一种大型基因簇的无痕定点改造方法及其应用

摘要

本发明涉及一种大型基因簇的无痕定点改造方法及其应用。本发明中的无痕定点改造方法首先利用Redαβ线环重组将含有目标DNA‑正向筛选标记‑反向筛选标记组成的基因盒插入靶位点得到重组载体，其中正向筛选标记‑反向筛选标记两侧带有特异性限制酶切位点和末端同源臂；随后重组载体经特异性限制酶切线状化，暴露出末端同源臂；最后在核酸外切酶介导的体外退火作用下，线状DNA分子通过末端同源臂环化完成DNA的无痕修饰。本发明中的无痕定点改造方法可以高效的编辑生物合成途径，在大型聚酮基因簇中进行DNA插入、删除等无痕定点修饰，从而有目的的改变聚酮骨架结构或进行糖基修饰，为聚酮化合物生物合成途径的改造提供了便利。