聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干制剂

摘要

本发明提供了一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG‑rhG‑CSF)冻干制剂，将PEG‑rhG‑CSF和赋形剂进行喷雾冷冻干燥处理，所制备的PEG‑rhG‑CSF冻干制剂临床使用时，配备含有氯化钠、醋酸盐的专用溶剂，与专用溶剂混合溶解后即可使用。本发明所制备的PEG‑rhG‑CSF冻干制剂，不含表面活性剂吐温20，用药安全性高，稳定性好，可以长期储存，且制备工艺简单，生产周期短。

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的冻干制剂及其制备方法。

背景技术

肿瘤化疗后的非髓源性的中性粒细胞减少症是临床常见化疗并发症，也是肿瘤患者死亡的重要原因之一。重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是防治肿瘤化放疗引起的中性粒细胞减少症的有效药物，能够促进粒细胞集落的形成，促进造血干细胞向中性粒细胞增殖、分化。对成熟的中性粒细胞可促进游走、吞噬、产酶、释放活性氧、杀菌能力和对外来异物的黏着作用。还可动员成熟中性粒细胞从骨髓进入外周。能使早期多能造血干细胞进入细胞周期，连日应用可促使骨髓造血干细胞进入外周血，然而重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在机体内易受蛋白酶降解、半衰期只有1.3～4.2小时，需每日给药，而持续给药会引发药疹、发热、肌痛、骨痛等副作用，直接影响临床治疗效果，这极大的限制了其在临床治疗中的应用。

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)是将重组人粒细胞集落刺激因子与聚乙二醇结合而成，由于其N端经20KD单甲氧基聚乙二醇(Mpeg)化学修饰，使人粒细胞集落刺激因子蛋白被人体内蛋白酶接触和酶解的机会大为减少，与常规rhG-CSF相比，血浆清除率减慢，半衰期明显延长达46-62h，因此临床使用能减少给药次数，避免患者反复接受注射的痛苦，具有长效、不良反应少等优点。

目前美国Amgen公司已有注射液上市，商品名Neulasta，其中含有聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子、山梨醇、吐温20、醋酸、醋酸钠，其中山梨醇用于调节渗透压、醋酸缓冲盐可以维持pH在4.0左右，吐温20可以防止主药聚集，使注射液稳定，然而吐温20有较强的溶血作用，会增加用药的风险。

中国发明专利CN102028661B公开了一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干粉针，该技术方案主要通过在处方中添加冻干保护剂，真空冷冻干燥制备，所述冻干保护剂选自甘露醇、精氨酸、甘氨酸中的一种或多种；所得产品在长期稳定性考察(25℃，RH60％)中，经12个月贮存，溶解后外观无色澄清、纯度95.60％、效价为1.89×10

然而传统的冻干技术，因缺乏液体形成过程，无法控制颗粒的大小，且能耗高，干燥时间较长，对产品质量的稳定性带来的挑战性与难度较大，成本的投入高。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明拟提供一种稳定的聚乙二醇集落刺激因子冻干制剂，将聚乙二醇集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)进行冷冻喷雾干燥处理，以提高其在室温下的稳定性，缩短冻干周期。但单独将药物冷冻喷雾干燥处理，粘性太大，而且规格小，无法分装，即使分装后的产品，复溶时，也因为较强的静电作用，复溶较慢。

具体而言，本发明是通过如下技术方案实现的：

一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的喷雾冷冻干燥制剂，包含聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子和赋形剂，所述冻干制剂使用冷冻喷雾干燥法制备。

优选的，所述赋形剂选自山梨醇、果糖、木糖醇中的一种或多种；

优选的，所述赋形剂为山梨醇。

优选的，所述聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子与赋形剂的重量比为1：2-30；进一步优选为1：2-15；最优选为1:2～3。

优选的，所述喷雾冷冻干燥法，包括以下步骤：

1)将赋形剂和PEG-rhG-CSF共同溶解在注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，低温下喷雾冷冻，形成小冰晶；

2)将所述喷雾冷冻的小冰晶在低温低压下干燥，得到成品粉末。

优选的，步骤1)所述喷雾冷冻的温度为-35℃～-15℃，进一步优选为-35℃～-25℃。

优选的，步骤1)中用于喷雾冷冻的溶液中聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的浓度为5-10mg/ml，山梨醇的浓度为20-200mg/ml；进一步优选的，聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的浓度为8-10mg/ml，山梨醇的浓度为20-125mg/ml。

