅离子浓度信号转化为荧光信号，提高检测灵敏度，降低实验检出限。同时避免了核酸扩增带来的假阳性问题。铅离子作为核酶酶链的辅酶，可以激活酶链的酶切活性并高效地切割底物链，缩短反应时间，为食品、环境中的痕量铅污染的快速检测提供了可能。本发明是不依赖于扩增的一管混反应，不仅灵敏，同时简化了实验操作。本发明对向导RNA(gRNA)的序列、预引物的长度、dsDNA靶标的长度及核酶臂长进行了优化，检出限为0.027nM。