比美替尼与DMSO的结晶溶剂化物以及比美替尼与柠檬酸的共结晶形式

摘要

本发明涉及比美替尼的分子复合物以及用于制备该分子复合物的方法。

说明书

本发明涉及比美替尼的分子复合物以及用于制备该分子复合物的方法。本发明还涉及用于抑制MEK活性或治疗过度增殖性障碍的分子复合物。

比美替尼具有IUPAC名称5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟乙氧基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二唑-6-羧酰亚胺，并且具有如下所示的化学结构：

WO2016/131406(授予Crystal Pharmatech Co.,Ltd)描述了比美替尼形式A和B。形式A为比美替尼的无水结晶多晶型体。

该化合物比美替尼可以多种多晶型体形式存在，并且这些形式中的许多形式对于制备药学上可接受的组合物可能是不可取的。这可能是出于多种原因，包括缺乏稳定性、高吸湿性、低水溶性以及难以处理。

术语“约”或“大约”意指如本领域普通技术人员所确定的特定值的可接受误差，该误差部分地取决于该值的测量或确定方式。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在1、2、3或4个标准偏差内。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％内。在某些实施方案中并且参考X-射线粉末衍射2θ峰，术语“约”或“大约”意指在±0.2°2θ内。

术语“环境温度”意指介于约15℃至约30℃之间，诸如约15℃至约25℃的一个或多个室温。

术语“反溶剂”是指添加至第二溶剂以降低化合物在该第二溶剂中的溶解度的第一溶剂。溶解度可充分降低，使得化合物从第一溶剂和第二溶剂的组合发生沉淀。

术语“由…组成”是封闭式的，并且排除受权利要求书保护的本发明中另外的未列举的元素或方法步骤。

术语“基本上由…组成”是半封闭式的，并且占据“由…组成”和“包含”之间的中间地带。“基本上由…组成”不排除不会实质上影响受权利要求书保护的本发明的一个或多个基本特征的另外的未列举的元素或方法步骤。

术语“包含”是包含性的或开放式的，并且不排除受权利要求书保护的本发明中另外的未列举的元素或方法步骤。该术语与“包括但不限于”同义。术语“包含”涵盖三个替代形式，即(i)“包含”，(ii)“由…组成”和(iii)“基本上由…组成”。

除非另外指明，否则当用于描述化合物、物质、修饰物、材料、组分或产物时，本文所用的术语“结晶”和相关术语意指化合物、物质、修饰物、材料、组分或产物基本上是结晶，如通过X-射线衍射所确定的。参见例如Remington:The Science and Practice ofPharmacy，第21版，Lippincott,Williams and Wilkins,Baltimore,Md.(2005)；TheUnited States Pharmacopeia,第23版，1843-1844(1995)。

术语“分子复合物”用于表示由具有限定的单相晶体结构的两种或更多种不同组分构成的结晶材料。这些组分通过非共价键合诸如氢键合、离子键合、范德瓦尔斯相互作用、π-π相互作用等保持在一起。术语“分子复合物”包括溶剂化物、盐、共晶体和盐/共晶体杂合物。在一个实施方案中，分子复合物为溶剂化物。在一个实施方案中，分子复合物为盐。在另一个实施方案中，分子复合物为共晶体。在另一个实施方案中，分子复合物为盐/共晶体杂合物。

不受理论的束缚，据信当分子复合物为共晶体时，该共晶体表现出改善的特性，诸如结晶和生物利用度特性。

可通过本领域技术人员熟知的标准分析方法，例如X-射线粉末衍射(XRPD)、单晶X-射线衍射或差示扫描量热法(DSC)，将分子复合物与比美替尼和所选分子复合物形成剂诸如柠檬酸的混合物区别开来。分子复合物的各组分的摩尔比可使用例如HPLC或

术语“多晶型体”、“多晶型体形式”或在本文中相关术语是指一个或多个比美替尼分子或其比美替尼分子复合物的晶形，所述晶形可以两种或更多种形式存在，因此所述一个或多个分子在多晶型体晶格中的排列或构象不同。

术语“药物组合物”旨在涵盖药学上有效量的本发明的比美替尼以及药学上可接受的赋形剂。如本文所用，术语“药物组合物”包括药物组合物，诸如片剂、丸剂、散剂、液体剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂或注射制剂。

术语“赋形剂”是指药学上可接受的有机或无机载体物质。赋形剂可为与药物的活性成分一起配制的天然或合成物质，其被包括在内以用于包含强效活性成分(因此通常称为“增量剂”，“填充剂”或“稀释剂”)增量制剂，或赋予最终剂型中活性成分以治疗增强作用，诸如促进药物吸收或溶解。赋形剂还可用于制备过程中，以有助于处理活性物质，诸如通过促进粉末流动性或不粘特性，以及有助于体外稳定性，诸如防止在预期储存寿命内变性。

术语“患者”是指已成为治疗、观察或实验对象的动物，优选地患者，最优选地人。优选地，患者已经历和/或表现出待治疗和/或预防的疾病或障碍的至少一种症状。此外，患者可能没有表现出待治疗和/或预防的障碍、疾病或病症的任何症状，但被医师、临床医生或其他医疗专业人员认为具有发展所述障碍、疾病或病症的风险。

术语“溶剂化物”是指由一个或多个溶质分子(例如比美替尼)和一个或多个溶剂分子形成的组合或聚集体。一个或多个溶剂分子可与一个或多个溶质分子以化学计量或非化学计量的量存在。

