包含黑参提取物的抗流感病毒组合物、用于治疗呼吸疾病的组合物和抗衰老组合物

摘要

本发明涉及抗流感病毒组合物、用于治疗呼吸疾病的组合物和抗衰老组合物，所述组合物中的每一种都包含黑参提取物。

说明书

技术领域

本发明涉及抗流感病毒组合物、用于治疗呼吸疾病的组合物和抗衰老组合物，所述组合物中的每一种都包含黑参提取物。

背景技术

流感病毒分为甲型、乙型、丙型和丁型四种类型。丙型流感病毒仅感染人类但不具有传染性。丁型流感病毒不会引起人类疾病。甲型和乙型病毒是主要出现在冬季并感染人类呼吸器官以引起全身症状的强病毒。

其中，甲型流感病毒的血清型基于病毒表面的两种蛋白质，即血凝素(H)和神经氨酸酶(N)分为亚型。有18种不同的血凝素亚型和11种不同的神经氨酸酶亚型。

流感病毒会周期性地突变，使得靶向药物治疗变得困难。因此，已经开发了神经氨酸酶抑制剂扎那米韦(zanamivir)和奥司他韦(oseltamivir)并将其用作药物。然而，奥司他韦最近引起了自杀的副作用。

因此，提高人体免疫力和安全性的天然物质的开发将是在流感大流行期间降低死亡率的重要手段。

人参是属于五加科人参属的多年生草本植物，是东方医学中使用的草药之一。作为一般人参的生理活性功效，已经报道了对中枢神经系统的作用、抗癌作用(专利文件1)等。特别地，迄今为止已经发现了约40种人参皂苷，并且已经证实它们对中枢神经系统、内分泌系统、代谢系统等具有广泛的作用，并且在调节身体功能，也就是使生理功能正常化方面显示出优异的效果。这些人参皂苷具有相似或相反的作用，并且已知由单独的特定组分或通过几种类型的组分的相互作用来发挥多种作用。

本申请的发明人研究了来源于人参的加工产品中的能够改善由流感病毒引起的疾病的原料，控制用于加工人参以制备具有含量增加的人参中微量存在的人参皂苷的黑参的条件，证实与来自红参的提取物相比，从该黑参获得的提取物进一步改善了流感病毒感染的症状，具有优异的呼吸疾病治疗功效，并且具有非常优异的抗衰老活性，从而完成了本发明。

[现有技术文件]

(专利文件1)韩国未审查的公开号为2010-0134463的申请发明详述

技术问题

本申请的目的是提供具有优异的抗流感病毒效果的天然物质。

本申请的目的是提供对呼吸疾病具有优异治疗效果的天然物质。

本申请的目的是提供具有优异的抗衰老活性的天然物质。

技术方案

根据本申请的方面，提供了用于制备黑参提取物的方法。

另外，本申请的另一方面提供了用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物。

本申请的用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物包含黑参提取物作为活性成分。

本申请的另一方面提供了用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的组合物。

本申请的另一方面提供了抗衰老组合物。

在下文中，将详细描述本申请。

本申请的一个实施方案提供了用于制备富含人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物的方法，所述方法包括蒸制人参以制备黑参的步骤；用溶剂提取所制备的黑参的步骤；以及使获得的黑参提取物熟化的步骤。

黑参提取物来源于通过多次蒸制人参获得的黑参。

人参可以是韩国人参(人参(Panax ginseng))、加拿大人参(西洋参(P.quinquefolius))、中国人参(三七(P.notoginseng))、竹节参(P.japonicus)、三叶参(P.trifolium)、喜马拉雅人参(P.pseudoginseng)，越南人参(P.vietnamensis)、西洋参(Panax quinquefolium)等。根据加工方法，人参通常分为白参和红参。白参是指通过干燥从田间收集的未经加工的人参而获得的人参，即鲜人参。红参是通过蒸制、干燥和加工鲜人参而获得的人参。红参的制备过程涉及几种化学变化，例如皂苷修饰和氨基酸变化。通过在红参制备过程中施加的热量产生不存在于人参中的人参皂苷组分。红参中的独特活性组分显示出防癌作用、癌细胞生长抑制作用、降血压作用、脑神经细胞保护作用和改善学习能力的作用。

本申请的黑参可以通过将选自以下的任一种蒸制9次而获得：人参叶、嫩芽、茎、茎壳、根、根壳、种子、果实、未成熟果实、成熟果实、果肉、果皮、花、雄蕊群、雌蕊群、花萼、雄蕊、花瓣、花萼片、心皮及其组合。雄蕊群代表花中的全部雄蕊，雌蕊群代表花中的全部雌蕊。心皮是构成花的雌蕊的组分，并且代表叶的变形形式，其通常称为花叶。人参可以是但不限于人参根。蒸制过九次并混合的人参的其它部分可以用于抗流感病毒的目的。

人参皂苷Rk1由下式表示：

(其中Glc表示糖基残基)。

人参皂苷Rg5由下式表示：

(其中Glc表示糖基残基)。

蒸制可以在70℃至120℃下进行3至12次。

蒸制可以在75℃至115℃、80℃至110℃、85℃至105℃、87℃至103℃或90℃至100℃下进行。当在以上温度条件下进行蒸制时，活性成分人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加，并且不会产生对健康有害的物质，从而可以优化品质。

蒸制可以进行3至11次、4至10次、5至9次、6至9次、7至9次、8次或9次。在以上蒸制次数的条件下进行蒸制时，活性成分人参皂苷Rk1、Rg5的含量增加，不会产生对健康有害的物质，从而可以优化品质。只要通过应用本申请的蒸制条件获得的黑参提取物对流感病毒感染表现出抗流感病毒活性，就可以不同地应用蒸制次数。

蒸制时间可以是每次蒸制1.5小时至6小时、2小时或更长、2小时至6小时、2小时至5.5小时、2小时至5小时、2小时至4.5小时、2小时至4小时、2小时至3.5小时或2小时至3小时。当在以上时间条件下进行蒸制时，活性成分人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加，不会产生对健康有害的物质，从而可以优化品质。

用于制备黑参提取物的方法还可以包括每次完成蒸制时干燥蒸过的人参的步骤。干燥可以在25℃至60℃、27℃至58℃或30℃至55℃下进行。另外，干燥可以进行10小时至30小时、12小时至28小时、12小时至26小时或12小时至24小时。

