基于CRISPR/dcas9和磁纳米材料的基因检测方法及应用

摘要

基于CRISPR/dcas9和磁纳米材料的基因检测方法，包括：获取待测目标致癌基因序列，选择特异性的sgRNA；制备链霉亲和素磁纳米微球，然后将链霉亲和素磁纳米微球与SNAP‑Biotin反应，再与CRISPR/dCas9蛋白上的SNAP‑tag结合，形成CRISPR@磁纳米微球；将制备好的CRISPR@磁纳米微球与步骤(1)选出的sgRNA共同孵育，加入到待测体液样本中，并加入核酸染料，当待测体液样本中有目标致癌基因存在时，核酸染料在磁纳米球表面产生荧光检测信号，实现对目标致癌基因的检测。本发明采用了CRIPSR/dcas9技术与磁性纳米微球相结合的方法，使体液样品快速分离、灵敏度增高，信号放大，提高了检测特异性。对乳腺癌相关基因检测的特异性强，分子稳定性好，检测成本低，解决了现有检测方法中特异性差的问题。