术语“治疗”是指根除或改善疾病或障碍，或与疾病或障碍相关联的一个或多个症状。在某些实施方案中，该术语是指使由向患有此类疾病或障碍的患者施用一种或多种治疗剂而引起的疾病或障碍的传播或恶化最小化。在一些实施方案中，该术语是指在疾病症状发作后，与或不与其他附加活性剂一起施用本文提供的分子复合物。

术语“过夜”是指一个工作日结束至随后的工作日之间的时间段，其中在程序的一个程序步骤结束和随后的步骤的开始之间经过了约12至约18小时的时间范围。

附图说明

通过参考附图可更清楚地理解本文所述的实施方案的某些方面，这些附图旨在说明而非限制本发明，并且其中：

图1示出了实施例6中所述的比美替尼DMSO溶剂化物的代表性X-射线粉末衍射(XRPD)图案。

图2示出了来自单晶结构的比美替尼DMSO溶剂化物的视图，该图示出了原子编号方案。非氢原子的各向异性原子位移椭球以50％的概率水平示出。氢原子以任意小的半径显示。

图3示出了比美替尼DMSO溶剂化物的代表性TGA热谱曲线和DSC热谱曲线。

图4示出了比美替尼DMSO溶剂化物的代表性

图5示出了实施例11中所述的比美替尼柠檬酸分子复合物的代表性X-射线粉末衍射(XRPD)图案。

图6示出了比美替尼柠檬酸分子复合物的代表性TGA热谱曲线和DSC热谱曲线。

图7示出了比美替尼柠檬酸分子复合物的代表性

图8示出了如下代表性XRPD叠加图：在储存前比美替尼柠檬酸(底部)，在40℃/75％RH(相对湿度)下储存10天后比美替尼柠檬酸(中间)，以及在25℃/97％RH下储存10天后比美替尼柠檬酸(顶部)。

图9示出了(a)比美替尼柠檬酸分子复合物，(b)比美替尼游离碱和(c)柠檬酸无水物的代表性FT-IR叠加图。

图10示出了(a)比美替尼柠檬酸分子复合物，(b)比美替尼游离碱和(c)柠檬酸无水物的代表性拉曼叠加图。

图11A-C示出了离心力如何被施加于Speedmixer

图11B为底板和笼状体的侧视图。

图11C为沿图11B中的线A从上方观察的视图。笼状体沿逆时针方向旋转。

图12为示出Rondol Microlab 10mm热熔融挤出机的代表性照片。

图13为示出具有输送和混合元件的热熔融挤出机螺杆设计的代表性照片。

图14为示出针对热熔融挤出机的溶剂添加设置的代表性照片。

具体实施方式

本发明试图克服与现有技术相关联的缺点。本发明提供了比美替尼的分子复合物，其为比美替尼二甲基亚砜(DMSO)溶剂化物。在某些实施方案中，该分子复合物是可纯化的。在某些实施方案中，并且根据时间、温度和湿度，该分子复合物是稳定的。在某些实施方案中，该分子复合物易于分离和处理。在某些实施方案中，用于制备该分子复合物的方法是可规模化的。

本发明的另一个目的是提供比美替尼的分子复合物，其为比美替尼和柠檬酸的结晶分子复合物。在某些实施方案中，该结晶分子复合物是可纯化的。在某些实施方案中，该结晶分子复合物是稳定的。在某些实施方案中，该结晶分子复合物易于分离和处理。在某些实施方案中，用于制备该结晶分子复合物的方法是可规模化的。

本文所述的结晶形式可使用本领域技术人员已知的多种方法来表征，包括单晶X-射线衍射、X-射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、红外光谱、拉曼光谱、核磁共振(NMR)光谱(包括溶液和固态NMR)。本文提供的结晶形式的纯度可通过标准分析方法来确定，诸如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)。

在一个方面，本发明提供了比美替尼的分子复合物，其为结晶比美替尼DMSO溶剂化物。该溶剂化物由一分子比美替尼与一分子DMSO组成。

该溶剂化物可具有包含选自下列的一个或多个峰(例如1、2、3、4、5、6、7或8个峰)的X-射线粉末衍射图案：约5.8、7.9、8.9、12.5、13.4、14.5、15.1、17.1、17.6、17.9、18.8、19.7、20.1、20.3、21.0、21.8、22.2、22.7、22.8、23.3、23.5、24.2、24.5、25.2、25.8、26.1、26.8、27.0、27.7、27.8、28.4、28.7、29.0、29.2、29.8、30.1、30.3和30.7度2θ±0.2度2θ。在一个实施方案中，该溶剂化物可具有包含约5.8、8.9、14.5、17.6、18.8、20.1、23.5和25.8度2θ±0.2度2θ处的峰的X-射线粉末衍射图案。在一个实施方案中，该溶剂化物可具有基本上如图1所示的X-射线粉末衍射图案。该溶剂化物的不对称单元看起来包含一个完全有序的比美替尼分子和一个完全有序的DMSO分子(参见图2)。

该溶剂化物可具有DSC热谱曲线，该DSC热谱曲线包括起始温度为约129.4℃的吸热事件；以及起始温度为约219.2℃的另一吸热事件。该溶剂化物可具有DSC热谱曲线，该DSC热谱曲线包括具有在约133.9℃处的峰的吸热事件；以及具有在约221.3℃处的峰的另一吸热事件。在一个实施方案中，该溶剂化物可具有基本上如图3所示的DSC热谱曲线。