如本文所用，术语“提取物”是指通过任何方法从原料中提取的物质，并且意指包括但不限于如此提取的所有提取物、由此获得的浓缩物、浓缩物的干燥产物和粉末。

提取物可以通过从原料或其干燥产物中提取而获得，提取物的原料可以是生长的原料或市售原料，但不限于此。

当通过提取原料获得提取物时，可以使用常规已知的一般提取方法，例如溶剂提取、超声提取、过滤和回流提取。提取物可以通过使用溶剂提取或回流提取制备。提取过程可以重复几次，此后可以进一步对提取物进行例如浓缩或冷冻干燥的步骤。例如，可以通过在减压下浓缩获得的提取物以获得浓缩物，冷冻干燥浓缩物，以及使用研磨机来制备高浓度提取物粉末。提取物还包括通过进一步分馏提取物而获得的级分。

可以通过使用水、有机溶剂或其混合物作为提取溶剂获得提取物。有机溶剂可以是选自以下的任何一种：醇、具有1至4个碳原子的低级醇、己烷(正己烷)、醚、甘油、丙二醇、丁二醇、乙酸乙酯、乙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、苯及其混合物。

当水和有机溶剂的混合物用作提取溶剂时，水和有机溶剂的混合物可以是水和具有1至4个碳原子的低级醇的混合物，以及可以是水和乙醇的混合物。在这种情况下，溶剂可以是20％(v/v)至90％(v/v)的乙醇水溶液、25％(v/v)至85％(v/v)的乙醇水溶液、30％(v/v)至80％(v/v)的乙醇水溶液、20％(v/v)至40％(v/v)的乙醇水溶液，30％(v/v)至60％(v/v)乙醇水溶液、35％(v/v)至75％(v/v)的乙醇水溶液、40％(v/v)至70％(v/v)的乙醇水溶液、45％(v/v)至65％(v/v)的乙醇水溶液或50％(v/v)至80％(v/v)的乙醇水溶液。在制备黑参提取物时，可以向用于提取的原料黑参中加入4倍至10倍、5倍至9倍或6倍至8倍的提取溶剂。在以上乙醇水溶液条件下提取期间，活性成分人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加。

当制备黑参提取物时，提取可以进行2小时至12小时、3小时至11小时、4小时至10小时、4小时至9小时或4小时至8小时。在以上时间条件下提取期间，活性成分人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加。

黑参提取物可以通过以下过程制备。可以用50％(v/v)至80％(v/v)的乙醇水溶液首次提取通过完成最终蒸制和干燥获得的黑参，由第一次提取产生的残余物可以用相同浓度的乙醇水溶液二级提取，由第二次提取产生的残余物可以用30％(v/v)至60％(v/v)的乙醇水溶液三级提取，以及由第三次提取产生的残余物可以用20％(v/v)至40％(v/v)的乙醇水溶液四级提取。黑参提取物可以是在每一轮中获得的各自提取物，以及可以是从第一至第四次提取获得的提取物的混合物。用于每个提取轮次的溶剂可以具有不同的浓度。也就是说，为了增加活性成分人参皂苷Rk1和Rg5的含量，可以以不同组合使用提取溶剂。

黑参提取物可以是55白利糖度％至85白利糖度％、57白利糖度％至83白利糖度％、60白利糖度％至80白利糖度％、62白利糖度％至78白利糖度％或65白利糖度％至75白利糖度％。当黑参提取物在以上白利糖度％浓度范围内时，优化了品质，例如活性成分人参皂苷Rk1和Rg5的含量，并且黑参提取物的粘度不是太高，因此可以制备期望的制剂。

用于制备黑参提取物的方法还可以包括在提取步骤之后使黑参提取物熟化的步骤。

使黑参提取物熟化的步骤可以在80℃或更高、82℃至95℃、84℃至93℃、86℃至91℃或88℃至90℃下进行。在以上温度条件下熟化期间，人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加。

使黑参提取物熟化的步骤可以进行3小时或更长时间、3小时至48小时、3小时至44小时、3小时至40小时、3小时至36小时、3小时至32小时、3小时至28小时或3小时至24小时。在以上时间条件下熟化期间，人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加。

基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，黑参提取物中包含的人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是20重量份至90重量份、25重量份至85重量份、30重量份至80重量份、35重量份至75重量份、40重量份至70重量份、45重量份至65重量份、或50重量份至60重量份。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的效果是优异的。

在用于制备黑参提取物的方法中，在蒸制期间不施加压力。在蒸制期间不单独施加压力，因此不会产生诸如苯并芘的有害物质。因此，本申请的黑参提取物在安全性方面具有优异的品质。

通过蒸制人参制备黑参。通过提取制备的黑参并使其熟化，可以获得具有高含量人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物。例如，通过在70℃至120℃下蒸制3至12次，每次蒸制2小时或更长时间的条件来制备黑参。向该黑参中加入黑参重量4至10倍的水、具有1至4个碳原子的低级醇或其混合溶剂，对黑参进行2至12小时的提取以获得黑参提取物。浓缩黑参提取物，并将黑参浓缩物在80℃或更高温度下熟化3小时或更长时间。结果，基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，已知在红参中不包含或红参中以微量包含的人参皂苷Rk1和Rg5的总含量为20重量份至90重量份，并且显著高于红参提取物中的含量。

本申请的实施方案提供了用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物，所述组合物包含含有人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物，其中基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，人参皂苷Rk1和Rg5的总含量为20重量份至90重量份。

基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是25重量份至85重量份、30重量份至80重量份、35重量份至75重量份、40重量份至70重量份、45重量份至65重量份或50重量份至60重量份。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的效果是优异的。

黑参提取物中包含的人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是9mg/g或更高、9mg/g至30mg/g、9mg/g至28mg/g、9mg/g至26mg/g、9mg/g至24mg/g、9mg/g至22mg/g、9.1mg/g至20mg/g、9.1mg/g至18mg/g、9.2mg/g至16mg/g、9.2mg/g至14mg/g或9.2mg/g至12mg/g。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的效果是优异的。