优选的，步骤1)所述喷雾冷冻过程中，进料流量为10～30mL/min；进一步优选为15～25mL/min。

优选的，步骤2)所述的干燥过程，干燥温度为-25℃以下；进一步优选为-40℃～-30℃。

优选的，步骤2)所述的干燥过程，干燥时空气压力为50Pa以下；进一步优选为30Pa以下；最优选为10～20Pa。

优选的，步骤2)所述的干燥过程，干燥时间为4～12小时。

所述聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子喷雾冷冻干燥制剂临床使用时，配备含有氯化钠、醋酸盐的专用溶剂，溶剂的pH范围为4.0～6.0，临床使用时将该冻干制剂与专用溶剂混合溶解后即可使用。

与现有技术相比，本发明取得的技术效果是：

1、所制备的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因喷雾冷冻干燥制剂，不含表面活性剂吐温20，用药安全性高。

2、所制备的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子喷雾冷冻干燥制剂，稳定性好，可以长期储存。

3、所制备的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子喷雾冷冻干燥制剂，分散性好，复溶时间短，用醋酸盐专用溶剂复配时，能快速恢复到冻干前的形态。

4、所制备的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子喷雾冷冻干燥制剂，制备工艺简单，生产周期短。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明，应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。

实施例1

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 3

制备方法：

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在100ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量25mL/min，-30℃进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约20Pa，干燥室温度-40℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

实施例2

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 2

制备方法：

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在100ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量25mL/min，-25℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约20Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

实施例3

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 15

制备方法：

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在120ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量15mL/min，-35℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

实施例4

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 30

制备方法：

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在150ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量15mL/min，-30℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：-干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

实施例5

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

木糖醇 30

制备方法：

1)喷雾冷冻：将木糖醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在150ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量30mL/min，-15℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-25℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

实施例6

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 40

制备方法：

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在150ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量10mL/min，-30℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：将干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥12小时得成品粉末，分装即得。

实施例7

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 1

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在60ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量15mL/min，-30℃喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥6小时得成品粉末，分装即得。

实施例8

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

山梨醇 15

制备方法：

1)喷雾冷冻：将山梨醇和PEG-rhG-CSF共同溶解在120ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量30mL/min，-10℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约50Pa，干燥室温度-20℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

对比例1

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

右旋糖酐 15

制备方法：

1)喷雾冷冻：将右旋糖酐和PEG-rhG-CSF共同溶解在120ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量15mL/min，-35℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

对比例2

处方：

名称 用量/g

PEG-rhG-CSF 1

甘氨酸 15

制备方法：

1)喷雾冷冻：将甘氨酸和PEG-rhG-CSF共同溶解在120ml注射用水中，经0.22μm滤膜过滤后，加入至喷雾瓶中，进料流量15mL/min，-35℃下进行喷雾冷冻，形成小冰晶。

2)干燥：干燥室的压力调节到约30Pa，干燥室温度-30℃，将喷雾冷冻得到的小冰晶干燥8小时得成品粉末，分装即得。

验证实施例

将试验样品置于相同条件下(25℃，RH60％)12个月进行长期稳定性考察，分别于1、3、6、12月取样检测，检测项目为外观、复溶时间、纯度和效价，表1为长期稳定性考察结果。

将试验样品置于相同加速条件下(40℃，RH75％)6个月进行加速稳定性考察，分别于1、3、6月取样检测，检测项目为外观、复溶时间、纯度和效价，表2为加速稳定性考察结果。

将试验样品置于相同加速条件下(60℃，RH90％)1个月进行加速稳定性考察，分别于1天、15天、30天取样，检测项目为外观、复溶时间、纯度和效价，表2为加速稳定性考察结果。

表1稳定性实验结果(25℃，RH60％)

表2加速稳定性实验结果(40℃，RH75％)

表3加速稳定性实验结果(60℃，RH90％)

由表1、表2和表3可以看出，本发明实施例1-4制备聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子喷雾冷冻干燥制剂在25℃RH60％条件下的长期稳定性和40℃RH75％、60℃RH90％条件下的加速稳定性考察的结果，在复溶时间、外观、纯度、效价上，证明实施例1-4制备的产品稳定性好。