该溶剂化物可具有TGA热谱曲线，该TGA热谱曲线包括当从约100℃加热至约175℃时约15.1％的第一质量损失；以及当从约175℃加热至约280℃时约11.5％的第二质量损失。在一个实施方案中，该溶剂化物可具有基本上如图3所示的TGA曲线图。

比美替尼DMSO溶剂化物可通过包括以下步骤的方法来制备：

(a)使比美替尼与DMSO接触；以及

(b)形成比美替尼在DMSO中的溶液。

DMSO的量没有特别限制，前提条件是DMSO足以充分溶解比美替尼，以形成溶液。如果悬浮液保持比美替尼与DMSO接触，则可加入第二量或其他量的DMSO，直至形成溶液。比美替尼与DMSO溶剂的比率可在约1g比美替尼：约0.5ml至约25ml DMSO的范围内，例如约1g比美替尼：约1.5ml至约20ml DMSO。

可在环境温度或更低的温度下使比美替尼与DMSO接触。另选地，可在高于环境温度即高于30℃并且低于反应混合物沸点的温度下使比美替尼与DMSO接触。该反应混合物的沸点可根据进行接触步骤的压力而变化。DMSO在大气压(即1.0135×10

可通过使用助剂诸如搅拌、摇动和/或超声处理来促进比美替尼的溶解。

该方法还可包括回收作为结晶固体的比美替尼DMSO溶剂化物的步骤。该结晶DMSO溶剂化物的回收可包括：

(c)用选自水、醇以及它们的混合物的反溶剂来处理步骤(b)中获得的溶液；以及

(d)回收作为结晶固体的比美替尼DMSO溶剂化物。

可使用可与DMSO混溶的任何合适的反溶剂。该反溶剂可选自水、甲醇、乙醇、丙醇(正或异)、丁醇(正、异或叔)、戊醇异构体、环戊醇、己醇异构体、环己醇或它们的混合物。在一个实施方案中，该反溶剂为水。在另一个实施方案中，该反溶剂为异丙醇。

加入足够的反溶剂，直到出现比美替尼DMSO溶剂化物的沉淀。

加入反溶剂后，可在环境温度下将反应混合物搅拌或摇动一段时间，直至形成浆液或悬浮液，例如过夜。

该DMSO溶剂化物的回收可包括在环境温度下蒸发DMSO溶剂。

另选地，可任选地将步骤(b)的反应混合物过滤(例如精良过滤)，加热至约70℃保持约5分钟，在一段时间内(例如小于1小时)冷却至环境温度，之后在环境温度或更低的温度下用反溶剂(例如用DMSO和反溶剂的某些混合物)处理。

另选地，可将步骤(c)的反应混合物搅拌一段时间(例如约80分钟)，然后以约1℃/分钟冷却至约5℃。可将该反应混合物在约5℃下搅拌约36小时。

虽然回收了该结晶DMSO溶剂化物，但可将分离的溶剂化物用醇洗涤并干燥。干燥可使用已知方法进行，例如，在约10℃至约60℃范围内的温度下，诸如约20℃至约40℃，例如，在真空(例如，约1毫巴至约30毫巴)下的环境温度下进行约1小时至约24小时。优选的是，将干燥条件保持在DMSO溶剂化物去溶剂化的点以下，因此当已知溶剂化物在上面给出的温度或压力范围内去溶剂化时，应将干燥条件保持在去溶剂化温度或真空以下。

在另一方面，本发明涉及包含如本文所述的比美替尼DMSO溶剂化物以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

在另一方面，本发明涉及用于抑制患者的MEK活性的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的如本文所述的比美替尼DMSO溶剂化物。

在另一方面，本发明涉及用于治疗患者的过度增殖性障碍的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的比美替尼DMSO溶剂化物。

在另一方面，本发明涉及用于抑制MEK活性的如本文所述的比美替尼DMSO溶剂化物。

在另一方面，本发明涉及用于治疗过度增殖性障碍的如本文所述的比美替尼DMSO溶剂化物。

在另一方面，本发明提供了比美替尼和柠檬酸的结晶分子复合物。

该分子复合物可具有包含选自下列的一个或多个峰(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个峰)的X-射线粉末衍射图案：约6.5、7.3、7.8、11.4、12.3、12.9、13.6、14.2、14.5、14.8、15.1、16.2、17.1、17.9、18.2、18.6、19.0、19.5、20.1、21.0、21.3、21.8、22.3、22.7、23.7、24.2、24.5、24.9、25.2、25.9、26.4、27.0、27.2、27.6、27.8、28.3、29.2、29.5、29.8、30.3和30.9度2θ±0.2度2θ。在一个实施方案中，该分子复合物可具有包含约7.3、11.4、12.3、13.6、14.2、14.5、17.9、18.2、20.1、21.8和24.9度2θ±0.2度2θ处的峰的X-射线粉末衍射图案。在一个实施方案中，该分子复合物可具有基本上如图5所示的X-射线粉末衍射图案。不受理论的束缚，比美替尼与柠檬酸的比率似乎为约1分子比美替尼：约0.5至约2分子柠檬酸，诸如约1分子比美替尼：约1分子柠檬酸。

该分子复合物可具有DSC热谱曲线，该DSC热谱曲线包括起始温度为约156.9℃的吸热事件。该分子复合物可具有DSC热谱曲线，该DSC热谱曲线包括具有在约160.3℃处的峰的吸热事件。在一个实施方案中，该分子复合物可具有基本上如图6所示的DSC热谱曲线。