在本申请的具体实例中，将甲型流感病毒(H1N1)接种到小鼠中，所述小鼠被一天一次施用10mg/Kg/天的浓度的黑参提取物，所述黑参提取物含有9.29mg/g人参皂苷Rk1和Rg5。然后，在接种后一周内以10mg/Kg/天的浓度每天一次施用黑参提取物。结果，所有施用黑参提取物的小鼠存活，并且致死率显示为0％，这与施用达菲(Tamiflu)的阳性对照组相同。同时，当以相同方式进行实验时，除了施用红参提取物(含有0.58mg/g人参皂苷Rk1和Rg5)代替黑参提取物之外，小鼠由于病毒感染而死亡，致死率为50％。

预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的效果可以是在流感病毒感染后降低致死率，或者预防或改善由流感病毒感染引起的肺组织损伤，或者在流感病毒感染后，在感染早期高度表达免疫细胞增殖因子(GM-CSF)或免疫激活因子(IFN-γ)，以在感染早期增强免疫细胞的增殖和活性，从而在感染后期杀死病毒或高表达免疫抑制因子(IL-10)以使活化的免疫系统正常化。

黑参提取物还可以包含酸性多糖和多酚。

包含的酸性多糖的量可以为1mg/g或更多、1mg/g至20mg/g、1mg/g至18mg/g、1mg/g至16mg/g、1mg/g至14mg/g、1mg/g至12mg/g、1.5mg/g至10mg/g、1mg/g至8mg/g、2mg/g至6mg/g、1mg/g至4mg/g或2.5mg/g至4mg/g。当酸性多肽包含在以上范围内时，黑参中包含的酸性多肽与人参皂苷Rk1和Rg5之间的协同作用增加。因此，预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的效果是优异的。

包含的多酚的量可以为15mg/g或更多、15mg/g至40mg/g、15mg/g至38mg/g、15mg/g至36mg/g、16mg/g至34mg/g、17mg/g至32mg/g、18mg/g至30mg/g、19mg/g至28mg/g、20mg/g至26mg/g或20mg/g至24mg/g。当多酚包含在以上范围内时，黑参中包含的多酚与人参皂苷Rk1和Rg5之间的协同作用增加。因此，预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的效果是优异的。

流感病毒可以是甲型流感病毒。甲型流感病毒可以是H1N1，并且H1N1可以是A/加利福尼亚/04/2009(H1N1)。

用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物(其包含含有本申请的人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物)可以是食品或药物组合物。

由流感病毒引起的疾病可以包括但不限于可以由流感病毒感染引起的所有疾病和病变。例如，所述疾病可以是选自以下的任何一种或多种：感冒、流感、咳嗽、打喷嚏、流鼻涕、肌痛、咽喉炎、鼻塞、喉炎、咽喉痛、声音嘶哑、头痛、窦痛、鼻炎、咽炎、支气管炎、哮喘、发热、呼吸困难、全身嗜睡和寒战。

如本文所用，术语“预防”是指由于本申请的组合物而导致由流感病毒引起的疾病的发生延迟的任何作用。

如本文所用，术语“抑制”是指由于本申请的组合物而导致由流感病毒引起的疾病的发生减少的任何作用。

如本文所用，术语“治疗”是指由于本申请的组合物而导致由流感病毒引起的疾病的症状减轻或获益的任何作用。

如本文所用，术语“施用”意指以任何合适的方式将预定物质引入对象。本申请的组合物可以通过能够到达体内靶标的任何一般途径施用。本申请的组合物的施用途径没有特别限定，但可以是口服或肠胃外的。本申请的施用可以每天进行1至4次、2至3次或2次。另外，本申请的施用可以进行4周或更长时间、8周或更长时间、4周至12周、或8周至12周。

在用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物中含有的包含人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物的剂量取决于患者的状况和体重、疾病的程度、药物形式、施用途径和周期，并且可以根据情况适当选择。例如，含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物可以以每天0.0001至1000mg/kg、0.001至700mg/kg、0.01至500mg/kg、0.1至100mg/kg或1至100mg/kg的剂量施用。可以以分开的方式每天进行一次或几次施用。根据施用途径、疾病程度、性别、体重、年龄等，可以增加或减少本申请的含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物的剂量。因此，以上剂量不以任何方式限制本申请的范围。

本申请的食品组合物可以以粉末、颗粒剂、片剂、胶囊、糖浆或饮料的形式提供。除了含有本申请的人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物之外，该食品组合物还可以与其它食品或食品添加剂一起使用。可以根据使用目的(例如，预防、健康或治疗性治疗)适当地确定活性成分的混合量。

含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物可以以0.001wt％至60wt％，例如，0.01wt％至50wt％、0.1wt％至45wt％、1wt％至40wt％或1wt％至20wt％的量包含在食品组合物中。当化妆品组合物中黑参提取物的含量小于0.001wt％时，黑参提取物的抗流感病毒活性可能无法充分显示。当其超过60wt％时，黑参提取物的效果相对于引入的浓度可能相对较低，但是在安全性方面没有问题，因此黑参提取物可以以大于以上范围的量使用。

本申请的食品类型没有特别的限制。本申请的食品的实例包括肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、小吃、蜜饯、披萨、拉面、其它面条、口香糖、包括冰淇淋在内的乳制品、各种汤、酒水、茶、饮料、酒精饮料和维生素复合物。

本申请的药物组合物还可以包含通常用于制备药物组合物的适当载体、赋形剂或稀释剂。

可用于本申请的药物组合物的载体、赋形剂或稀释剂的实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁或矿物油。

本发明的药物组合物可以根据常规方法分别以口服制剂、外部应用、栓剂和灭菌注射溶液的形式配制和使用，口服制剂例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊、悬浮液、乳剂、糖浆、气雾剂等。由于流感病毒通过粘膜传播，因此本申请的药物组合物可以以气雾剂、粉末、凝胶、软膏剂或滴剂的形式提供，以便容易地施用至粘膜。粘膜可以是但不限于鼻粘膜、口腔粘膜、气道粘膜或眼睛粘膜。

为了制备成制剂，可以使用稀释剂或赋形剂，例如常用的填充剂、膨胀剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等。用于口服施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊等。这些固体制剂可以通过将化合物与至少一种赋形剂例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合来制备。

此外，除了简单的赋形剂之外，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石。用于口服施用的液体制剂包括悬浮液、内服的液体、乳剂、糖浆等。除了作为通常使用的简单稀释剂的水和液体石蜡之外，还可以加入各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。

