一种水稻原生质体高效生物素标记体系的建立及应用

摘要

本发明公开了一种生物素标记水稻原生质体的方法，所述方法包括将含有TurboID‑Flag编码基因的重组载体转入水稻原生质体得到含有重组载体的水稻原生质体中；将所述含有重组载体的水稻原生质体与生物素混合得到反应体系进行反应，得到生物素标记的水稻原生质体。本发明首次将基于TurboID的高效生物素标记体系用于水稻研究，在水稻原生质体瞬时表达系统中，建立并优化了基于TurboID的高效生物素标记体系；在所用幼苗数量一定的情况下(100株幼苗，播种后9‑10天取样)，所制备的原生质体在较低生物素浓度(400μM)、短时间内(2‑3小时)即可完成标记反应，无需加入细胞毒性物质。获得的样品可用于后续的互作蛋白鉴定、亚细胞定位研究等。