该分子复合物可具有TGA热谱曲线，该TGA热谱曲线包括当从约100℃加热至约250℃时约25％的质量损失。在一个实施方案中，该分子复合物可具有基本上如图6所示的TGA曲线图。

比美替尼柠檬酸的分子复合物可通过包括使用低能球磨或低能研磨而使比美替尼与柠檬酸反应的方法来制备。

当利用低能球磨时，碾磨过程可由各种参数控制，包括碾磨发生的速度、碾磨时间的长度和/或碾磨容器被填充的水平。

碾磨发生的速度可为约200rpm至约5000rpm。在一个实施方案中，速度可为约75rpm至约750rpm。在另一个实施方案中，速度可为约80rpm至约600rpm。在一个实施方案中，速度可为约500rpm。

低能研磨可涉及摇动研磨容器内材料。在这种情况下，研磨经由容器内材料的冲击和摩擦而发生。该过程可由各种参数控制，包括研磨发生的频率、研磨时间的长度和/或容器被填充的水平。

研磨发生的频率可为约1Hz至约100Hz。在一个实施方案中，频率可为约10Hz至约70Hz。在另一个实施方案中，频率可为约20Hz至约50Hz。在一个实施方案中，频率可为约30Hz。

碾磨或碾磨介质可用于帮助反应。在这种情况下，硬质无污染介质的掺入可另外有助于其中例如由于制造过程或在运输期间已发生附聚的颗粒的分解。此类附聚物分解进一步增强了比美替尼与柠檬酸的反应。碾磨/碾磨介质的使用在粉末加工领域内是熟知的，并且诸如稳定的氧化锆和其他陶瓷的材料是合适的，前提条件是它们足够硬或为滚珠，例如不锈钢滚珠。

另选地，低能研磨可包括用研杵和研钵进行手动研磨。

无论是否使用碾磨或研磨，都可通过控制颗粒比率、碾磨/碾磨介质的尺寸和技术人员熟悉的其他参数来对工艺进行改进。

碾磨或研磨时间的长度可为约1分钟至约2天，例如约10分钟至约5小时，诸如约20分钟至3小时。碾磨或研磨时间的长度可为连续的或聚集的时间段。“连续的”和“聚集的”定义如下。

该过程可在潮湿环境中进行。例如，可醇溶剂诸如甲醇和/或乙醇加入至比美替尼和柠檬酸的混合物。醇溶剂(例如甲醇和/或乙醇)可起到使颗粒焊接最小化的作用。如果所反应的比美替尼和/或柠檬酸在使用前已附聚，则加入醇溶剂(例如甲醇和/或乙醇)可为尤其有用的，在这种情况下，醇溶剂(例如甲醇和/或乙醇)可有助于分解附聚物。

添加的溶剂的量没有特别限制，前提条件是添加足够的溶剂以弄湿(即“润湿”)掺混物，但添加的溶剂的量不会大到使掺混物变得过于液态的程度。总固体与所添加的总溶剂的w/v比率(比美替尼和柠檬酸)可在约1g总固体：约0.1至约2ml所添加的总溶剂的范围内，诸如约1g总固体：约0.5ml至约1.5ml总溶剂，例如约1g总固体：约0.75ml至约1.25ml总溶剂。在一个实施方案中，总固体与总溶剂的w/v比率(比美替尼和柠檬酸)可为约1g总固体：约1ml总溶剂。溶剂可以一个部分或多于一个部分(例如1、2、3、4或5个部分)添加。

比美替尼可作为游离碱、无水物或作为溶剂化物(诸如比美替尼DMSO溶剂化物)存在。

柠檬酸可作为游离酸、无水物或水合物(例如一水合物)存在。

柠檬酸可以与比美替尼的化学计量或过量摩尔当量而存在。在一个实施方案中，柠檬酸以化学计量的量存在。

另选地，比美替尼柠檬酸分子复合物可通过包括以下步骤的方法来制备：向比美替尼和柠檬酸的混合物施加双重不对称离心力以形成该分子复合物。

使用双重不对称离心力来形成比美替尼柠檬酸的分子复合物。所谓“双重不对称离心力”意指向颗粒同时施加彼此成一角度的两个离心力。为了产生有效的混合环境，离心力优选地沿相反的方向旋转。Hauschild的The Speedmixer

该过程可由各种参数控制，包括过程发生的旋转速度、加工时间的长度、混合容器被填充的水平、碾磨介质的使用和/或碾磨罐内组分的温度的控制。

可将双重不对称离心力施加连续的时间段。所谓“连续的”意指无中断的时间段。该时间段可为约1秒至约10分钟，诸如约5秒至约5分钟，例如约10秒至约200秒，例如2分钟。

另选地，可施加双重不对称离心力聚集的时间段。所谓“聚集”意指多于一个时间段的总和或总数(例如，2、3、4、5或时间段)。以逐步方式施加离心力的优点在于可避免颗粒的过度加热。可施加双重不对称离心力约1秒至约20分钟，例如约30秒至约15分钟，以及诸如约10秒至约10分钟例如6分钟的聚集的时段。在一个实施方案中，以其间具有冷却周期的逐步方式施加双重不对称离心力。在另一个实施方案中，可以逐步方式以一个或多个不同的速度施加双重不对称离心力。