用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶剂、悬浮液、乳剂、冻干制剂和栓剂制剂。作为非水溶剂或悬浮液，可以使用丙二醇、聚乙二醇(polyethylene glycol)、植物油例如橄榄油、可注射酯例如ethylolate等。作为栓剂的基料，可以使用witepsol、聚乙二醇(macrogol)、吐温61、可可脂、月桂酸甘油酯黄油(laurin butter)、甘油明胶(glycerogelatin)等。

用于口服施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊等。通过将本申请的药物组合物与至少一种赋形剂，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合来制备这些固体制剂。此外，除了简单的赋形剂之外，还可以使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石。

用于口服施用的液体制剂包括悬浮液、内服的液体、乳剂、糖浆等。除了作为通常使用的简单稀释剂的水和液体石蜡之外，还可以加入各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。

用于皮肤施用的制剂可以是扑粉、乳剂、悬浮液、油、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂糊剂、凝胶、泡沫或溶液。本申请的药物制剂可以是无水软膏剂，并且可以含有适合于局部应用并且在体温下处于液态的石蜡，特别是低粘度石蜡，或者可以含有天然脂肪或部分合成的脂肪，例如椰子脂肪酸甘油三酯，氢化油，例如氢化花生油或蓖麻油，甘油的部分脂肪酸酯，例如甘油单硬脂酸酯和二硬脂酸酯，硅酮，例如聚甲基硅氧烷，例如六甲基二硅氧烷或八甲基三硅氧烷。例如，药物制剂可以含有与水性乳膏结合并用于增加吸湿能力的脂肪醇，以及甾醇、羊毛蜡、其它乳化剂和/或其它添加剂。

本申请的药物组合物中包含的含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物的剂量如上所述。

本申请的药物组合物可以通过不同途径施用至哺乳动物，例如大鼠、小鼠、家畜、人类等。可以通过例如经口、直肠、静脉内、肌内、皮下、支气管内吸入、子宫内、硬脑膜或脑室内注射进行施用。

除了含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物之外，本申请的用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物还可以含有一种或多种活性成分，其导致改善、减轻、治疗或预防由流感病毒引起的疾病。

为了改善、减轻、治疗或预防由流感病毒引起的疾病，本申请的用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物可以单独使用或与手术、激素治疗、药物和使用生物反应调节剂的方法组合使用。

根据本申请的另一方面，提供了用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的方法，其包括向对象施用包含含有人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物的组合物的步骤。

用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物和施用如上所述。

本申请的含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物可以以有效量施用至有需要的对象。

有需要的对象可以是需要预防、抑制或治疗由流感病毒感染引起的疾病的对象。

术语“对象”在本文可以是动物，包括人类或除人类之外的动物。

本申请的另一个实施方案提供了用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的组合物，所述组合物包含含有人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物，其中基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，人参皂苷Rk1和Rg5的总含量为20重量份至90重量份。

基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是25重量份至85重量份、30重量份至80重量份、35重量份至75重量份、40重量份至70重量份、45重量份至65重量份或50重量份至60重量份。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物的预防、抑制或治疗呼吸疾病的效果是优异的。

黑参提取物中包含的人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是9mg/g或更多、9mg/g至30mg/g、9mg/g至28mg/g、9mg/g至26mg/g、9mg/g至24mg/g、9mg/g至22mg/g、9.1mg/g至20mg/g、9.1mg/g至18mg/g、9.2mg/g至16mg/g、9.2mg/g至14mg/g或9.2mg/g至12mg/g。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物的预防、抑制或治疗呼吸疾病的效果是优异的。

预防、抑制或治疗呼吸疾病的效果可能是由于减少细粉尘或超细粉尘在诸如支气管、咽、喉、鼻腔、鼻窦和肺的呼吸器官中的聚集的作用，或者调节或减少免疫细胞在呼吸器官中的活性的作用。

黑参提取物还可以包含酸性多糖和多酚。

包含的酸性多糖的量可以是1mg/g或更多、1mg/g至20mg/g、1mg/g至18mg/g、1mg/g至16mg/g、1mg/g至14mg/g、1mg/g至12mg/g、1.5mg/g至10mg/g、1mg/g至8mg/g、2mg/g至6mg/g、1mg/g至4mg/g或2.5mg/g至4mg/g。当酸性多肽包含在以上范围内时，黑参中包含的酸性多肽与人参皂苷Rk1和Rg5之间的协同作用增加。因此，预防、抑制或治疗呼吸疾病的效果是优异的。

包含的多酚的量可以是15mg/g或更多、15mg/g至40mg/g、15mg/g至38mg/g、15mg/g至36mg/g、16mg/g至34mg/g、17mg/g至32mg/g、18mg/g至30mg/g、19mg/g至28mg/g、20mg/g至26mg/g或20mg/g至24mg/g。当多酚包含在以上范围内时，黑参中包含的多酚与人参皂苷Rk1和Rg5之间的协同作用增加。因此，预防、抑制或治疗呼吸疾病的效果是优异的。

用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的组合物(其包含含有本申请的人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物)可以是食品或药物组合物。

呼吸疾病可以包括但不限于呼吸器官中发生的任何疾病。例如，其可以是选自以下的任何一种或多种：哮喘、慢性阻塞性肺病、支气管炎、咽炎、喉炎、鼻炎、窦炎和肺炎。

呼吸疾病可以是由细粉尘或超细粉尘引起的疾病。细粉尘是指具有肉眼看不见的尺寸的空气中的颗粒物，并且包括直径为50μm或更小、45μm或更小、30μm或更小或10μm或更小的颗粒物。另外，超细粉尘意指比细粉尘更小的粉尘，并且是指直径2.5μm或更小的颗粒物。细粉尘和超细粉尘可以由离子组分例如硝酸盐(NO

本文所述的关于用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物的内容(其是本申请的另一个实施方案)可以应用于用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的组合物。两者之间共同的内容将不会被冗余地描述以避免说明书的不适当的复杂性。例如，术语“预防”、“抑制”、“治疗”和“施用”的含义以及“黑参提取物的剂量”、“食品组合物”、“药物组合物”、“药物组合物的施用方法”、“含有除黑参提取物以外的活性成分”和“单独组合物的使用或与其它方法组合使用”的内容可以应用于用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的组合物。

根据本申请的另一方面，提供了用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的方法，其包括向对象施用包含含有人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物的组合物的步骤。

用于预防、抑制或治疗呼吸疾病的组合物和施用如上所述。

本申请的含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物可以以有效量施用至有需要的对象。

有需要的对象可以是需要预防、抑制或治疗呼吸疾病的对象。

术语“对象”可以是动物，包括人类或除人类之外的动物。

本申请的另一个实施方案提供了抗衰老组合物，其包含含有人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物，其中基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，人参皂苷Rk1和Rg5的总含量为20重量份至90重量份，。

基于100重量份的人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg3(s)、Rk1、Rg5和Rh1(s)的总含量，人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是25重量份至85重量份、30重量份至80重量份、35重量份至75重量份、40重量份至70重量份、45重量份至65重量份或50重量份至60重量份。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物的抗衰老效果是优异的。

黑参提取物中包含的人参皂苷Rk1和Rg5的总含量可以是9mg/g或更多、9mg/g至30mg/g、9mg/g至28mg/g、9mg/g至26mg/g、9mg/g至24mg/g、9mg/g至22mg/g、9.1mg/g至20mg/g、9.1mg/g至18mg/g、9.2mg/g至16mg/g、9.2mg/g至14mg/g或9.2mg/g至12mg/g。当人参皂苷Rk1和Rg5的总含量在以上范围内时，黑参提取物的抗衰老效果是优异的。

在本申请中，可以通过测定基因和蛋白质的表达的结果来证实抗衰老效果，所述基因和蛋白质例如衰老相关的指示物p15INK4b、p16INK4a、p21、p27、p38、p53、CDK1、CDK2、雷帕霉素机制性靶标(mTOR)、去乙酰化酶1(SIRT1)或β-半乳糖苷酶(β-gal)染色。

黑参提取物还可以包含酸性多糖和多酚。

包含的酸性多糖的量可以为1mg/g或更多、1mg/g至20mg/g、1mg/g至18mg/g、1mg/g至16mg/g、1mg/g至14mg/g、1mg/g至12mg/g、1.5mg/g至10mg/g、1mg/g至8mg/g、2mg/g至6mg/g、1mg/g至4mg/g或2.5mg/g至4mg/g。当酸性多肽包含在以上范围内时，黑参中包含的酸性多肽与人参皂苷Rk1和Rg5之间的协同作用增加。因此，抗衰老效果是优异的。

包含的多酚的量可以为15mg/g或更多、15mg/g至40mg/g、15mg/g至38mg/g、15mg/g至36mg/g、16mg/g至34mg/g、17mg/g至32mg/g、18mg/g至30mg/g、19mg/g至28mg/g、20mg/g至26mg/g或20mg/g至24mg/g。当多酚包含在以上范围内时，黑参中包含的多酚与人参皂苷Rk1和Rg5之间的协同作用增加。因此，抗衰老效果是优异的。

包含含有本申请的人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物的抗衰老组合物可以是食品或药物组合物。

本文所述的关于用于预防、抑制或治疗由流感病毒引起的疾病的组合物的内容(其是本申请的另一个实施方案)可以应用于抗衰老组合物。两者之间共同的内容将不会被冗余地描述以避免说明书的不适当的复杂性。例如，术语“预防”、“抑制”、“治疗”和“施用”的含义以及“黑参提取物的剂量”、“食品组合物”、“药物组合物”、“药物组合物的施用方法”、“含有除黑参提取物以外的活性成分”和“单独组合物的使用或与其它方法组合使用”的内容可以应用于抗衰老组合物。

根据本申请的另一方面，提供了用于预防、抑制或改善衰老的方法，其包括向对象施用包含含有人参皂苷Rk1和Rg5作为活性成分的黑参提取物的组合物的步骤。

如本文所用，术语“改善”是指由于本申请的组合物而改善衰老症状的任何作用。

抗衰老组合物和施用如上所述。

本申请的含有人参皂苷Rk1和Rg5的黑参提取物可以以有效量施用至有需要的对象。

有需要的对象可以是需要预防、抑制或改善衰老的对象。

术语“对象”可以是动物，包括人类或除人类之外的动物。

本发明的效果

根据本申请的用于制备黑参提取物的方法的黑参提取物与红参相比减少流感病毒感染对象的致死率，抑制或改善肺组织损伤，在流感病毒感染的早期增强免疫细胞的增殖和活性，以及在感染的晚期使活化的免疫系统正常化。因此，黑参提取物具有改善由流感病毒引起的感染症状的优异效果。因此，本申请的黑参提取物可以有效地用作多种类型的食品和药物组合物中的活性成分，以改善由流感病毒引起的感染的症状。

另外，由于本申请的黑参提取物在预防、抑制或治疗呼吸疾病方面是优异的，因此其可以用作用于预防或治疗呼吸疾病的食品或药物组合物中的活性成分。

另外，由于本申请的黑参提取物在抑制、预防或改善衰老方面是非常有效的，因此其可以有效地用作抗衰老食品和药物组合物中的活性成分。

然而，本申请的效果不限于上述效果，并且本领域技术人员从以下描述中将清楚地理解未提及的其它效果。

附图简述

图1a至1c显示了在制备黑参期间人参皂苷根据蒸制时间的变化。

图2a至2c显示了人参皂苷根据黑参浓缩物的熟化温度和熟化时间的变化。

图3是显示标准化黑参浓缩物处理组的病毒感染后的致死率的图。

图4显示了标准化黑参浓缩物处理组的病毒感染后的肺组织损伤程度。

图5a至5c是显示标准化黑参浓缩物处理组的病毒感染后免疫激活因子产生的程度的图。

实施本发明的最佳模式

在下文中，将通过制备例和实验例详细地描述本发明。

然而，以下制备例和实验例仅说明本发明，并且本申请的内容不受以下实施例和实验例的限制。

制备例1：黑参的制备

1-1.红参(一次蒸制-干燥的黑参)的制备

将四年生的新鲜人参根置于螺旋清洗机(Samgak fmc,South Korea)中，并洗涤一次3分钟以去除土壤或异物。将洗过的新鲜人参根置于蒸笼中，首先在98℃下蒸制2小时(不包括预热时间)。将蒸笼冷却到55℃的温度。然后，从蒸笼中取出蒸制的新鲜人参根。将热风干燥机的内部温度保持在55℃，然后加入蒸制的新鲜人参根并干燥约18小时。将干燥的红参移至晒干处(自然光下的干燥设施)并干燥一个月以上。通过以上过程，制备930kg红参(一次蒸制-干燥)。