双重不对称离心力的速度可为约200rpm至约4000rpm。在一个实施方案中，速度可为约300rpm至约3750rpm，例如约500rpm至约3500rpm。在一个实施方案中，速度可为约3500rpm。在另一个实施方案中，速度可为约2300rpm。

混合容器被填充的水平由技术人员将显而易见的各种因素决定。这些因素包括比美替尼和柠檬酸的表观密度、混合容器的体积和施加在混合器自身上的重量限制。

如上所述的碾磨介质可用于帮助反应。在某些实施方案中，可以逐步方式施加双重不对称离心力，其中碾磨介质可用于一些但不是所有的时间段。

该过程可在潮湿环境中进行。例如，可醇溶剂诸如甲醇和/或乙醇加入至比美替尼和柠檬酸的混合物。醇溶剂(例如甲醇和/或乙醇)可起到使颗粒焊接最小化的作用。如果所反应的比美替尼和/或柠檬酸在使用前已附聚，则加入醇溶剂(例如甲醇和/或乙醇)可为尤其有用的，在这种情况下，醇溶剂(例如甲醇和/或乙醇)可有助于分解附聚物。

添加的溶剂的量没有特别限制，前提条件是添加足够的溶剂以弄湿(即“润湿”)掺混物，但添加的溶剂的量不会大到使掺混物变得过于液态的程度。总固体与所添加的总溶剂的w/v比率(比美替尼和柠檬酸)可在约1g总固体：约0.1至约2ml所添加的总溶剂的范围内，诸如约1g总固体：约0.5ml至约1.5ml总溶剂，例如约1g总固体：约0.75ml至约1.25ml总溶剂。在一个实施方案中，总固体与总溶剂的w/v比率(比美替尼和柠檬酸)可为约1g总固体：约1ml总溶剂。溶剂可以一个部分或多于一个部分(例如1、2、3、4或5个部分)添加。

当施加双重不对称离心力达聚集的时间段时，可针对每个时间段改变润湿或干燥的环境。例如，该过程可包括第一时间段，其中环境是干燥的(即，在不存在溶剂的情况下，使比美替尼和柠檬酸任选地与碾磨介质一起反应)；以及第二时间段，其中环境在添加溶剂之后是润湿的。

比美替尼可作为游离碱、无水物或作为溶剂化物(诸如比美替尼DMSO溶剂化物)存在。

柠檬酸可作为游离酸、无水物或水合物(例如一水合物)存在。

柠檬酸可以与比美替尼的化学计量或过量摩尔当量而存在。在一个实施方案中，柠檬酸以化学计量的量存在。

另选地，比美替尼柠檬酸分子复合物可通过包括以下步骤的方法来制备：

(a)提供比美替尼和柠檬酸的掺混物；以及

(b)将所述掺混物喂送通过挤出机以形成比美替尼柠檬酸分子复合物。

该掺混物为比美替尼和柠檬酸的共混物。该掺混物可通过经由任何合适的装置，例如通过使用管式共混机，将比美替尼和柠檬酸混合合适的时间段例如约30分钟来制备。期望但非必需的是制备比美替尼和柠檬酸的均匀共混物。

比美替尼可作为游离碱、无水物或作为溶剂化物(诸如比美替尼DMSO溶剂化物)存在。

柠檬酸可作为游离酸、无水物或水合物(例如一水合物)存在。

柠檬酸可以与比美替尼的化学计量或过量摩尔当量而存在。在一个实施方案中，柠檬酸以化学计量的量存在。

在制备该掺混物时不形成分子复合物。在将该掺混物喂送通过挤出机时，比美替尼和柠檬酸共结晶以形成分子复合物。

挤出机通常包括在静止筒体内的一个或多个旋转螺杆，其中模头位于筒体的一端。沿螺杆的整个长度，通过一个或多个螺杆在筒体内的旋转来提供该掺混物的共结晶。挤出机可分为至少三个区段：喂送区段；加热区段和计量区段。在喂送区段中，该掺混物被喂送到挤出机中。该掺混物可在需要或不需要溶剂的情况下被直接添加至喂送区段。在加热区段中，该掺混物被加热至如下温度，该温度使得当该掺混物穿过该区段时，比美替尼和柠檬酸共结晶以形成分子复合物。可任选地在加热区段中添加溶剂。在加热区段之后为任选的计量区段，其中该分子复合物可通过模头挤出成特定形状，例如颗粒。挤出机可为单螺杆挤出机、双螺杆挤出机、多螺杆挤出机或交叉螺杆挤出机。在一个实施方案中，挤出机为双螺杆挤出机，例如共转双螺杆挤出机。

该掺混物可以任何合适的速度被喂送到喂送区段中。例如，喂送区段的速度可为约1rpm至约100rpm。在一个实施方案中，速度可为约5rpm至约80rpm。在一个实施方案中，速度可为约10rpm。在另一个实施方案中，速度可为约20rpm。

在某些实施方案中，当将该掺混物喂送到喂送区段中时，向该掺混物添加溶剂。另选地或除此之外，当该掺混物穿过加热区段时，可在加热区段的一个或多个区(例如1、2、3、4或5个区)中添加一次或多次(例如1、2、3、4或5次)溶剂。这可有利于防止该掺混物在材料移动通过加热区段时变干。溶剂可为醇溶剂，诸如甲醇和/或乙醇。在一个实施方案中，醇溶剂为甲醇。