1-2.九次蒸制-九次干燥黑参的制备

在与制备例1-1相同的蒸制和干燥条件下蒸制在制备例1-1中制备的930kg红参。重复进行上述蒸制和干燥过程，并根据重复次数将其称为两次至九次蒸制-干燥。随着重复蒸制和干燥，颜色逐渐变得更接近黑色。通过以上过程，制备了853.8kg的九次蒸制-九次干燥黑参。在制备制备例2的黑参提取物或制备例3的黑参浓缩物时，使用九次蒸制-九次干燥黑参作为原料。

制备例2：黑参提取物的制备

取出在制备例1-1中制备的284.6kg红参和在制备例1-2中制备的284.6kg黑参中的每一种，并粉碎。然后，加入对应于粉碎产物6倍重量的70％(v/v)乙醇水溶液，并在82℃下进行6小时的第一次提取。在与第一次提取相同的条件下对第一次提取产生的提取残余物进行第二次提取。加入对应于由第二次提取产生的提取残余物6倍重量的50％(v/v)乙醇水溶液，并在85℃下进行6小时的第三次提取。加入对应于由第三次提取产生的提取残余物6倍重量的30％(v/v)乙醇水溶液，并在90℃下进行6小时的第四次提取。加入对应于由第四次提取产生的提取残余物的6倍重量的纯净水，并在95℃下进行6小时的第五次提取。

制备例3：黑参浓缩物的制备

过滤在制备例2中各自获得的第一至第四红参提取物和第一至第四黑参提取物，以将提取物与提取残余物分离。对于每种原料，仅将分离的提取物置于浓缩器中，并在真空浓缩器中在55℃下浓缩4小时。获得231kg 70白利糖度％的红参浓缩物，以及获得212kg 70白利糖度％的黑参浓缩物。将获得的红参浓缩物和黑参浓缩物用作以下组分分析和甲型流感病毒实验的样品。

实验例1：证实了黑参浓缩物中人参皂苷含量根据蒸制时间的变化

以与制备例1-1的蒸制条件相同的方式进行9次蒸制-干燥，不同之处在于将蒸制时间改变为1小时、2小时和3小时。根据制备例2和3提取并浓缩制备的红参。以与以下实验例3相同的方式测量人参皂苷含量。

当将蒸制时间设置为1小时时，证实了即使在9次蒸制-干燥后也不存在人参皂苷Rk1和Rg5，如图1a所示。同时，当将蒸制时间设置为2小时时，与用1小时的蒸制时间制备的黑参浓缩物相比，人参皂苷Rk1和Rg5的含量显著增加(图1b)。另外，当将蒸制时间设置为3小时时，与将蒸制时间设置为2小时的情况相比，人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加(图1c)。

实验例2：证实了黑参浓缩物中人参皂苷含量根据熟化温度或熟化时间的变化

将制备例3中获得的黑参浓缩物置于2ml小瓶中，分别在70℃、80℃和90℃的水浴中熟化8小时，并测量人参皂苷含量随时间的变化。以与实验例3相同的方式测量人参皂苷含量。

结果，当在70℃下熟化黑参浓缩物时，即使在熟化8小时后人参皂苷含量也没有增加(图2a)。同时，当在70℃下熟化黑参浓缩物时，人参皂苷Rk1和Rg5的含量随时间增加。即使在90℃下，人参皂苷Rk1和Rg5的含量也随着时间增加，如在80℃下熟化的情况一样。

另外，如从图2b至2c可以看出，人参皂苷Rk1和Rg5的含量根据熟化时间而变化。在80℃或更高温度的条件下熟化3h或更长时间的黑参浓缩物中人参皂苷Rk1和Rg5的含量增加。

实验例3：黑参浓缩物中人参皂苷组分的分析

使用HPLC进行在制备例3中获得的红参浓缩物或黑参浓缩物中存在的人参皂苷组分的分析。将通过将制备例3中获得的黑参浓缩物以1/30的比例在甲醇中稀释，然后通过0.45μm过滤器过滤而获得的溶液用作样品。使用HPLC 1260(DAD)(Agilent,USA)。使用VENUSIL XBP C18柱(4.6MM×250MM,5.0μm)，并且作为流动相，使用LC级水作为溶剂A，乙腈作为溶剂B。柱温度保持在35℃。梯度条件如下：0-3.8min，流速1ml/min，在30％B下保持；3.81-4.5min，流速0.5ml/min，在30％B下保持；4.51-6min，流速1.2ml/min，30％B增加到42％B；7.5-13min，流速0.5ml/min，在42％B下保持；直到18分钟，流速0.5ml/min，增加到47.4％B；18.1-25min，流速1ml/min，增加到55％B；30-32min，流速1ml/min，增加到60％B；42-50min，流速1ml/min，60％B增加到90％B；以及50.1-53min，流速1ml/min，在30％B下保持。组分分析结果如下所示(单位：mg/g)。

[表1]

作为分析黑参浓缩物中人参皂苷的结果，证实了存在0.832mg/g的Rb1、1.157mg/g的Rf、1.008mg/g的Rg2(S)、0.265mg/g的Rg2(R)、0.941mg/g的Rh1(S)、0.416mg/g的Rh1(R)、0.274mg/g的Rg6、0.777mg/g的F4、0.862mg/g的Rk3、1.714mg/g的Rh4、4.122mg/g的Rg3(S)、1.184mg/g的Rg3(R)、4.747mg/g的Rk1和4.539mg/g的Rg5。

当比较黑参浓缩物和红参浓缩物中包含的人参皂苷含量时，与红参浓缩物中的那些相比，Rk1和Rg5分别增加约40倍和约10倍。

实验例4：黑参浓缩物中酸性多糖组分的分析

通过咔唑-硫酸比色法进行在制备例3中获得的红参浓缩物或黑参浓缩物中存在的酸性多糖组分的分析。使用通过将以上制备例3中获得的300mg各浓缩物稀释在10ml蒸馏水中而获得的样品。将稀释溶液在沸水中在90℃下加热三小时，冷却，并离心(3000rpm，10分钟)。取1ml上清液，加入4ml乙醇，形成白色沉淀。为了获得白色沉淀，在离心(3000rpm，10分钟)后去除上清液，加入4ml蒸馏水溶解白色沉淀，加入1ml正丁醇和CHCl

将20μl超声处理完成的溶液、80μl蒸馏水、50μl 0.1％咔唑乙醇试剂(用0.125g咔唑/100ml无水乙醇制备)和600μl硫酸加入到2ml管中并搅拌。然后，将各200μl置于96孔板中。在530nm处测量吸光度，并使用校准曲线计算含量。

对于标准产品，将半乳糖醛酸溶解在蒸馏水中以制备1000、500、250、125mg/L的浓度。将20μl标准溶液、80μl蒸馏水、50μl 0.1％咔唑乙醇试剂(用0.125g咔唑/100ml无水乙醇制备)和600μl硫酸加入2ml管中并搅拌。然后，将各200μl置于96孔板中。在530nm处测量吸光度以制作校准曲线，并测量浓度。酸性多糖含量如下所示(单位：mg/g)。

[表2]

如表2所示，与红参浓缩物相比，黑参浓缩物含有大量酸性多糖。

实验例5：黑参浓缩物中多酚组分的分析

使用酶标仪(Powerwave XS,BioTek,USA)测量在制备例3中获得的红参浓缩物和黑参浓缩物中存在的多酚含量。将2g碳酸钠(Sigma 223484,CAS号497-19-8)加入到100mL定容烧瓶中。加入蒸馏水以将总体积调节至100mL以制备2％碳酸钠试剂。将福林酚(Folin-Ciocalteu's phenol)试剂(Sigma F9252-1L)和蒸馏水以1:1的比例混合以制备50％的福林酚试剂，将其用铝箔包裹以防透光。

对于测试溶液，将制备例3中获得的红参浓缩物和黑参浓缩物用蒸馏水以1∶1的比例稀释。取0.1mL各溶液，与0.1mL 50％福林酚试剂和2ml 2％碳酸钠混合。然后，使混合物在暗处静置30分钟，并在750nm处测量吸光度。取在100mL定容烧瓶中的0.4g没食子酸(Sigma G7384，CAS号149-91-7)，加入蒸馏水以将总体积调节至100mL，以及将溶液稀释至31.25ppm、62.5ppm、125ppm、250ppm和500ppm的浓度，制备标准溶液。以与测试溶液相同的方式将标准溶液与试剂混合。然后，使混合物在暗处静置30分钟，并在750nm处测量吸光度。

在吸光度测量后，以标准溶液的吸光度作为横坐标，以标准溶液的浓度作为纵坐标，绘制校准曲线。使用下面的等式1计算在制备例3中获得的红参浓缩物和黑参浓缩物的总多酚含量。

[等式1]

总多酚含量(mg/mL)＝(A×B×C)/D

A：测试溶液的总量(mL)，B：稀释因子，C：测试溶液中的总多酚浓度(mg/ml)，D：收集的样品量(mL)

多酚含量如下所示(单位：mg/g)。

[表3]

如表3所示，与红参浓缩物相比，黑参浓缩物含有大量的多酚。

实验例3至5的总结

在制备例3中制备的黑参浓缩物具有比在制备例3中制备的红参浓缩物更高的人参皂苷Rk1和Rg5、酸性多糖和多酚含量。因此，将制备例3的黑参浓缩物命名为标准化黑参浓缩物。将以上标准化黑参浓缩物用于测量抗病毒活性。

实验例6：黑参浓缩物的抗病毒活性的测量

为了测量在以上制备例中制备的标准化黑参浓缩物的抑制新流感病毒的效果，如下进行实验。对于每个实验组，将从Samtaco Co.,Ltd.购买的6周龄BALB/c小鼠(雌性)用作实验中的组别。

每天将红参浓缩物或标准化黑参浓缩物以10mg/Kg/天的浓度施用至小鼠，持续14天。除了用以上红参浓缩物或标准化黑参浓缩物施用的小鼠之外，向用作阴性对照或阳性对照的小鼠分别经鼻接种30μl新的流感病毒(A/加利福尼亚/04/2009(H1N1))。将红参浓缩物或标准化黑参浓缩物施用至在流感病毒接种后又一周施用红参浓缩物或标准化黑参浓缩物的小鼠。未接种流感病毒的组被视为正常组。在感染流感病毒的小鼠中，将未处理的样品组设置为阴性对照组，以及将感染流感病毒的小鼠中用H1N1流感病毒药物达菲处理的组设置为阳性对照组。在感染后14天观察所有组小鼠的存活/致死性。为了鉴定黑参的抗病毒免疫效应的机制，检查感染后5天肺组织是否受损，并在感染后第1天、第3天、第5天和第7天测量免疫指标(GM-CSF：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、IFN-γ：干扰素-γ和IL-10：白介素-10)。

6-1.病毒感染后致死性的评估

病毒感染后的致死率显示在图3和表4中。

[表4]

如图3和表4所示，病毒感染后阴性对照组显示100％致死性。同时，用抗病毒药达菲处理的阳性对照组的致死率为0％。在红参浓缩物施用组中，在实验中使用的六只小鼠中总共三只小鼠死于病毒感染，导致50％的致死率。然而，在标准化黑参浓缩物施用组中总共6只小鼠全部存活。因此，致死率为0％，这与阳性对照组相同。因此，标准化黑参浓缩物对H1N1流感病毒的保护效果显著优于红参浓缩物。

6-2.病毒感染后肺组织损伤程度的评估

感染H1N1流感病毒的小鼠的死亡原因意指感染后5天由于免疫细胞在肺组织中积聚引起的组织损伤而导致的呼吸功能丧失，如在图4中示出的阴性对照组或红参浓缩物施用组的肺组织。与红参浓缩物施用组相比，标准化黑参浓缩物施用组显示出相对低的肺组织损伤程度。标准化黑参浓缩物在抑制或改善由H1N1病毒感染引起的肺组织损伤方面优于红参浓缩物。

6-3.病毒感染后免疫激活剂产生程度的评估

H1N1流感病毒的有效处理步骤是免疫细胞在感染的初始阶段增殖并产生大量免疫激活因子以有效地去除病毒，并且在感染的后期，免疫细胞产生免疫抑制因子以使宿主恢复到正常状态。