添加的溶剂的量没有特别限制，前提条件是添加足够的溶剂以弄湿(即“润湿”)掺混物，但添加的溶剂的量不会大到使掺混物变得过于液态的程度。当挤出机为双螺杆挤出机时，总固体与所添加的总溶剂的w/v比率(比美替尼和柠檬酸)可在约1g总固体：约0.1至约2ml所添加的总溶剂的范围内，诸如约1g总固体：约0.5ml至约1.5ml总溶剂，例如约1g总固体：约0.75ml至约1.25ml总溶剂。在一个实施方案中，总固体与总溶剂的w/v比率(比美替尼和柠檬酸)为约1g总固体：约1ml总溶剂。

加热区段可在其整个长度上被加热至单个温度，或者其可被分成不止一个(例如，2个、3个、4个或5个)区，这些区中的每个区可独立于其他区被加热。加热区段或每个区的温度没有特别限制，前提条件是在离开加热区段时，比美替尼和柠檬酸已共结晶以形成分子复合物，并且比美替尼、柠檬酸和/或分子复合物均全部不为基本上降解的或基本上分解的。

当挤出机为双螺杆挤出机时，可如上所述将加热区段分成不止一个区，并且每个区可被独立地加热至约≥环境温度(例如，约≥25℃)至约≤115℃范围内的温度。

当挤出机包括螺杆时，一个螺杆(或多个螺杆)和加热区段可重合，即一个螺杆(或多个螺杆)也可为加热区段。

一个螺杆(或多个螺杆)旋转的速度可为任何合适的速度。例如，一个螺杆(或多个螺杆)的速度可为约1rpm至约500rpm。在一个实施方案中，速度可为约5rpm至约400rpm，诸如约10rpm至约100rpm。在一个实施方案中，速度可为约25rpm。在另一个实施方案中，速度可为约50rpm。在另一个实施方案中，速度可为约75rpm。

无论比美替尼柠檬酸分子复合物的制备过程如何，均将它以结晶固体形式回收。该结晶分子复合物可通过过滤、滗析、离心或收集结晶产物而被直接回收。如果需要，可在回收该结晶固体之前蒸发一定比例的溶剂(如果存在)。

虽然回收了该结晶分子复合物，但可将分离的分子复合物干燥。干燥可使用已知方法进行，例如，在约10℃至约60℃范围内的温度下，诸如约20℃至约40℃，例如，在真空(例如，约1毫巴至约30毫巴)下的环境温度下进行约1小时至约24小时。另选地，可使该结晶分子复合物在环境温度下自然干燥，即不主动施加真空。优选的是，将干燥条件保持在分子复合物降解的点以下，因此当已知分子复合物在上面给出的温度或压力范围内降解时，应将干燥条件保持在降解温度或真空以下。

在另一方面，本发明涉及包含如本文所述的比美替尼柠檬酸分子复合物以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

在另一方面，本发明涉及用于抑制患者的MEK活性的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的如本文所述的比美替尼柠檬酸分子复合物。

在另一方面，本发明涉及用于治疗患者的过度增殖性障碍的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的比美替尼柠檬酸分子复合物。

在另一方面，本发明涉及用于抑制MEK活性的如本文所述的比美替尼柠檬酸分子复合物。

在另一方面，本发明涉及用于治疗过度增殖性障碍的如本文所述的比美替尼柠檬酸分子复合物。

上文已描述了本发明的实施方案和/或任选的特征。除非上下文另外要求，否则本发明的任何方面可与本发明的任何其他方面组合。除非上下文另外要求，否则任何方面的实施方案或任选的特征中的任一者可单独地或组合地与本发明的任何方面组合。

现在将参考以下实施例来进一步描述本发明，这些实施例旨在说明而非限制本发明的范围。

使用Cu Kα辐射(40kV,40mA)和配有Ge单色器的θ-2θ测角计，在Bruker D8衍射仪上采集XRPD衍射图。入射光束穿过2.0mm发散狭缝，然后穿过0.2mm抗散射狭缝和刀刃。衍射光束穿过8.0mm的接收狭缝，该接收狭缝具有2.5°索勒狭缝，之后是Lynxeye检测器。用于数据采集和分析的软件分别为Diffrac Plus XRD Commander和Diffrac Plus EVA。

使用原样粉末在环境条件下作为平板样本来运行样品。通过轻轻按压到平坦表面上或填充到切割腔体中来在抛光的零背景(510)硅晶片上制备样品。使样品在其自身的平面内旋转。

标准采集方法的细节为：

·角范围：2至42°2θ

·步长：0.05°2θ

·采集时间：0.5s/步(总采集时间：6.40min)

在配备有50位自动取样器的TA仪器Q2000或Discovery TGA上采集DSC数据。通常，将销孔铝盘中0.5–3mg的每个样品以10℃/min从25℃加热至300℃(对于比美替尼DMSO溶剂化物)或以10℃/min从25℃加热至235℃(对于比美替尼柠檬酸分子复合物)。在样品上保持50ml/min的干燥氮气吹扫。

仪器控制软件为TRIOS，并且使用TRIOS或通用分析来分析数据。

在配备有16位自动取样器的TA仪器Q500或Discovery TGA上采集TGA数据。通常，将5–10mg的每个样品加载到预配衡DSC铝盘上并以10℃/min从环境温度加热至350℃。在样品上保持60ml/min的氮气吹扫。