作为该实验的结果，正常组中免疫激活因子的产生没有变化，如图中虚线所示。同时，在标准化黑参浓缩物施用组中，免疫细胞增殖因子(GM-CSF)在感染第1天高表达，免疫激活因子(IFN-γ)在感染第3天高表达，以及免疫抑制因子(IL-10)在感染第7天高表达。因此，发现标准化黑参浓缩物通过在感染初期增加免疫细胞的增殖和活性以杀死病毒，然后在感染后期使升高的免疫系统正常化而发挥抗病毒作用(参见图5a至5c)。另外，与红参浓缩物施用组相比，这些免疫激活因子中的大多数显示出更高的活性，表明标准化黑参浓缩物对H1N1病毒感染具有比红参浓缩物更高的治疗和预防效果。

这被认为是因为标准化黑参浓缩物具有比红参浓缩物含量更高的人参皂苷Rk1、Rg5，酸性多糖和多酚。

实验例7：黑参浓缩物对呼吸健康有效性的测量

为了测量在以上制备例中制备的标准化黑参浓缩物对呼吸健康的有效性，如下进行实验。对于每个实验组，在实验中使用6只6-8周龄的C57BL/6小鼠(雄性)作为一组。

每天将红参浓缩物或标准化黑参浓缩物以10mg/kg/天或250mg/kg/天的浓度施用至小鼠，持续14天。将50μl超细粉尘(SRM297510mg/ml)每天经气管内施用至待用作阴性对照组的小鼠以及施用了红参浓缩物或标准黑参浓缩物的小鼠，持续3天。从超细粉尘施用之日起再将红参浓缩物或标准化黑参浓缩物施用至施用了红参浓缩物或标准化黑参浓缩物的小鼠一周。未施用超细粉尘的组别被视为正常组。在初始注射超细粉尘后4-6天对所有组实施安乐死。然后，测量肺的重量和免疫(炎性)细胞的数目以测定黑参的抗炎作用。进行肺的组织病理学检查以确定黑参减少超细粉尘在呼吸肺中聚集的效果。另外，为了研究黑参对呼吸健康功能对抗超细粉尘的机制，测量免疫指示因子(GM-CSF：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，TNF：肿瘤坏死因子，IL-1β：白介素-1β、IL-6、IL-2和IL-10)。

实验例8：黑参浓缩物的抗衰老功能的测量

进行如下实验以测量在以上制备例中制备的标准化黑参浓缩物对抗衰老功能的有效性。对于每个实验组，在实验中使用三只18月龄的C57BL/6小鼠(雄性)作为一组。

每天将红参浓缩物或标准化黑参浓缩物以300mg/Kg的浓度施用至小鼠，持续14天。每天注射所有组别，持续28天，然后使其安乐死。为了证实黑参的抗衰老作用，从肝组织和从肝组织分离的肝细胞中测量基因和蛋白质的表达，例如衰老相关的指示物p15INK4b、p16INK4a、p21、p27、p38、p53、CDK1、CDK2、雷帕霉素机制性靶标(mTOR)、去乙酰化酶1(SIRT1)或β-半乳糖苷酶(β-gal)染色。

制备例4：食品的制备

4-1.小麦粉食品的制备

将0.5至5.0重量份的本发明的黑参提取物加入到小麦粉中，该混合物用于制备面包、蛋糕、点心、饼干和面条。

4-2.汤类和肉汁的制备

将0.2至5.0重量份的本发明的黑参提取物加入到汤类和肉汁中以制备用于健康改善的肉加工产品、面汤类和肉汁。

4-3.碎牛肉的制备

将10重量份的本发明的黑参提取物加入到碎牛肉中以制备用于健康改善的碎牛肉。

4-4.乳制品的制备

将5至10重量份的本发明的黑参提取物加入到奶中，并使用该奶制备多种乳制品，例如黄油和冰淇淋。

4-5.干粮的制备

将糙米、大麦、糯米和薏仁通过常规方法预糊化、干燥、烘烤，并通过粉碎机制备成粒度为60目的粉末。

将黑豆、黑芝麻和紫苏籽也通过常规方法蒸制和干燥、烘烤，并通过粉碎机制备成粒度为60目的粉末。

将本发明的黑参提取物在减压下浓缩，喷雾，并用热风干燥器干燥。将所得干燥产物通过粉碎机制备成粒度为60目的粉末。

将如此制备的谷物、种子和坚果以及本发明的黑参提取物以以下比例混合以制备干粮：

谷物(糙米(30重量份)、薏仁(15重量份)和大麦(20重量份))、种子和坚果(紫苏籽(7重量份)、黑豆(8重量份)、黑芝麻(7重量份))、本发明的黑参提取物(3重量份)，灵芝(0.5重量份)和地黄(0.5重量份)。

4-6.保健饮料的制备

将5g本发明的黑参提取物与较少的成分，例如高果糖玉米糖浆(0.5％)、低聚糖(2％)、糖(2％)、盐(0.5％)和水(75％)均匀混合。将混合物立即灭菌并包装在小容器(例如玻璃瓶、PET瓶等)中，以制备保健饮料。

4-7.蔬菜汁的制备

将5g本发明的黑参提取物加入到1,000ml番茄或胡萝卜汁中以制备蔬菜汁。

4-8.果汁的制备

将1g本发明的黑参提取物加入到1,000ml苹果或葡萄汁中以制备果汁。

制备例5：药物组合物的制备

5-1.散剂的制备

本发明的黑参提取物：2g

乳糖：1g

将以上成分混合并填充到密封袋中以制备散剂。

5-2.片剂的制备

本发明的黑参提取物：100mg

玉米淀粉：100mg

乳糖：100mg

硬脂酸镁：2mg

将上述成分混合并根据常规的片剂制备方法压片以提供片剂。

5-3.胶囊的制备

本发明的黑参提取物：100mg

玉米淀粉：100mg

乳糖：100mg

硬脂酸镁：2mg

将上述成分混合并根据用于制备胶囊的常规方法填充到明胶胶囊中以制备胶囊。

5-4.丸剂的制备

本发明的黑参提取物：1g

乳糖：1.5g

甘丝氨酸(Glyserine)：1g

木糖醇：0.5g

将以上成分混合并以使得一个丸剂具有4g重量的方式根据常规方法制备成丸剂。

5-5.颗粒剂的制备

本发明的黑参提取物：150mg

大豆提取物：50mg

葡萄糖：200mg

淀粉：600mg

将以上成分混合，向其加入100mg 30％乙醇，然后在60℃下干燥。形成颗粒后，将颗粒填充到包装中。