仪器控制软件为Advantage for Q Series和Thermal Advantage，并且使用TRIOS或通用分析来分析数据。

在配备有自动取样器并由DRX400控制台控制的Bruker 400MHz仪器上采集

在配有通用衰减全反射(ATR)采样附件的Perkin-Elmer Spectrum One上经过16次扫描来采集4000–650cm

在Renishaw inVia Qontor上采集数据。使用WiRE来完成仪器控制和背景扣除处理。使用ACD Spectrus处理器来完成数据呈现。

方法：激发源，λ

在配备有Oxford Cryosystems Cobra冷却装置的Rigaku Oxford DiffractionSupernova Dual Source,Cu at Zero,Atlas CCD衍射仪上采集数据。使用Cu Kα辐射来采集数据，如实验表中所述。使用Bruker AXS SHELXTL套件或OLEX

使用ChemStation或OpenLAB软件，在配备有二极管阵列检测器的AgilentHP1100/Infinity II 1260系列系统上进行纯度分析。完整的方法细节提供如下：

DMSO： 二甲基亚砜

eq.： 当量

HME： 热熔融挤出

IPA： 异丙醇

MeOH： 甲醇

min： 分钟

在环境温度下，将递增的DMSO等分试样添加至比美替尼(15mg,97.5％纯度)，直至观察到溶解(总计300μl)。在添加之间，将样品在环境温度下摇动大约30秒。在环境条件下蒸发溶剂。

将比美替尼(大约50mg,97.5％纯度)悬浮于DMSO(总计20体积；共1ml)并在环境温度下搅拌15分钟以得到澄清溶液。添加所选反溶剂(IPA或水)的递增等分试样(总计60体积；共3ml)并在环境温度下搅拌样品。在搅拌过夜后，将悬浮液的等分试样过滤并在XRPD分析之前抽吸干燥几分钟。将主体样品过滤并真空干燥大约1小时。

将比美替尼(大约2g,97.5％纯度)用DMSO(15体积；共30ml)处理并在70℃下搅拌15分钟。将溶液精良过滤并在70℃下搅拌5分钟，然后以1℃/min冷却至25℃。将澄清溶液用IPA(60体积；共120ml)处理并在25下搅拌。4小时后，获得悬浮液。在表征之前，将等分试样过滤并抽吸干燥几分钟。

将主体样品过滤并抽吸干燥20分钟，然后在25℃的真空烘箱中干燥4小时。

将比美替尼(大约8g,97.5％纯度)悬浮于DMSO(1体积；8ml)并在100℃下搅拌70分钟。当样品保持悬浮液时，添加另外的DMSO(0.5体积；4ml)。25分钟后，获得澄清溶液。

将溶液以1℃/min冷却至25℃。将IPA(9体积；72ml)在25分钟内添加至所得悬浮液。将样品在25℃下搅拌80分钟，然后以1℃/min冷却至5℃，并在5℃下搅拌大约36小时。将样品过滤并用1体积的IPA(共16ml)洗涤两次。将样品抽吸干燥<1分钟，并在环境温度下真空干燥1小时。收率：80％

在100K下确定比美替尼DMSO溶剂化物的晶体结构，并且结构数据的汇总可见于表1和2中。比美替尼DMSO溶剂化物在正交晶体系中结晶，空间群P2

表3提供了比美替尼DMSO溶剂化物的XRPD峰列表。

比美替尼DMSO溶剂化物还表征如下：

·TGA和DSC分析(参见图3)；以及

·

将比美替尼(大约30mg)和1.0当量(大约13mg)的柠檬酸分配到HPLC小瓶中，并加入两个不锈钢研磨球(3mm直径)。加入溶剂(MeOH,10μl)并使样品在Fritsch行星式碾磨机(500rpm,2小时持续时间)上经受研磨。通过XRPD来分析所获得的固体，并且该固体被鉴定为比美替尼柠檬酸分子复合物。

将比美替尼(500mg)和1.0当量的柠檬酸(大约218mg)分配到研磨罐(25ml)中，并加入一个氧化锆研磨球(20mm直径)。加入甲醇(90μl)并使样品在Retsch碾磨机(30Hz,30分钟)上经受研磨。通过XRPD来分析所获得的固体，并且该固体被鉴定为比美替尼柠檬酸分子复合物。

将比美替尼DMSO溶剂化物(60mg)和2.0当量的柠檬酸(大约44mg)分配到HPLC小瓶中，并加入两个不锈钢研磨球(3mm直径)。加入MeOH(30μl)并使样品在Fritsch行星式碾磨机(500rpm,20分钟)上经受研磨。通过XRPD来分析研磨后获得的固体，并且该固体被鉴定为比美替尼柠檬酸分子复合物。

将比美替尼(699mg)和1.0当量的柠檬酸(305mg)加入塑料容器(PP10)并在得自Speedmixer

表4提供了比美替尼柠檬酸分子复合物的XRPD峰列表。

比美替尼柠檬酸分子复合物还表征如下：

·TGA和DSC分析(参见图6)；以及

·

·在三个储存条件下的稳定性研究。图8示出了如下比美替尼柠檬酸的XRPD叠加图：在储存前(底部)，在40℃/75％RH下储存10天后(中间)，以及在25℃/97％RH下储存10天后(顶部)。分子复合物在两种不同的温度和湿度条件下保持稳定至少10天。

·FT-IR分析(参见图9)。图9示出了(a)比美替尼柠檬酸分子复合物，(b)比美替尼游离碱和(c)柠檬酸无水物的FT-IR叠加图。

·拉曼分析(参见图10)。图10示出了(a)比美替尼柠檬酸分子复合物，(b)比美替尼游离碱和(c)柠檬酸无水物的拉曼叠加图。

·通过

ο表示在比美替尼：柠檬酸中，比美替尼分子的甲基咪唑部分中的氮均未被质子化。因此，比美替尼：柠檬酸样品符合为共晶体而不是盐。

ο在比美替尼：柠檬酸样品中观察到具有长O-H键长(估计约

ο比美替尼：柠檬酸晶胞中存在两个晶体学上不等同的比美替尼分子。

为确保均匀混合，将手工研磨用于用甲醇或乙醇润湿的比美替尼和柠檬酸的混合物。

将比美替尼(4.0g)和柠檬酸(1.74g)加入到大理石研杵中，并且在存在甲醇(2ml)的情况下，使用研钵手动研磨混合10分钟。然后用另外的甲醇将组分润湿至总计5.7ml，并且用手研磨10分钟。此后，使湿浆料风干10分钟，然后重新研磨10分钟。将该过程再重复一次，直到获得粘附到研杵的干燥固体。将该固体刮入烧杯中，并在50℃下真空干燥过夜。通过XRPD、1H NMR和热技术来分析所得固体以确认分子复合物的形成。

将比美替尼(1.00g)和一水合柠檬酸(0.48g)加入到大研杵中，并在存在乙醇(1体积，1.5ml)的情况下，手动研磨混合10分钟。此后，使湿浆料风干10分钟，然后重新研磨10分钟。将该过程再重复一次，直到获得粘附到研杵的干燥固体。将该固体刮入20ml小瓶中并短暂风干。通过XRPD来分析所得固体以确认分子复合物的形成。

将Rondol Microlab 10mm热熔融挤出机(在这种情况下为双螺杆挤出机)(参见图12)用于所有实验。值得注意的挤出机部件是喂料机、向挤出机提供混合起始材料的喂料机过滤器、以及容纳共转双螺杆的筒体。挤出机筒体具有四个可控温度区(排除模头区)。对于这些实验，不使用模头。

挤出机筒体的温度在25℃至115℃之间变化。制备起始组分的化学计量(摩尔)共混物，并使用管式共混机混合30分钟，然后装入挤出机中。喂料机速度可在10rpm和80rpm之间变化，并且螺杆速度可增加至400rpm的最大值。螺杆构型示于图13中。螺杆设计设置有用于输送和混合的交替10mm区段。区1为具有最小混合能力的纯输送区。区2为高混合元件。对于区3和区4，分别重复该输送和混合元件。每个实验处理在3g和10g之间的材料。

对于涉及溶剂添加的HME实验，使用机械注射器泵来精确地控制溶剂添加速率。在区1中进行溶剂添加。这示于图14中。

通过在管式共混机上共混30分钟，将比美替尼(3.00g)和一水合柠檬酸(1.42g)物理地混合以得到均匀样品。使该混合物在多个温度下穿过热熔融挤出机(HME)。

在不使用溶剂的情况下，使用比美替尼/一水合柠檬酸的物理混合物(1:1)进行若干HME实验。在这些研究中，研究了温度对材料的物理外观和稠度的影响，以及是否可使用无溶剂程序实现分子复合物的结晶。此外，进行HPLC分析以研究温度对化学完整性(纯度)的影响。

在这些研究中，吞吐量(或喂送速率)在20rpm下保持一致。然而，据发现，螺杆速度具有穿过仪器的材料的稠度的明显影响。在较低的螺杆速度下，发现材料穿过仪器而颜色或物理外观没有任何变化。然而，在较高的螺杆速度下，增加的机械应力似乎导致材料上一定程度的变色。

关于温度对材料的影响，当筒体保持在25℃时，发现材料穿过仪器。然而，XRPD分析显示未发生向所需分子复合物的转化。还在115℃下挤出，因为在该温度下，一水合柠檬酸预期脱水，从而得到可有利于结晶的一些水溶剂。

然而，观察到离开挤出机的材料是熔融的并且颜色为灰色。该材料的XRPD分析符合比美替尼柠檬酸分子复合物。HPLC显示已发生了显著降解(89.1％纯度读数)。

这些结果汇总于下表5中：

*：相当

N/A：不适用

通过在管式共混机上共混30分钟，将比美替尼(3.00g)和一水合柠檬酸(1.42g)物理地混合以得到均匀样品。使混合物穿过挤出机，其中向区1另外滴加MeOH。

将比美替尼和柠檬酸以1:1的比率加入到挤出机喂料机。进行一系列的筛选实验，其中将喂料机速度调节至10-20rpm，并且将螺杆速度保持在50rpm。筛选参数集中于挤出机温度和溶剂添加速率之间的关系。针对这些实验选择的溶剂为MeOH。

在低温(25℃)下以两个不同的溶剂添加速率进行两个实验。以高MeOH添加速率(10μl/s)的挤出导致离开筒体的材料太湿。将MeOH的速率降低至2.5μl/s确保了物理混合物保持良好的固体稠度。通过XRPD和HPLC来表征来自2.5μl/s MeOH添加(25℃)的挤出材料。XRPD符合比美替尼柠檬酸分子复合物。

进行两个另外的筛选实验，其中MeOH添加速率增加至5μl/s，并且温度分别增加至50℃和60℃。挤出材料的表征均确认了比美替尼柠檬酸分子复合物的生成。此外，观察到MeOH添加位点处的结块减少。

这些结果汇总于下表6中：

*：相当

N/A：不适用